מכתים בקפסולה: רציונל וטכניקות - ביולוגיה - 2025

הכמוסה המכתימה היא טכניקת מכתים הפרש אשר המאפיין של מבנה פוליסכריד לחץ שמסביב חיידקים ושמרים מסוימים שנקראים קפסולה. הוא משמש במעבדות קליניות כדי לסייע באבחון פתולוגיות מסוימות הנגרמות על ידי מיקרואורגניזמים קפסוליים.

הוא משמש גם במעבדות הוראה להפגנת מבנה מורפולוגי זה לתלמידי קריירות במדעי הבריאות, כגון: רפואה, ביואנליזה, סיעוד או ציטוטכנולוגיה, בין היתר.

מריחת Klebsiella pneumoniae מוכתמת בכתם קפסולה. שיטת דיו הודית עם ספרנין. מקור: А.А.В

ישנן מספר טכניקות פשוטות להדגמת נוכחות הקפסולה במיקרואורגניזמים המחזיקים בה, אלה הם: הכתם השלילי, כתם אנתוני וריאנט המשלב בין שני הקודמים.

מכתים שליליים משמשים בעיקר בדגימות CSF כאשר יש חשד לנוכחותם של השמרים Cryptococcus neoformans. שמרים זה הוא גורם שכיח לדלקת קרום המוח.

טכניקה זו משתמשת בדיו ניגרוזין או בהודו ומבוססת על יצירת ניגודיות בין רקע התכשיר לבין הקפסולה הבלתי חדירה של המיקרואורגניזם. הרקע הופך כהה והקפסולה חסרת צבע. בדרך זו מבנה זה מתגלה.

לגבי טכניקת אנתוני, ניתן לומר שהיא משמשת בעיקר בהוראת מעבדות להפגנת מבנה הפוליסכרידי בחיידקים כמו Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae ו- Neisseria meningitidis.

השימוש בטכניקה זו למטרות אבחון הוא נדיר ביותר, מכיוון שישנן בדיקות שגרתיות אחרות המאפשרות זיהוי של מיקרואורגניזמים אלה.

בָּסִיס

הקפסולה היא מבנה חזק בעל אופי פוליסכרידי. זה מגן על המיקרואורגניזמים מפני פגוציטוזה, ולכן הוא מבנה קשה לחדירה.

זו הסיבה שכתמי קפסולה מבוססים על ניגודיות. הצבעים מכתים את קרקעית התכשיר ואילו הקפסולה נותרת חסרת צבע.

לפיכך, בעזרת טכניקות אלה ניתן לזהות בקלות את הקפסולה. אם למיקרואורגניזם אין קפסולה, זה לא ניתן להבחין בסוג צבע זה, מכיוון שהכל מוכתם בצבע זהה.

לכל הטכניקות המשמשות לצביעת הקפסולה יש רציונל זהה למרות השימוש בצבעים ונהלים שונים.

טכניקות סעיף

כתם אנטוני

הכתם של אנתוני משתמש בסגול קריסטל ככתם. זה יכתים את גוף החיידק והסגול ברקע.

לעומת זאת משתמשים ב 20% גופרת נחושת. זה משמש כפתרון שטיפה, כלומר הוא מסיר את עודף הגבישים הסגולים מהתכשיר, מה שהופך את הכמוסות ברורות אך מבלי שגוף החיידק או הרקע יאבדו צבע.

חומרים

- חלב ססגוני.

- שקופית.

- גביש סגול 1%.

- 20% גופרת נחושת.

- מיקרוסקופ אופטי.

- שמן טבילה.

תהליך

טכניקה זו מורכבת מ:

1. טפחו את המיקרואורגניזם בחלב הזרם במשך 36 שעות.
2. הניחו טיפה מהתרבות בסוף מגלשה ולידה, הניחו טיפת זכוכית סגולה, מערבבים ומורחים עם סוף שקופית אחרת.
3. יבש באוויר ואל תכנס לחום.
4. לשטוף בתמיסת נחושת 20% נחושת, לאפשר לייבוש באוויר.
5. התבונן תחת מיקרוסקופ עם מטרת טבילה. חפש לקראת קצות הממרח.

חשוב לא להשתמש בחום לא כדי לתקן ולא לייבש, מכיוון שהדבר פוגע בקפסולה. כמו כן אין לשטוף במים.

פרשנות

חלב ססגוני הוא אמצעי תרבות מצוין מכיוון שהוא מספק את החומרים המזינים הנחוצים למיקרואורגניזם לפיתוח קפסולה בולטת.

לעומת זאת, החלב הזרקרן יהווה קרקע עבה וקומפקטית שתוכתם סגולה יחד עם גוף החיידק, אך הקפסולה שעוטפת את המיקרואורגניזם תישאר חסרת צבע. לכן, נצפתה הילה ברורה סביב גוף החיידק.

ייצוג גרפי בתצפית מיקרוסקופית של מריחת Klebsiella pneumoniae מוכתמת בכתם של אנתוני. מקור: תוצרת המחבר MSc. מריאלסה גיל.

יתרון

זוהי טכניקה פשוטה לביצוע. אינו דורש תיקון.

כמו כן, יש לציין כי ניתן להשתמש בתקשורת תרבות אחרת, אך מעדיף את המדיום החלב מכיוון שיש לו את היתרון לספק כמוסות בולטות יותר.

חסרונות

זוהי טכניקה מעט יותר אינטנסיבית מעבודה מאשר מכתים שליליים, והמחשתה דורשת המתנה להתייבשות התכשיר לחלוטין.

מכתים שליליים

חומרים

- שקופיות שקופיות.

- מדיום תרבות עם המיקרואורגניזם.

- דיו סיני או ניגרוזין.

- מיקרוסקופ אופטי.

- תמיסת מלח פיזיולוגית.

תהליך

הניחו טיפה של מלח פיזיולוגי על כיסוי השקע והמיסו חלק קטן מהתרבות החיידקית. חשוב שהתכשיר לא יהיה סמיך מדי. ואז מניחים טיפת דיו סינית או ניגרוזין ומערבבים.

לאחר מכן מניחים גיליון כיסוי מכסה מעל התכשיר מבלי לעלות על הנוזל. זה נצפה תחת המיקרוסקופ על ידי התמקדות תחילה במטרה של 10X ואז מעבר ל- 40X.

ניתן להשתמש בטכניקה זו גם על דגימות CSF ישירות. כלומר, במקום לשים טיפת תרבות חיידקים, מונחת טיפה של CSF.

יתרון

זוהי שיטה פשוטה לביצוע ובו זמנית גם חסכונית. זה לא דורש קיבוע או ייבוש של התכשיר.

חסרונות

החיסרון הוא שיש להקפיד עליו תחת מיקרוסקופ לפני שהתכשיר מתייבש, שכן אם זה יקרה המיקרואורגניזמים יתכווצו, דבר שיקשה על ההדמיה.

מצד שני, חיוביות שגויות יכולות להופיע אם המטפל אינו מנוסה, מכיוון שלעתים קרובות מבולבלים לויקוציטים עם שמרים.

יש להתייחס בתצפית על כמוסות שמרים בטכניקת הדיו או הניגרוזין הסיני כאבחנה חזקה של Cryptococcus neoformans עד להפגנתה עם התרבות.

הסיבה לכך היא שיש שמרים אחרים שיכולים להיות הגורם לדלקת קרום המוח ולא רק Cryptococcus neoformans, כמו אלה של הסוג קנדידה ורודוטורולה, כמו גם מינים אחרים של Cryptococcus.

פרשנות

אם ישנם מיקרואורגניזמים מכמוסים, נצפה רקע כהה, כאשר גופים שקופים צפים בנוזל, המדגישים את נוכחות הקפסולה.

כמוסת Cryptococcus neoformans מוכתמת בדיו סינית. מקור: קרדיט צילום: ספקי תוכן: CDC / Dr. לינור היילי

טכניקת דיו אינדיאנית

ניתן לבצע טכניקה זו גם באמצעות ניגרוזין. זהו שילוב של הטכניקות שהוסבר בעבר. בטכניקה זו נעשה שימוש בסיגול סגול קריסטל ודיו או ניגרוזין.

גוף החיידק הופך לסגול מהסגול הקריסטל מכיוון שהוא טעון שלילי, ואילו ניגרוזין צבע את קרקעית המריחה. אם לחיידק יש קפסולה, היא תופיע כהילה שקופה סביב המיקרואורגניזם.

ניתן להחליף את סגול הקריסטל בכל אחד מהצבעים האלה: ספרנין, פוקסין בסיסי או כחול מתילן.

חומרים

- זכוכית סגולה.

- דיו ניגרוזין או הודי.

- שקופיות שקופיות.

- מיקרוסקופ.

תהליך

- לטפח את המיקרואורגניזם במדיום תרבותי.

- הניחו טיפה מהתרבות בסוף מגלשה ולידה, הניחו טיפה של דיו הודי או גביש ניגרוזין, ערבבו ופיזרו עם סוף שקופית אחרת.

- יבש באוויר ואל תתקן לחום.

- מכסים בתמיסה קריסטלית סגולה למשך דקה, שוטפים במים מזוקקים אך בעדינות רבה (סילון רך), נותנים להתייבש באוויר הפתוח.

- התבונן תחת המיקרוסקופ במטרה לטבול. חפש לקראת קצות הממרח.

פרשנות

נראה גוף חיידקי בצבע סגול ורקע כהה. הקפסולה, אם קיימת, תופיע חסרת צבע סביב החיידק.

הפניות

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. טכניקות בסיסיות של מיקרוביולוגיה. תצפית על חיידקים. רדוקציה (ביולוגיה). סדרת מיקרוביולוגיה. 2010; 3 (5): 15-38. ד
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. כתמים בסיסיים במעבדה למיקרוביולוגיה. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. ניתן להשיג ב: medigraphic.com
3. גיל מ 'מכתים שליליים: רציונל, טכניקה, יתרונות וחסרונות. Lifeder.com.
4. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. ביילי וסקוט אבחון מיקרוביולוגי. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה
5. Tankeshwar A. כתם כמוסה: עקרון, נוהל ותוצאות. 2019. מדריך מיקרוביולוגיה רפואית. זמין ב: microbeonline.com