בינוני לוונשטיין-ג'נסן: בסיס, הכנה ושימוש - ביולוגיה - 2025

לוינשטיין-ג'נסן בינוני הוא מדיום מוצק סלקטיבית עבור בידוד התפתחות חיידקים של הסוג Mycobacterium, כגון שחפת Mycobacterium, avium M., בין היתר, למעט המין leprae, אשר אינו culturable.

חיידקים של הסוג Mycobacterium אינם גדלים בתקשורת תרבותית קונבנציונאלית, ולכן היה צורך לעצב מדיום מיוחד לבידודם. המדיום המקורי נוצר על ידי לוונשטיין ושונה אחר כך על ידי ג'נסן.

בינוני לוונשטיין-ג'נסן עם מושבות של שחפת Mycobacterium. מקור: Agarwal et al / BioMed Central Ltd., באדיבות ספריית התמונות לביולוגיה

השינוי כלל חיסול הצבע האדום בקונגו, והחליף אותו בריכוז גבוה יותר של ירוק מלכיט. זה גם שינה את ריכוזי המגנזיום ציטרט והמונופוטסיום פוספט.

בינוני לוונשטיין-ג'נסן מכיל כיום עמילן תפוחי אדמה, אספרגין, מגנזיום ציטרט, מונופוטסיום פוספט, מגנזיום סולפט, ירוק מלכיט, חומצה נלידיקסית, ציקלוהקסימיד, לינקומיצין, ביצים טרופות, גליצרין ומים.

Mycobacteria מבודדים בדרך כלל מאתרים שאינם סטריליים, כמו כיח, שתן, מורסות, בין היתר. משמעות הדבר היא שרוב הדגימות יכילו את המיקרוביוטה הרגילה של האזור, בתוספת הפתוגן.

לכן המדיום לוונשטיין-ג'נסן מכיל סדרה של מעכבים בהרכבו המיוצג על ידי ירוק מלכיט, אנטיביוטיקה ונוגדי פטריות.

בנוסף, יש לנטרל ולנטרל דגימות המגיעות מאתרים לא סטריליים לפני שנזרע במדיום לוונשטיין-ג'נסן.

בָּסִיס

הימצאותן של ביצה וגליצרין במדיום לוונשטיין-ג'נסן ממריצה את צמיחת המיקובקטריה מכיוון שהם מספקים את חומצות השומן והחלבונים הנחוצים להתפתחות של מיקרואורגניזמים אלה.

בינוני לוונשטיין-ג'נסן מכיל ירוק מלכיט, המהווה מעכב למיקרוביוטה המלווה. אך היא מכילה גם חומצה נלידיקסית (35 מיקרוגרם / מ"ל), המעכבת את המיקרוביוטה השלילית של גראם, ציקלוהקסימיד (400 מיקרוגרם / מ"ל), המעכבת פטריות ושמרים ספראופטיים, ולינקומיצין (2 מיקרומוטה).

חלק מהבתים המסחריים מעדיפים להוסיף את השילוב הבא של אנטיביוטיקה: פולימיקסין B 200,000 יחידות / ל ', אמפרוטריצין B 10 מ"ג / ל', קרבניצילין 50 מ"ג / ל 'וטרמתופרים 10 מ"ג / ל'.

מדיום זה אינו מכיל אגר, ולכן מיצוק המדיום מתרחש עקב קרישת האלבומין הקיימת בביצה במהלך הסטריליזציה.

הכנה

שקלו 37.3 גרם מהמדיום המיובש ב 600 מ"ל מים מזוקקים שאליהם נוספו בעבר 12 מ"ל גליצרול. התערובת מחוממת, תוך ערבוב תדיר עד להמסה מוחלטת. שים את המדיום אוטומטית בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

מצד שני, יש להכין מתלה הומוגני של 1000 מ"ל ביצים טריות בתנאים אסתטיים. הוסף את מתלה הביצה ל 600 מ"ל המדיום שהוכן בטמפרטורה של 50 - 60 מעלות צלזיוס, הימנע מבועות אוויר.

פתרונות אנטיביוטיים מתווספים גם לאחר עיקור בחיטוי.

שופכים את המדיום לתוך מבחנות סטריליות עטופות בורג. מחממים את הצינורות בחום של 85 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות במצב נוטה.

צבע המדיום המוכן הוא ירוק אקוומרין ועשוי להציג כתמים לבנבן עקב נוכחות של שומנים בביצים.

PH של המדיום חייב להיות 7.2 ± 0.2

יש לאחסן צינורות במקרר ולהגן מפני אור ישיר עד לשימוש. מזג לפני הזריעה.

יש שינוי במדיום שנקרא "שינוי גרופט של לוונשטיין ג'נסן". זה מכיל את אותם תרכובות כמו המדיום הקלאסי אך מתווסף RNA-5mg / 100 ml, וכמעכבים הוא מכיל 0.025 גרם / 100 מ"ל ירוק מלכיט, פניצילין 50 U / ml וחומצה נלידיקסית 35 ug / ml.

יישומים

בינוני לוונשטיין-ג'נסן משמש לבידוד Mycobacteria מסוגים שונים של דגימות. כתם Ziehl-Neelsen מומלץ לכל דגימה בה יש חשד לנוכחות mycobacteria.

חלק מהדגימות מגיעות מאתרים סטריליים אך אחרות לא. יש לטהר דגימות לא סטריליות לפי הצורך:

כיח

יש לטשטש דגימות כיח כדלקמן: קבע את כמות דגימת הלוט במיל"מ והוסף את אותה כמות של NaOH של 4% לדגום ודגור על 37 מעלות צלזיוס.

לנער את התערובת לעיתים קרובות תוך 30 דקות. לאחר מכן צנטריפוגה במהירות 3000 RPM למשך 30 דקות.

השליך את הסופר-נפט על גבי תמיסת חיטוי פנולית. השתמש במשקע לזרעה, אך תחילה יש לנטרל את ה- pH.

כדי לנטרל את המשקעים משתמשים ב 5% H ₂ SO ₄ בנוכחות האינדיקטור האדום של הפנול עד שהוא מגיע ל- pH ניטרלי הגורם לצבע סלמון.

שטיפה קיבה, שטיפת סימפונות, וסימפונות

במקרה זה, יש לצנטר את הדגימה בסיבוב 3000 סל"ד למשך 30 דקות. הסופר-נפט זורק ומשמש את הכדורה. לניקוי המשקעים, הוסיפו 3 מ"ל של NaOH של 4% וערבבו בתדירות גבוהה ב 37 מעלות צלזיוס למשך חצי שעה.

צנטריפוגה שוב, הסופר-נפט מושלך ומשמש את הגלולה. יש לנטרל את האחרון כפי שהוסבר במדגם הלוט.

שֶׁתֶן

אפשר לדגימה להתיישב במקרר למשך 24 שעות. הפרד את העל-טבעי. יש לצנטר את הגלולה שנותרה במשך 30 דקות ב 3000 RMP. השליך את הסופר-נפט ושחזר את הגלולה מחדש עם 3 מ"ל של תמיסה פיזיולוגית סטרילית.

הוסף 3 מ"ל של NaOH של 4% והמשיך לטיהור ולנטרול כמתואר קודם.

מיימת נוזל, נוזל pleural, נוזל מוחי עמוד שדרה

בסוג זה של דגימה הוא נמצא בצנטריפוגה והסופר-נפט מושלך. בצע גרם על המשקעים או התבונן ישירות תחת המיקרוסקופ; אם לא נצפים חיידקים, שלב הטיהור אינו הכרחי, וגם לא שלב הנטרול.

במקרה זה ניתן להזריק את הדגימה ישירות באמצעות המשקעים. אם יש חיידקים, המשך לטיהור ולנטרול כמתואר לעיל.

ביופסיות

לסוג זה של דגימה יש להוסיף 5 מיליליטר של מים מזוקקים לצנטריפוגה מאוחרת יותר ב 1500 סל"ד למשך 10 דקות. השליך את הסופר-נוזל ומרכז מחדש את הגלולה על 3500 סל"ד למשך 30 דקות. השתמש במשקע כדי לזרוע את מדיום התרבות.

ספוגית רחם

יש למקם את הספוגית בצינור סטרילי המכיל חלקים שווים מים מזוקקים ו -4% NaOH. יש ללחוץ על הספוגית אל דפנות הצינור כך שתדלל את הדגימה בנוזל. צנטריפוגה והשתמש במשקעים. נטרלי את המשקעים כפי שכבר תואר.

זָרוּעַ

המדיום לוונשטיין-ג'נסן מחוסן על ידי הוספת 0.5 מ"ל מהדגימה על פני המדיום. סובב את הצינור כדי להפיץ את הדגימה בכל המדיום. אל תשתמש בידית פלטינה.

ניתן לזרע צינור שני המכיל מדיום סטונברינק על מנת לבודד את Mycobacterium bovis ומינים אחרים שאינם צומחים במדיום לוונשטיין-ג'נסן.

דְגִירָה

הצינורות המחוסנים מודגרים בצורה אירובית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, כאשר המכסה מעט רופף ומוטה כ -5 מעלות ומוגן מפני אור. ניתן להעשיר את הסביבה עם 5-10% דו תחמוצת הפחמן. בדוק תרבויות פעמיים בשבוע עד להופעת מושבות.

כאשר הדגימה נקלטה, הכובעים מתהדקים. זמן הדגירה המרבי הוא 8 שבועות, אם לאחר זמן זה אין צמיחה, הוא מדווח כשלילי.

QA

הזנים הבאים יכולים לשמש כבקרת איכות:

Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294, Mycobacterium kansasii ATCC 12478, Mycobacterium avium ATCC 19291, Mycobacterium bovis ATCC 19219, Mycobacterium fortuitum ATCC 6841, Escherichia coli ATCC 25922, Streptococcus Coccoccoc 320 Cococcus 320 של Coccos 320 של Coccus Coccos 320

התפתחות מצוינת צפויה לשלושת המינים הראשונים שהוזכרו, שכן צמיחה של M. fortuitum צריכה להיות טובה ואילו עבור M. bovis צפויה צמיחה מועטה או לא. בינתיים, יש לעכב באופן מלא מינים שאינם הסוג Mycobacterium.

מגבלות

יש להגן על המדיום המוכן מפני אור, חשיפה ממושכת לאור גורמת למדיום להפוך מירוק לכחול, במקרה זה כבר לא ניתן להשתמש במדיום. הסיבה לכך היא שירוק מלאכיט הוא רגיש לאור.

המדיום, מכיוון שהוא מכיל ביצים, יכול להיות מזוהם בקלות אם אינו מטופל בצורה אספטית. ניתן להמיס אותו אם הוא מזוהם בחיידקים פרוטאוליטיים.

גידול וטיפול בחיידקים מהסוג Mycobacterium דורשים כוח אדם מוסמך, המודע לאמצעי הביטחון הביולוגי שיש לנקוט בכדי להימנע מזיהום או זיהום של אחרים.

אין להשתמש ב- HCl בשלב הנטרול עקב היווצרות נתרן כלוריד, שיכול להיות רעיל לביצילוס של קוך.

יש לשמור על דגימות בקירור ולהגן מפני אור תוך כדי עיבוד.

התייחסות

1. מעבדות פרנסיסקו סוריה מלגיזו. 2009. מדיום סלקטיבי של לוונשטיין-ג'נסן. ניתן להשיג ב: f-soria.es
2. מעבדות בריטניה. 2017. בינוני לוונשטיין-ג'נסן. ניתן להשיג ב: britanialab.com.
3. מעבדות Neogen. בינוני לוונשטיין-ג'נסן. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com.
4. "בינוני לוונשטיין-ג'נסן." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 20 נובמבר 2018, 15:15 UTC. 24 באפריל 2019, 18:34. wikipedia.org
5. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
6. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
7. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.