מכתים שליליים: רציונל, טכניקה, יתרונות וחסרונות - ביולוגיה - 2025

המכתים השלילי הוא שיטת צביעה מיוחדת כדי להדגיש את נוכחותו של קפסולה בחלק מיקרואורגניזמים , בעיקר Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae ו Cryptococcus neoformans-, מדגים קליני או תרבויות טהורות.

הדגימה הישירה המשמשת בדרך כלל למריחת מכתים שליליים היא נוזל מוחי עמוד שדרה. טכניקה זו מייצגת אלטרנטיבה מהירה לאבחון החזקה של דלקת קרום המוח, במיוחד Cryptococcus neoformans.

A. אבנית שיניים המוכתמת בדיו בהודו. B. Cryptococcus neoformans var gatti עטופה בצורה חלשה כשהיא מתרחשת בטבע, באמצעות ניגרוזין. ג. Cryptococcus neoformans var gatti עם קפסולה עבה כפי שנמצאה בצורתה הטפילית, באמצעות ניגרוזין. ד. Cryptococcus neoformans עם דיו הודו מדולל מעט. ג'יזל קווינדה, מ- Wikimedia Commons / CDC, באמצעות Wikimedia Commons / קרדיט צילום: ספקי תוכן: CDC / Dr. ליאור היילי, באמצעות ויקימדיה Commons

כמו כן, ניתן ליישם כתם זה על כיח ונוזלים סטריליים בכלל, כמו גם על זנים המתקבלים מתרבויות טהורות וצעירות. טכניקה זו משתמשת בדיו ניגרוזין או בהודו לביצועה; לפיכך, מדובר במתודולוגיה פשוטה וזולה מאוד המספקת מידע בעל ערך אבחוני רב תוך זמן קצר.

במובן זה, כל מעבדה מסוגלת לבצע מכתים אלה. כמובן שהמעבדה חייבת להיות בעלת כוח אדם מיומן, המסוגל לזהות שמרי Cryptococcus neoformans מבודדים או ניצנים ולהבדיל ביניהם לבין לויקוציטים וממצאים שהמדגם עשוי להציג.

בָּסִיס

דיו של ניגרוזין והודו עובדים בצורה דומה; לכן ניתן להשתמש באחד משני החומרים זה בזה.

טכניקה זו נקראת מכתים שליליים מכיוון שהיא פועלת באופן מנוגד לשאר טכניקות ההכתמה. בכך, מה שנשאר ללא מוות הוא המבנה אותו מבקשים או שרוצים לראות; כלומר, מיקרואורגניזמים.

לכן הכתמה מבוססת על הכתמת קרקעית המריחה בצבע כהה. בתרחיש זה, המבנים הקפסולים יבלטו בצבע בהיר או חסר צבע.

באופן כללי, השמרים הם מרעננים, מוקפים הילה ברורה שתואמת את הקפסולה. זה קורה מכיוון שהדיו בהודיו וניגרוזין הם חומרים שאינם מסוגלים לחדור לפוליסכריד המרכיב את הקפסולה של מיקרואורגניזמים חיים.

ראוי לציין שמבנים אחרים שעשויים להימצא במדגם הישיר, כמו לויקוציטים או תאי דם אדומים, אינם חודרים אף הם.

עם זאת, אם המיקרואורגניזמים מתים, הצבע יכול לחדור לתוכם, כך שכתמה זו מועילה גם להערכת כדאיותם של המיקרואורגניזמים.

טֶכנִיקָה

חומרים

ניגרוזין

ניגרוזין חייבת את שמה לצבע השחור שיש לה. זהו חומר סינתטי שמתקבל על ידי חימום תערובת של תרכובות אורגניות - כמו ניטרובנזין, אנילין ואילין הידרוכלוריט-, באמצעות זרז (ברזל או נחושת) בתגובה האמורה.

דיו סיני

דיו סיני הוא חומר שמשמש בעיקר אסייתים לכתיבה, ליצירת יצירות אמנות וציור מונוכרומטי. זה פופולרי מאוד בתרבות הסינית.

הוא מתקבל דיו דיונון מעורבב עם פחם כתוש, תוצר של שריפת עצים בעלי שרף נמוך.

אפשר גם להכין אותו מהפיח מהשרפת פחמימנים (שמנים צמחיים), יחד עם ג'לטין חלבון המקנה לו את העקביות הנכונה כדי למנוע משקע של חלקיקי פחמן.

מפרט לדגימה

- זה לא מצריך צום.

- דגימת נוזל ה- CSF, כיח או סטרילית חייבת להכיל לפחות 1 מיליליטר של נפח ויש להעביר אותה מיד למעבדה בטמפרטורת החדר.

- דגימות נוזל סטרילי CSF צריכות להילקח על ידי רופא מומחה.

- זו יכולה להיות גם תרבות טהורה של זן חשוד המקושר לפתוגנים האמורים.

ביצוע הטכניקה באמצעות דגימות ישירות

- יש לרכז את הדגימות, ואז להשליך את supernatant ולהילקח את המשקעים.

- טיפה של החומר הצנטריפוגי (משקעים) וטיפה של דיו או דיו הודו מונחים על מגלשה נקייה.

- יש לערבב אותו היטב ולכסות ביריעה על כיסוי החלקה, ולאפשר לטיפה להתפשט כסרט דק מבלי לעבור על הקצוות.

- בהמשך, התכשיר מותקן על גבי המיקרוסקופ.

- אם התכשיר כהה מדי, ניתן לדלל אותו במים.

ביצוע הטכניקה בעזרת זנים מהתרבות

- נתח קטן מאוד נלקח מתרבות צעירה עם מחט זריעה ומומס בטיפת דיו הודו שהונחה בעבר על מגלשה נקייה.

- כיסוי מכסה מונח על גבי.

- זה נצפה במיקרוסקופ ב 10X ואז ב 40X.

אפשר גם להמיס חלק מהמושבה במים מזוקקים, ומשם לקחת טיפה ולערבב אותה עם דיו בהודו. באופן זה, ההכנה לא תהיה כה עבה, מה שמאפשר להתבונן במבנים בבידוד; אם יש המונים, לא ניתן יהיה לצפות בזה היטב.

מתודולוגיה נוספת היא הבאה:

- הניחו טיפה של תרבות ההשעיה בקצה האחד של השקופית.

- הניחו טיפת ניגרוזין באותו קצה ומערבבים.

- בעזרת שקופית אחרת, יש לפזר את הדגימה כאילו מריחה המטולוגית.

- בואו להתייבש ולהתבונן תחת המיקרוסקופ.

תצפית מיקרוסקופית

ראשית עליכם להתמקד במטרה 10X כדי לקבל מבט רחב על התחום. לאחר מכן יש לחפש אם ישנם חללים ברורים; אם יש, פוקוס 40X כדי לראות פרטים.

יתרון

- קל לביצוע.

- זו טכניקה לא יקרה.

- שיטה זו אינה מחייבת לקבוע את המריחה לחום או באמצעות כימיקלים; לכן, מיקרואורגניזמים נצפים ללא עיוותים.

- אין צורך לייבש את התכשיר הטרי, כך שניתן יהיה לצפות בו מייד, ולייצר תוצאות במהירות.

חִסָרוֹן

לאחר ההרכבה, יש להקפיד על תכשירים טריים באופן מיידי; אם מותר להם להתייבש כבר לא ניתן להתבונן בהם ויש להתקין אחד חדש.

מכתים רקמות עם דיו בהודו

פונקציה נוספת שהדיו בהודו יכולה למלא היא במעבדות פתולוגיה. זה מיושם על דגימות רקמות שחולצו בניתוח על מנת לסמן את שולי הכריתה של הגידול.

הרקמה המסומנת מרוססת בחומצה אצטית. זה פועל כמורדנט ומונע דיו לדלוף כאשר הרקמה נתונה לעיבוד שגרתי להכנת הביופסיה.

ההליך מורכב מרחיצת הרקמה באלכוהול וקסילן ולאחר מכן השרייתו בשעווה פרפין. סימון זה מנחה את הפתולוג בעת התבוננות ברקמה, ומציין היכן נמצא מרווח הכריתה הכירורגית או נקודת עניין אחרת.

הפניות

1. «ניגרוסינה». ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 11 יולי 2017, 22:46 UTC. 6 ינואר 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "דיו סיני". ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 1 אוקטובר 2018, 03:08 UTC. 6 ינואר 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. סילבה ל, סילבה סי, פרננדס נ ', בואנו סי, טורס ג'יי, ריקו מ', מקיאס ג'יי ומשתפי פעולה. (2006). אנשי עובדים של הקהילה האוטונומית של אקסטראמדורה. סדר יום ספציפי כרך ד '. MAD עריכה. סביליה-ספרד, עמ '211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). טכנאי מעבדה מומחה, שירות הבריאות גליציאנית (SERGAS). נושא ספציפי לסדר יום נושא 2. עריכה MAD. סביליה-ספרד, עמ '79-80.
5. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. ביילי וסקוט אבחון מיקרוביולוגי. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה