מכתים המטוקסילין-אאוזין: מאפיינים, שימושים, טכניקות - כִּימִיָה - 2025

Hematoxylin - eosin היא טכניקה מכתים באמצעות שילוב של hematoxylin צבעים ו eosin. זוג צבעים אלה מייצרים צמד מושלם, מכיוון שהמטוקסילין פועל כצבע בסיסי ואאוזין הוא צבע חומצה.

ייעודם של צבעי בסיס או חומצה אינו מתייחס ל- pH המתקבל בתמיסה, אלא מדבר על הפרופורציה הרווחת מבחינת המטענים האוניאיים או הקטיוניים שיש להם או לפי מיקום קבוצת הכרומופור.

המטיטוסילין - אאוזין (HE) מוכתמים אפיתל עמודים עמודים מקור: טוד שטראוס ולדימיר אוסיפוב

במובן זה, המטוקסילין נחשב לצבע בסיסי (קטיוני) ולכן יש לו זיקה למבני חומצה, כמו גרעין התאים. ואילו לאאוזין, בהיותו צבע חומצי (אניוני), יש זיקה למבנים אלקאליים או בסיסיים, כמו ציטופלזמה של התא.

מסיבה זו, שילוב צבעים זה משמש לרבים מכתמי רקמות, מכיוון שהוא מאפשר להבחין בבירור בגרעינים ובציטופלסמות. הגרעינים מכתימים כחול כהה או סגול והציטופלזמה ורודה.

מכתים של המטוקסילין-אאוזין הם אחת מטכניקות ההכתמה הנפוצות ביותר בתחום ההיסטולוגיה והציטולוגיה, בשל הטיפול הקל והעלות הנמוכה שלה. הוא משמש להמחשת תאים, סיבי עצב עבים ונוכחותם של מיקרואורגניזמים מסוימים ברקמות, כגון: טפילים, פטריות וחיידקים, בין היתר.

מאפיינים

המטוקסילין

המטוקסילין הוא צבע ניטרלי. עם זאת, המרכיב המספק את הצבע (כרומופור) ממוקם במרכז הקטיוני או הבסיסי של המולקולה. מכאן הזיקה שלה למבני חומצה. הנוסחה הכימית שלה היא C ₁₆ H ₁₄ O ₆ ושמה המדעי הוא 7,11b-dihydroindeno chrome-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

זה בעיקר מכתים את גרעיני התאים, מכיוון שהם עשירים מאוד בחומצות גרעין. זה יכול גם להכתים תכלילים ציטופלסמיים ממקור ויראלי.

על מנת שהמטוקסילין יכתים עליו עליו להיות במצב מחומצן ומחייב למתכת. זה האחרון ישמש לקיבוע לרקמות, כלומר הוא ישמש כמורדנט.

כאשר המטוקסילין מחומצן זה נקרא המטטין. חמצון מושג על ידי חשיפה לחמצן (הזדקנות) של המגיב או על ידי חומרים המסייעים לחמצון שלו (חמצון כימי).

אוסין

Eosin הוא צבע שמכתים אדום או ורוד. זה לא מסיס במים למרות שיש גרסה מסיסה במים. באופן כללי מכינים את האאוזין על ידי המסת אלכוהול (אתנול 95 °).

זה מכתים ציטופלזמה, סיבי שריר, אברונים ציטופלסמיים וקולגן, אך אינו מכתים גרעינים תאים. זה מכיוון שהוא טעון שלילי, לכן יש לו זיקה למבנים טעונים חיובית.

ישנם שני סוגים של eosin "Y" ו- "B". Eosin "Y" ידוע בשם eosin צהוב. שמו המדעי הוא פלואורסצינה טטרה-ברומו והנוסחה הכימית שלו היא C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

מצד שני, אאוזין "B" נקרא לעיתים אריתרוזין B כחלחל. שמו המדעי הוא דיברומודיניטרו פלואורסצין והנוסחה היא C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . שניהם דומים מאוד וההבדל בין שימוש באחד או אחר לא ממש מורגש. עם זאת, הפופולרי ביותר הוא eosin "Y".

לאאוזין יש את המאפיין להבחין בין תא חי ומת, מכיוון שהוא מסוגל רק לחצות את הממברנה כדי להכתים את הציטופלזמה שלו כאשר התאים מתים, ולהשאיר את הציטופלסמה של התא ללא צבע אם הוא נשאר בחיים.

יישומים

מכתים בסיבי עצב

ניתן להכתים סיבי עצב עבים ולזהות אותם עם המטוקסילין-אאוסין. עם זאת, אין זה מועיל להכתמת סיבי עצב דקים, מכיוון שנדרש מכתים כסופים כדי להמחיש את האחרונים.

כתמי חתך עור היסטולוגיים

בכתמת שכבת העור החרמנית, הצבע הפועל הוא אאוסין, שכן ברמה זו אין לתאים גרעין.

בשכבה הגרענית של העור, המטוקסילין מכתים חזק את גרגירי הקרטו-הלילין בתוך תאי הגרגירים. נהפוך הוא, שכבת העור הספונסית מוכתמת חלש בהמטוקסילין, בעוד שכבת הבסיס או הנביטה מוכתמת למדי.

האאוזין מכתים את הציטופלזמה של כל התאים ועוצמת הצבע יכולה להשתנות משכבה לשכבה.

Hematoxylin-eosin מכתים של דגימות צואה

Gómez et al., בשנת 2005 הוכיחו כי הכתמת המטוקסילין-אאוזין הייתה יעילה יותר בזיהוי מקרים של אמבה, עקב אנטמבה היסטוליטיקה ואנטמבה, בהשוואה לשיטת ההדמיה הטרייה (מלח ולוגול) בקרב חולים במחלת שלשול חריפה.

כמו כן, הוכח שהוא רגיש ביותר לגילוי האריתתרופגוציטוזיס (אמבות שהסתעפו באריתתרוציטים).

מכתים של קטעים היסטולוגיים לאבחון זיהום

Walwyn et al., בשנת 2004 הציעו להשתמש בכתמים היסטולוגיים לגילוי מיקרואורגניזמים הגורמים לזיהום.

בעזרת מכתים של המטוזילין-אאוסין הם הצליחו לדמיין זיהומים הנגרמים על ידי קלוסטרידיום, אקטינומיס, ספירילה או קנדידה. הם הצליחו גם לראות את נוכחותו של הטפיל Sarcoptes escabiei בקטעי עור ותכלילים ויראליים על ידי ציטומגלובירוס והרפס בחלקים של רקמות שונות.

טכניקות

לדגימות היסטולוגיות

מכתים בחתך היסטולוגי עוברים סדרת שלבים. הדבר הראשון הוא להשיג את החלק ההיסטולוגי. זה צריך להיות שעווה כדי להשיג מאוחר יותר את החתכים (דקים במיוחד) עם מיקרוטום. הטכניקה מורכבת מהשלבים הבאים:

ביטול 1 של עודף פרפין : לשם כך ניתן להשתמש ב- Xylol או Heme-D, לטבול למשך 3-5 דקות.

2-התייבשות הדגימה: זה מושג על ידי טבילה של הדגימה בריכוזים שונים של אלכוהולים (אתנול) בסדר יורד (100 °, 90 °, 70 °). בכל המקרים במשך 7 דקות.

3-חיסול עודף האלכוהול: בשביל זה הוא טובל במים למשך 7 דקות.

4-מכתים עם המטוקסילין: הטבילה את הדגימה למשך 6-10 דקות במגש המכיל המטוקסילין. זמן החשיפה תלוי בגודל והעובי של המדגם.

חיסול עודף המטוקסילין: נשטף במים למשך 5 דקות ואז מתבצעת מעבר מהיר (10-20 שניות) דרך אלכוהול חומצי. מאוחר יותר הוא נשטף במים שוב במשך 5 דקות. ואז הוא טובל באתנול בחום של 96 מעלות למשך דקה.

6-ליטוש עם אאוזין: לשם כך הטביעה את הדגימה למשך 5 דקות במגש האאוזין.

7 - התייבשות הדגימה : לשם כך מועברים שוב דרך מגשי האלכוהול (אתנול), אך הפעם בסדר עולה. (70 °, 90 °, 100 °). (למשך 5 שניות, 5 שניות, דקה בהתאמה).

8-בירור הדגימה : לשם כך הוא נחשף ל- xylol למשך 5-10 דקות ומיובש לאטום לצמיתות עם בלסם קנדה או חומר דומה אחר.

לדגימות צואה המחפשת

מריחה מיוצרת על גבי שקופית עם שרפרף המטופל ומקובעת עם 80% אלכוהול למשך 5 דקות. הסדין טובל בהמטוקסילין למשך 5 דקות ונשטף מיד במים.

לאחר מכן, הוא טובל במהירות באלכוהול חומצי ואז במי אמוניה. זה נשטף במים. הוא צבע 5 דקות באאוזין. הדגימה מיובשת כמוסבר באמנות הקודמת ונשטפת בסופו של דבר עם קסילן.

הכנת ריאגנטים

- המטוקסילין

בליטר אחד של מים מזוקקים ממיסים 50 גרם אשלגן או אמוניום אלומיניום סולפט. כאשר מומסים לחלוטין, הוסף 1 גרם של המטוקסילין מגובש. כשממוסס לחלוטין, מוסיפים 1 גרם של חומצת לימון יחד עם 50 גרם של כלור הידראט ו -0.2 גרם נתרן יוד.

התערובת מבושלת במשך 5 דקות, ומשאירה להתקרר ומסוננת להסרת חלקיקים מוצקים שנותרו. ניתן להשתמש מייד במכשיר המגיב שהוכן.

- אוסין

ניתן להכין אותו עם בסיס אלכוהולי או עם בסיס מים.

אאוזין אלכוהולי

ב 100 מ"ל אתנול ב 95 מעלות להמיס 0.5 גרם אאוזין "Y". ואז להוסיף כמה טיפות של חומצה אצטית קרחונית.

2% אאוזין מימי

ב 1250 מ"ל מים מזוקקים ממיסים 25 גרם של אאוזין מסיס במים "Y". ואז להוסיף כמה טיפות של חומצה אצטית קרחונית.

אלכוהול חומצי

מודדים 0.5 מ"ל של חומצה הידרוכלורית מרוכזת וממלאים עד 100 מ"ל באלכוהול מוחלט.

מי אמוניה

מודדים 0.5 מ"ל אמוניה מרוכזת וממלאים עד 100 מ"ל עם מים מזוקקים.

הפניות

1. Navarrete, G. היסטולוגיית העור. הכ"פ Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. ניתן להשיג ב: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. זיהוי אנטמבה היסטוליטיצה / אי. מבוזרים בטכניקת האמבה הטריה לעומת הכתמתה בהמטוקסילין-אאוסין בשלשול חריף. כב 'מקס מקס פדיאטר 2005; 72 (3); 109-112. ניתן להשיג ב: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. שימושיות של טכניקות היסטולוגיות לאבחון זיהום בדגימות אנטומיות. הרב קוב מד מיל, 2004; 33 (2). ניתן להשיג ב: scielo.sld
5. מגיבים ל- PanReac AppliChem ITW. כתם המטוקסילין-אאוזין. 2017, ספרד. ניתן להשיג ב: itwreagents.com
6. אוסין. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 7 נובמבר 2018, 08:18 UTC. 4 באוגוסט 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "המטוקסילין." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 3 מאי 2019, 11:23 UTC. 4 באוגוסט 2019, 22:48 wikipedia.org