מבחן VOGES-PROSKAUER: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

Voges-פרוסקאואר המבחן הוא מבחן ביוכימי נהג לסייע בזיהוי של חיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae. זה שימושי במיוחד להבדיל בין זנים של Escherichia coli מ- Klebsiella ו- Enterobacter, בין היתר.

הבדיקה מבוצעת במדיום תרבות נוזלי בשם Methyl Red - Voges Proskauer, הידוע יותר בשם ראשי התיבות RM / VP. מדיום זה מורכב מפוליפפטון חוצץ, גלוקוזה, דיפוטסיום פוספט ומים מזוקקים.

מתיל Red-Voges Proskauer (RM / VP) בינוני מסחרי / סמנכ"ל מבחן חיובי ושלילי בהתאמה. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, מ- Wikimedia Commons

המדיום הנוכחי של ה- RM / VP הוא שינוי של המדיום Clark ו- Lubs, אשר במקור הכיל ריכוז נמוך יותר של פפונים וגלוקוזה. לפיכך, פחות מיון המימן, הנדרש לתגובת Voges-Proskauer החיובית, הופק.

הבדיקה מבוססת על יכולתו של המיקרואורגניזם להשתמש בגלוקוזה בנתיב בוטילן-גליקול, ויוצרת מוצר סופי נייטרלי בשם אצטואין, בנוכחות חמצן וחומציות pH בסיסית.

במדיום RM / VP, בנוסף ליכולת לחשוף את מבחן Voges-Proskauer, ניתן גם לחשוף את מבחן המתיל האדום.

בָּסִיס

בסיס מבחן Voges-Proskauer

הפלוריפפטונים הקיימים במדיום מספקים את הדרישות התזונתיות החיוניות לגידול החיידקים. גלוקוז מצידו הוא התרכובת העיקרית. לחיידקים רבים יש יכולת לחילוף חומרים של גלוקוז ויוצרים חומצה פירובית.

חומצה פירובית היא נקודת אמצע במטבוליזם של גלוקוז ומשם כל מיקרואורגניזם יכול לנקוט בדרכים שונות. חלקם ירכיבו חומצות מעורבות, כמו חומצה לקטית, חומצה אצטית, חומצה פורמית וחומצה סוקסינית, ואחרים יוצרים מוצרים ניטרליים כמו 2,3-בוטאנדיול.

מבחן Voges-Proskauer מגלה את יכולתו של המיקרואורגניזם ליצור אצטיל מתיל קרבינול (אצטואין), תוצר ביניים של 2,3-בוטאנדיול בתנאים אירוביים.

האצטואין מצטמצם ויוצר 2,3-בוטאנדיול, אך תגובה זו הפיכה, ולכן אם 2,3-בוטאנדיול מתחמצן נוצר אצטואין. לכן חמצן הוא חיוני.

הדיפוטסיום פוספט הוא החוצץ שמאגר את התערובת ב- pH 6.9 ± 0.2.

בסיס גילוי ראיות ופרשנות

כדי להדגים את התגובה, יש לבצע פיתוח באמצעות שני ריאגנטים (ריאגנטים Barrit), המכונים Voges A ו- Voges B.

Voges A הוא פתרון של 5% של α-nththol, ו- Voges B הוא תכשיר של 40% אשלגן הידרוקסיד. אם אשלגן הידרוקסיד אינו זמין, ניתן להחליפו על ידי 40% נתרן הידרוקסיד.

Α-נפתול הוא זרז שיגביר את עוצמת צבע התגובה, מה שהופך את הבדיקה לרגישה יותר. תמיד יש להוסיף את ה- α-nththol ולנער את הצינור כך שהמדיום בא במגע עם החמצן. בדרך זו מתחמצן האצטואין לדיאצטיל, ו -2,3-בוטאנדיול מתחמצן ליצירת אצטואין, ומעביר אותו לדיאצטיל.

כך נקשר α-nththol לדיאצטיל, אשר בתורו הצטרף לגרעין הגואנידין הקיים בחומצה האמינית ארגינין, כשהאחרון בא מפלוריפפטונים.

מצידו, אשלגן או נתרן הידרוקסיד אחראים לספיגת CO ₂ ולהגיב עם פפונים. תגובה זו גורמת להיווצרות צבע ורוד סלמון, הנראה בבירור לאחר ניעור הצינור היטב.

יש לערבב כמויות נכונות של דיאקטיל, פפטון ו- α-nththol כדי שהצבע יתרחש באופן מיידי. אם זה לא קורה, מותר לצינור לנוח 15 דקות לפני הפירוש.

הבדיקה בדרך כלל חיובית לאחר 2 עד 5 דקות, כאשר ניתן לראות צבע ורוד קלוש. אם נותרים לעמוד למשך 30 דקות עד שעה, עוצמת הצבע תהיה מקסימאלית (אדום עז).

מבחן שלילי יופיע כאשר המרק מצהיב. לאחר שעה, אם הבדיקה שלילית, צבע נחושת עלול להיווצר כתוצאה מתגובה של אשלגן הידרוקסיד על α-nththol.

הכנה

MR / סמנכ"ל בינוני

שוקלים 17 גרם ממדיום התרבות המיובש וממיסים בליטר מים מזוקקים. בואו לעמוד במשך 5 דקות. מחממים לרתיחה כדי להתמוסס לחלוטין. מגישים 3 עד 4 מ"ל בצינורות ומעקרים במבט החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

המדיום התרבות המיובש בצבע בז 'והמדינה המוכנה בצבע ענבר בהיר.

ה- pH הסופי של המדיום הוא 6.9 ± 0.2.

Voges מגיב

שקלו 5 גר 'α-nththol והמסו 50 מ"ל של אלכוהול אתילי (מוחלט). לאחר מכן המשך להוסיף אלכוהול אתילי עד שהוא מגיע ל 100 מ"ל.

מגיב Voges B

שוקלים 40 גרם אשלגן הידרוקסיד וממיסים 50 מ"ל מים מזוקקים בספל. יש להכניס את הזכוכית לאמבט מים קרים כדי לשלוט על הטמפרטורה, מכיוון שכאשר המומס התכשיר, הטמפרטורה עולה בחדות.

לאחר שהתמיסה קרה, היא מועברת לבקבוק נפח וממלאת עד 100 מ"ל עם מים מזוקקים.

נוהל בדיקת Voges-Proskauer

כדי לבצע את מבחן Voges-Proskauer, מרוקן RM / VP סמוי באמצעות המיקרואורגניזם הנחקר, מתרבות טהורה במשך 18 עד 24 שעות.

החיסון לא אמור להיות צפוף במיוחד. הוא מודגר בחום של 35-37 מעלות למשך 24 עד 48 שעות, אם כי לעיתים יש צורך לבצע דגירה במשך מספר ימים. קוואן ופלדה סבורים כי חמישה ימים הם זמן הדגירה המינימלי הנחוץ לגילוי כל המינים החיוביים של ווג-פרוסקאואר (VP) ממשפחת Enterobacteriaceae.

פיתוח מבחן

הפרד חלק של 1 מ"ל לצינור והתפתח באופן הבא: מניחים 12 טיפות (0.6 מ"ל) של ווגס מגיב ו -4 טיפות (0.2 מ"ל) של ווג 'ב'. מערבבים לאוורור ומאפשרים להתיישב למשך 5 - 10 דקות לפני הפרשנות. עם זאת, אם הבדיקה עדיין שלילית, תנו לה לשבת ולבחון את הצינור לאחר 30 דקות עד שעה.

המראה של צבע אדום-ורדרד מעיד שתגובת ה"ווגס-פרוסקאואר "חיובית. אם המדיום נשאר צהוב התגובה שלילית.

הוספת מפתחים לפי הסדר והכמות שצוינו חיונית כדי להימנע מתשלילי שווא.

להשתמש

בדיקת Voges-Proskauer שימושית כדי להבדיל בין זנים של E. coli שהם סמנכ"ל שלילי, בין הז'אנרים Klebsiella, Enterobacter, Serratia, בין היתר, שהם VP חיוביים.

מקור: Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.

QA

ניתן להשתמש בזני בקרה לבדיקת איכות המדיום המוכן, כולל Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium ו- Enterobacter cloacae ATCC 13047.

התוצאות הצפויות הן תגובות Voges-Proskauer חיוביות רק עבור K. pneumoniae ו- E. cloacae. השאר נותנים תגובות שליליות.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. מר-סמנכ"ל בינוני. 2015. זמין בכתובת: www.britanialab.com
2. מעבדות מיקרו קיט. M-Ident Voges Proskauer. 2014. זמין: http://www.medioscultivo.com
3. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
4. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
5. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.