בדיקת קרישה: רציונל, נוהל ושימושים - ביולוגיה - 2025

מבחן coagulase הוא טכניקת מעבדה רגילה לגלות את נוכחותם של coagulase האנזים. לאנזים זה תכונה של קרישה בפלזמה. לוב בשנת 1903 היה הראשון שתיאר את האנזים הזה.

בדיקה זו מתבצעת על קוקאיות חיוביות גראם, קטליזה, ומאפשרות להבחין בין זני Staphylococcus aureus משאר הסטפילוקוקים, מכיוון שמדובר במיקרואורגניזם היחיד בעל חשיבות קלינית המייצר אותו.

שתי התמונות חושפות מבחן קרישה חיובי. מקור: תמונה שמאל: Philippinjl. תמונה ימנית: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל.

במובן זה, בני משפחת Staphylococaceae שבודקים שליליים מכונים לעתים קרובות Staphylococcus שלילי.

ישנם כמה זנים שאינם S. aureus שיכולים לייצר קרישה, כגון Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius ו- S. delphini.

עם זאת, לשלושת הראשונים חשיבות קלינית ברמה הווטרינרית ויכולים לעיתים רחוקות מאוד להימצא כגורם סיבתי לזיהומים בבני אדם, ואילו ש 'דלפיני נמצא רק בסביבות ימיות.

יתר על כן, הם נבדלים זה מזה בקלות מכיוון ש- S. hyicus ו- S. intermedius אינם מתסיסים מניניטול ו- S. schleiferi spp coagulans אינם מתסיסים את המלטוז או הטרלהוז, בעוד ש- aureus אכן מתסיס את הפחמימות הללו.

נוכחותו של האנזים הקואגולאז נקשר לוויסות הזנים. עם זאת, תיאוריה זו התפרקה, מכיוון שנצפו מינים אחרים שליליים מסוג קרישה-נגרית המסוגלים לייצר זיהומים משמעותיים.

בָּסִיס

פרשנות

אגרגינציה תוך 5-20 שניות (מבחן חיובי חזק).

Agglutination משתנה המתרחש בין 20 שניות לדקה (בדיקה חיובית מאוחרת).

דרגה מסוימת של אגרנות לאחר דקה (עדות מסופקת). מומלץ לחזור על הבדיקה או לאשר בשיטת הצינור.

אין agglutination (מבחן שלילי).

תוצאה עם SSF. עליו תמיד לתת שלילי, אם הוא נותן חיובי באופן אוטומטי תוצאת הבדיקה אינה בטלה.

-בדיקת קרישת דם ב- YouTube

חומרים

צינור מבחן מעקה

-פְּלַסמָה

-בת של מרי ב 37 מעלות צלזיוס.

טֶכנִיקָה

פיפטה 0.5 מ"ל של פלזמה לצינור המבחן 12 על 75 עם פיפטה סטרילית. טען את לולאת הפלטינה עם 2 עד 4 מושבות טהורות כדי ללמוד מתרבית מוצקה למשך 18 עד 24 שעות ולהמיס אותה בפלזמה. מערבבים בזהירות ודגרים בחום של 37 מעלות למשך 4 שעות.

בחן את הצינור בשעה הראשונה בלי לטלטל אותה, פשוט הטה אותה בעדינות. אם עדיין לא נראה קריש דם, ניתן לצפות בו כל 30 דקות עד לסיום 4 השעות. אם לאחר 4 שעות זה עדיין שלילי, אפשר להשאיר אותו עד 24 שעות אך בטמפרטורת החדר. התבונן ודיווח על התוצאה.

על סמך ניסיון, כמה מיקרוביולוגים ממליצים להשתמש ב 500 μl של השעיה חיידקית מתרבית של 18 שעות במדיום נוזלי כדי לבצע את הבדיקה.

נראה כי הוא מציע תוצאות מהירות ואמינות יותר מאשר כאשר מתחלבים מושבות מהתקשורת המוצקה, במיוחד אם נעשה שימוש בפלזמה אנושית המתקבלת מבנק הדם.

השימוש בזנים ממרח מרק מסייע לדילול הנוכחות האפשרית של נוגדנים אנטי-סטפילוקוקיים אנושיים בפלזמה שיכולים לעכב את פעולת הקרישה.

פרשנות

אם נראה קריש שמקיף את כל הנוזל (קרישה מוחלטת) או קריש ללא כל נוזל שנותר (קרישת חלקית), יש לראות בו מבחן חיובי.

אם לא נוצר קריש קרי, כלומר ההשעיה נשארת הומוגנית, הבדיקה שלילית.

-בדיקת קוגולאז באמצעות פיברינוגן

הפיברנוגן משמש זהה לפלזמה ומשמש הן למבחני השקופיות והן מבחינת הצינור. המשך כמתואר לפלזמה ופרש באותה צורה.

להשתמש

הוא משמש כדי להבדיל את Staphylococcus aureus מסטפילוקוקים שליליים.

QA

יש לרשות תרבויות טריות של זן S. aureus שישמשו כבקרה חיובית. זן S. epidermidis זמין גם כבקרה שלילית.

מגבלות

אין להשאיר בדיקה חיובית בדגירה במשך 24 שעות, מכיוון ש- aureus מייצר פיברינוליסין שממיס את הקריש.

-בדיקה אמינה יש להשתמש בפלזמה טרייה או משוחזרת חדשה, כמו גם להשתמש בתרביות חיידקים טריים (18 עד 24 שעות). זה נמנע מתשלילי שווא.

יש לבצע את הבדיקה יחד עם בקרה שלילית וחיובית.

-כמה מדיה מוצקה יכולה להפריע למבחן הקרישה. לא מומלץ להשתמש במושבות מאגר מניטול מלוח.

אם משתמשים בפלזמה ציטרית, מומלץ למקם 5 יחידות הפרין למיליון פלזמה כדי להימנע מתגובות חיוביות. הסיבה לכך היא שמיקרואורגניזמים שאינם S. aureus יכולים לפרק ציטראט ולגרום להתקרשות בפלסמה. במקרה זה רצוי לבצע בדיקת Gram ובדיקת קטליז.

-במבחן הצינור, חשוב לפקח על התגובה כל 30 דקות, מכיוון שיש זנים של S. aureus המייצרים ריכוזים גבוהים של פיברינוליסין ויהללו את הקריש שזה עתה נוצר במהירות. הימנע מתשלילים שווא.

בעת ניטור הבדיקה, הימנע מלטעוע את הצינור בפתאומיות, הדבר עלול להרוס את תחילת היווצרות הקריש שלא תשוחזר בהמשך, ולגרום לשלילת שווא.

הפניות

1. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
3. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
4. מעבדות פרו-מעבדות. ארנב קריש פלזמה. ניתן להשיג ב: pro-lab.com
5. "קרישה". ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 12 פברואר 2019, 04:23 UTC. 22 אפריל 2019, 15:50 wikipedia.org.