מכתים קניון: רציונל וטכניקות - ביולוגיה - 2025

מכתים Kinyoun הוא טכניקה מכתימה המשמשת חיידקים וטפילים כתם אלכוהול חומצה עמיד. הוא נולד משינוי הצבעוניות Ziehl-Neelsen; שתי הטכניקות מתפרשות באותה צורה אך נבדלות זו מזו בשני אלמנטים: בהכנת המגיב הראשי וכי טכניקת הקינון אינה משתמשת בחום.

מסיבה זו ידוע גם בשם כתם קר Ziehl-Neelsen עם שינוי קר או קניון. זה מיועד להכתמת שחפת Mycobacterium, Mycobacterium leprae, Mycobacteria לא טיפוסית, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ו- Cyclosporas cayetanensis.

ניחוח Cryptosporidium מוכתם בכתם קניון. Punlop Anusonpornperm, מ- Wikimedia Commons

ראוי לציין כי Nocardia מכתים חלש בטכניקה זו מכיוון שהם עמידים לחומצה לאלכוהול באופן חלקי, ולכן עבור מין זה יש שינוי של המתודולוגיה.

בתורו, טכניקת הקינון הקרה שולבה בטכניקת הטריכרום ששונתה על ידי דידייה לאיתור קוקסידיה (Cryptosporidium parvum ו- Isospora belli) ונבגי micosporidia (Enterocytozoon bieneusi ו- Encephalitozoon intestinalis).

בָּסִיס

מגיב הכתמה העיקרי הוא קרבולפוצין או קרבול פוקסין, שיש להם את המאפיין של קשירה לחומצות הקרבוליות בתוך דופן התא שעווה עשיר בשומנים (חומצות מיקוליות) של mycobacteria וטפילים מסוימים.

קשר זה אינו מנוגד על ידי אקונומיקה חומצה; לפיכך, מיקרואורגניזמים מוגדרים במהירות חומצית.

שלא כמו טכניקת Ziehl-Neelsen - אשר מקבעת את הצבע באמצעות חום - בטכניקת הקינון שלב זה אינו הכרחי, שכן תמיסת הפוקסין הקרבולית שהוכנה לטכניקה זו מכילה ריכוז גבוה של פנול.

הפנול ממיס את חומר הליפיד בדופן התא, ומאפשר לצבע קרבולפוצין להיכנס. לאחר שהצבע חודר הוא נשאר קבוע למרות שטיפת האלכוהול החומצה.

באופן זה, המיקרואורגניזמים המהירים בחומצה מקבלים את הצבע האדום האופייני, ואילו כל מה שאינו מהיר-חומצה הופך להיות חסר צבע וכתמים כחולים.

טֶכנִיקָה

חומרים

- פוקסין קרבול שונה.

- אלכוהול - חומצה.

- כחול מתילן.

הכנת קרבון פוקסין של קניון

- פוקסין בסיסי: 4 גר '.

- פנול: 8 מ"ל.

- אלכוהול (95%): 20 מ"ל.

- מים מזוקקים: 100 מ"ל.

יש להמיס את הפוקסין הבסיסי באטיות באלכוהול, תוך ערבוב מתמיד. לאחר מכן, הפנול המגובש נמס באמבטיית מים בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס. לאחר ההמסה מוסיפים 8 מ"ל לתמיסת הפוקסין שהוכנה למעלה.

הכנת האלכוהול החומצה

- חומצה הידרוכלורית מרוכזת: 3 מ"ל.

- אתנול (95%): 97 מ"ל.

יש למדוד, לחבר ולערבב.

הכנת צבע הניגוד הכחול של מתילן

- כחול מתילן: 0.3 גרם.

- מים מזוקקים: 100 מ"ל.

הוא נשקל ונמס.

טכניקת מכתים של קניון

1 - הכינו מריחה ישירות מהדגימה, שיכולה להיות כיח, נוזל ריאה, משקע שתן, נוזל מוחי שדרתי או צואה, בין היתר; או מהשעיה של מיקרואורגניזמים המתקבלים ממושבות טהורות שפותחו בתקשורת תרבות ראשונית.

2- תקן את המריחה בחום.

3 - הניחו את המריחה על גשר המכתים וכסו עם מגיב הפיוצין המוכשר של קינון. הניחו לו לנוח 3 עד 5 דקות.

4 - שוטפים במים מזוקקים.

5 - מולבנים עם אלכוהול חומצי למשך 3 דקות ושוטפים שוב במים מזוקקים.

6- מחליחים שוב באלכוהול חומצי למשך דקה או שתיים עד שלא ייסחף יותר צבע.

7 - שוטפים במים מזוקקים ומאפשרים להתנקז, ומניחים את השקופית במצב אנכי.

8- מכסים את התכשיר בכחול מתילן ומשאירים לפעולה למשך 4 דקות.

9- שוטפים במים מזוקקים ומאפשרים להתייבש באוויר.

10- בחן ב 40X ואז ב 100X.

כדי לשפר ולהאיץ את הכתמתם של מיקרואורגניזמים מהירים בחומצה, הוסף טיפה אחת של חומר הרטבה (כמו Tergitol מס '7) ל- 30 עד 40 מ"ל של Kinyoun Carbol Fuchsin.

במעבדות מסוימות משנים את צבע הניגוד הכחול של מתילן לחומצה ירוקה בהירה או פיקיקר; הראשון נותן צבע ירוק לרקע והשני מייצר צבע צהוב.

טכניקת קניון מיוחדת לנוקרדיאס

כדי לשפר את מכתים החיידקים של הסוג Nocardia, נעשה שימוש בשינוי של כתם הקינון. הטכניקה היא כדלקמן:

1- מכסים את המריחה עם פוקסין קרבול של קניון למשך 3 דקות.

2- שוטפים במים מזוקקים.

3 - צבעו בקצרה עם אלכוהול חומצי שמוכן ב -3% עד שלא ייסחף יותר צבע.

4 - שוטפים שוב במים מזוקקים.

5 - מכסים את התכשיר בכחול מתילן ונותנים לו לפעול למשך 30 שניות.

6- שוטפים במים מזוקקים ומניחים להתייבש באוויר.

שילוב טכניקת פוקסין קרול וטריכרום ששונו על ידי דידייה

טכניקה זו מומלצת לניתוח דגימות צואה עבור נבגי קוקסידיה ומיקרוספורוריום בו זמנית. ההליך שיש לבצע הוא כדלקמן:

1 - מכסים את המריחה עם פוקסין קרבול של קניון למשך 10 דקות.

2- הסר את הצבע ושטף במים מזוקקים.

3 - הלבנה במשך 30 שניות עם אלכוהול חומצה הידרוכלורית.

4 - שוטפים שוב במים מזוקקים.

5 - מכסים את המריחה בתמיסת טריכרום למשך 30 דקות על 37 מעלות צלזיוס.

6 - שוטפים במים מזוקקים.

7- הלבנה למשך 10 שניות עם אלכוהול חומצה אצטית.

8- שוטפים את המריחה למשך 30 שניות בעזרת אתנול 95%.

QA

כבקרה חיובית, מכינים מריחות עם זני שחפת Mycobacterium ומוכתמים באמצעות ריאגנטים המוכנים לוודא שהחיידקים לובשים את הצבע המתאים (פוקסיה אדומה).

ניתן להשתמש בבקרות שליליות גם על ידי הכנת מריחות עם כל זן שאינו מהיר באלכוהול חומצי, ובכך לוודא כי כל הדגימה מקבלת את הצבע הניגודי.

טכניקת קניון לעומת טכניקת Ziehl-Neelsen

טכניקת הקינון היא פשוטה יותר מכיוון שהיא מבטלת את שלב החימום, אך היתרון העיקרי שלה הוא בכך שהיא נמנעת מפליטת אדים, רעילים מאוד וגורמים לסרטן בטווח הרחוק. לכן כתם הקינון בטוח יותר לאנשי מכתים.

חשוב לקחת בחשבון כי יש להקפיד על כך שהמגיבים לא יבואו במגע ישיר עם העור, מכיוון שהם מאכלים והאקונומיקה דליקה.

באשר לחסרונות, מריחה שלילית לא בהכרח מצביעה על כך שהאורגניזם אינו קיים. יתר על כן, נוכחות של פסולת סלולרית עלולה להוביל לחיוביות שגויות, מה שיוביל לבלבול באבחון.

התייחסות

1. כימיה קלינית יישומית. (2016). ערכת BK Kinyoun. ניתן להשיג ב: cromakit.es
2. אורוזקו-ריקו מיגל. כתם קניון ושני קוקסידיה בנגיף HIV. מרפאת כתב העת הרפואי. 2011; 3 (2): 137
3. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה
4. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהדורה חמישית). ארגנטינה, עריכה Panamericana SA
5. תורמים בוויקיפדיה. "כתם קניון." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית, 8 בפברואר 2018. אינטרנט. 5 בינואר 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. הטמעת טכניקת מכתים לאבחון סימולטני של Coccidia ו- Microsporidia. המכון להיגיינה של אוניברסיטת הרפובליקה. מונטווידאו. אורוגוואי. ניתן להשיג ב: hygiene.edu.uy