כתם מאי גרונוולד-ג'יימסה: רציונל, טכניקה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מאי גרונוולד-Giemsa או פפנהיים הכתמים הוא טכניקה מכתימה דיפרנציאלי תערובות Giemsa ריאגנטים מאי גרונוולד. הוא משמש להבחנה של תאי דם תקינים וחריגים בדם היקפי ומריחת מח עצם, כמו גם לצורך הכתמת חלקים היסטולוגיים ודגימות ציטולוגיות.

שני המגיבים - ג'ימסה ומאי גרונוולד - נגזרים מכתמים מסוג רומנובסקי, טכניקה המבוססת על שילוב של צבעים חומציים ובסיסיים.

מריחה המציגה נויטרופיל מפולח ומילוציט במקרה של לוקמיה מיאלואידית כרונית, מוכתמת בכתם מאי גרונוולד ג'ימסה. דר 'רמון סימון-לופז (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) דרך Wikipedia.org.

ג'יימסה שיפר את הטכניקה על ידי ייצוב תערובת האאוזין, מתילן כחול ונגזרותיהם, עם גליצרול. במקום זאת, מאי גרונוולד משתמש באאוזין וכחול מתילן, תוך שימוש במתנול כממיס. שילוב אסטרטגי זה הניב תוצאות מצוינות.

למרות שמבחינת התבוננות במורפולוגיה של התאים היא פועלת באופן דומה לכתמי ג'יימסה ורייט, טכניקה זו משפרת את הקודמות על ידי צמצום הכתמת הטפילים הגורמים למלריה, מחלת צ'אגאס, לישמניאזיס וטריכומוניאזיס.

בנוסף, זה הוכח כטכניקה שימושית מאוד למחקר ציטולוגי של נוזל זרע. זה התבלט לא רק על ידי הצגת המאפיינים המורפולוגיים של זרע, אלא גם על ידי מתן אפשרות להבדיל בין לויקוציטים, תאי אפיתל ותאי spermatogenesis ביעילות רבה.

בָּסִיס

הטכניקה עוקבת אחר בסיסם של כתמי רומנובסקי, בהם לצבעים חומציים יש זיקה סלקטיבית לרכיבים תאיים בסיסיים ורכיבים חומציים מושכים כתמים בסיסיים.

מוסבר בדרך אחרת, גם למבני התא וגם לצבעים יש מטענים חשמליים חיוביים או שליליים; כמו חיובים דוחים ומטענים שונים מושכים.

לדוגמא, צבעים בסיסיים כמו כחול מתילן טעונים באופן חיובי ונמשכים למבנים טעונים באופן שלילי. זו הסיבה שצבע זה מכתים את הגרעינים העשירים ב- DNA ו- RNA שאכללו קבוצות פוספט.

גרגירי הבסופילים הקטועים והציטופלזמה של תאי דם לבנים מונונוקלריים המכילים RNA מוכתמים גם הם.

באופן דומה, צבע החומצה נושא מטען שלילי, וזו הסיבה שהוא נקשר למבנים טעונים חיובי כמו אריתרוציטים וגרגירים של אאוזינופילים מפולחים. באשר לגרגירים של נויטרופילים מפולחים, אלה מקבעים את שני הצבעים.

מגוון צבעי צבע

בטכניקה זו, קיים שילוב של תגובות בין צבעים אורתוכרומטיים למטרוכראומטיים. אורתוכרומטיקה (אאוזין וכחול מתילן) נקשרים למבנה התא שאליו הם קשורים ומספקים צבע יציב שאינו משתנה.

מצד שני, המטאכרומטים (הנגזרות של תכלת כחול מתילן A ותכלת B), משתנים את צבעם המקורי ברגע שהם מחוברים למבנה הספציפי, ויכולים להיות אפילו מגוון של גוונים.

לבסוף, הצעד שאותו נוקט פיתרון מאי גרונוולד מצריך נוכחות של מים, מכיוון שללא זה הצבע יחדור למבנים אך לא יתקן. כדי שזה יקרה, על הצבע להפוך לקוטב או ליינן, וכך להיות מסוגל לזרז ולהיקשר למבנים קשורים.

טֶכנִיקָה

חומרים

- שקופיות שקופיות.

- גשרי צביעה.

- פתרון מאי-גרונוולד.

- כתם בג'ימסה.

- מים מזוקקים.

מאי Grünwald לצבוע פתרון מרוכז

יש לשקלל 0.25 גרם כחול אאוזין-מתילן (כתם על פי מאי גרונוולד) ולהמיס אותו ב 100 מ"ל מתנול. ואז התערובת מעורבת למשך שעה ומשאירה לנוח למשך 24 שעות. כשנגמר הזמן, הוא מסונן.

כדי ליישם את הטכניקה, יש לדלל את הצבע של מיי גרונוולד כדלקמן: עבור 200 מ"ל של צבע מדולל, יש למדוד 30 מ"ל מהפתרון המרוכז, להוסיף 20 מ"ל תמיסת חיץ ו -150 מ"ל מים מזוקקים המותאמים ל- pH7.2-7.3 . בהמשך הוא מעורב ומסונן.

תרכיז כתמים בג'ימסה

יש לשקלל 0.5 גרם כחול תכלת-אאוזין-מתילן (כתם על פי ג'ימסה), להמיס אותו ב- 50 מ"ל מתנול ו -50 מ"ל גליצרין להוסיף לתערובת.

כדי לבצע את הטכניקה, יש לדלל 1:10 עם תמיסת החיץ ולתת לה לנוח במשך 10 דקות. ניתן לסנן אותו במידת הצורך.

הכנת תמיסת החיץ ב- pH 7.2

יש לשקול אותם:

- 40 מ"ג אשלגן די-מימן פוספט (KH2PO4).

- 151 מ"ג די-נתרן מימן פוספט 12-הידראט (Na2HPO4).

שתי התרכובות מומסות במאה מ"ל מים.

הליך מכתים של מריחת מוח או עצם

ישנם שני מצבים: קלאסי ומהיר.

מצב קלאסי

1. מכסים את המריחות למשך 2-3 דקות בתמיסה המדוללת של מיי-גרונוולד.
2. יש לשטוף במים מזוקקים חוצצים כדי להסיר את הפיתרון הקודם.
3. מכסים באותה תמיסה לשטוף חוצץ ומשאירים למשך דקה. הרעיון הוא שהצבע הקודם מקובע למבנים ושבה בעת, התאים מתייבשים.
4. הוסיפו 12 טיפות של תמיסת ג’ימסה מדוללת למים החוצצים ותנופו לערבוב והומוגניזציה. תנו לו לנוח 15 עד 20 דקות.
5. יש לשטוף מריחות במים מזוקקים מאוחמים ולהניח לייבוש אוויר.
6. התמקדו וצפו בתאי הדם המוכתמים תחת מיקרוסקופ אור בעזרת המטרה 40X. במידת הצורך ניתן להשתמש ב- 100X.

מצב מהיר

1. מכסים את המריחה בכתם מדולל של מאי גרונוולד למשך דקה.
2. לשטוף במים מזוקקים חוצצים.
3. מכסים במים חצופים ונותנים לנוח למשך דקה.
4. הוסף את כתם הג'ימסה המדולל והשאיר למשך 5 דקות.
5. לשטוף במים מזוקקים מאוחמים ולאפשר להתייבש באוויר.

הטכניקות המתוארות כאן הן קו מנחה, אך יש לקחת בחשבון כי הנהלים וזמני הכתמים משתנים בהתאם לחברה המסחרית המפיצה את המגיבים. רצוי לבצע את הצעדים המפורטים בקפידה על ידי כל בית מסחרי.

טכניקה לצביעת כתמי נוזל זרע

1- מכסים את המריחה בשכבה דקה של תמיסת מאי גרונוולד למשך 4 דקות.

2- הסר את הצבע ושטף במים מזוקקים.

3 - מניחים שכבה של ג'ימסה מדוללת (1:10) במים מזוקקים למשך 15 דקות.

4 - הסר את הצבע ושטוף במים מזוקקים.

5- בואו להתייבש ולהתבונן תחת המיקרוסקופ.

צבעים צפויים עם הכתם של מיי גרונוולד ג'ימסה

מפרט חשוב

הטכניקה מחייבת כי לריאגנטים ופתרונות הכביסה יש pH המותאם ל -7.2 -7.3, כך שזיקות הצבעים למבני התא אינם מעוותים והצבע הסופי הצפוי אינו משתנה.

יישומים

טכניקה זו משמשת מעבדות קליניות להכתמת דם היקפי ומריחות מח עצם, קטעי רקמות וציטולוגיות.

בתחום ההמטולוגי, לטכניקה זו חשיבות חיונית במחקר ההפרעות בתאים מבחינת צורה, גודל ומספר. זהו כלי בעל ערך רב לאבחון מחלות מסוימות, כמו לוקמיה ואנמיות.

בנוסף, יש בכך תועלת יוצאת דופן כאשר מחפשים טפילים באזורים המטולוגיים (Plasmodium sp ו- Trypanosoma cruzi) או היסטולוגיים (Leishmanias sp).

ציטולוגיה וגינלית

לגבי ציטולוגיה בנרתיק, טכניקה זו מועילה במיוחד לתצפית על Trichomonas vaginalis. זהו ממצא חשוב, שכן נוכחותו מדמה תמונות קרצינומה באתרו שנעלמות לאחר מכן עם חיסול הטפיל.

מדגם זרע

זה היה כלי אידיאלי לחקר דגימות זרע, מכיוון שהוא מספק מידע חשוב על איכות הזרע.

הנתונים שהיא מציעה קשורים בעיקר למספר ולמורפולוגיה, כמו גם לתאים הנלווים אשר עשויים להיות קיימים וחשיבותם חיונית, כמו תאי נבט, לויקוציטים ותאי אפיתל.

בעזרת ניתוח זה ניתן לתאר חריגות שנצפו בזרע בראש, בצוואר, באמצע החלק ובחלק הראשי.

בנוסף, הם יכולים גם לעזור להראות מקרים של המוספרמיה (נוכחות כדוריות דם אדומות בזרע) ולוקוספרמיה או פיוספרמיה (מספר מוגבר של לויקוציטים בזרע).

הפניות

1. Costamagna S, Prado M. אימות המבחן הטרי, מאי גרונוולד-ג'יימסה וכתמי גראם ותקשורת תרופתית לאבחון Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. ניתן להשיג ב: scielo.
2. מעבדת מרק KGaA. מאי גרונוולד אאוסין מתילן כחול למיקרוסקופיה.
3. "כתם מאי-גרונוולד-ג'ימסה." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 15 נובמבר 2018, 14:37 UTC. 8 בינואר 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. מעבדה לחומרים כימיים לזכוכית. ריאגנטים לטכניקות היסטולוגיות, המטולוגיה ומיקרוביולוגיה. ניתן להשיג ב: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. המלצה להכתמת כתמי דם לקריאת ההמוגרמה. מעבדה ביו-רפואית ארצית והפניה. המכון לבריאות הציבור של צ'ילה.
6. Sarabia L. Spermiogram לפי קריטריונים של ארגון הבריאות העולמי. תכנית אנטומיה וביולוגיה התפתחותית. בית הספר לרפואה. אוניברסיטת צ'ילה. ניתן להשיג בכתובת: pp.centramerica.com