תגובת קסנטופרוטאין: רציונל, נוהל, שימוש - כִּימִיָה - 2025

תגובת xanthoprotein היא הליך כימי המשמש לקביעת קיומו או אי קיומו של חומצות אמינו ארומטיות, כגון טירוזין טריפטופן, אשר יכולה להיות בצורה חופשית או מהווים חלבונים מסיסים, פפטידים או פוליפפטידים.

הוא שימש גם לאיתור חומרים רעילים בדם המכילים קבוצת בנזן במבנה שלהם. בדיקה זו ידועה גם כתגובת ה- Xanthoprotein Becher.

תגובת חיובי xanthoprotein מקור: נלקח מהסרטון: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

בתגובת הקסנטופרוטאין משתמשים בחומצה חנקתית מרוכזת, בחום ובאלקלי המנטרל. אם הפיתרון הופך מצהוב לכתום לאחר נטרול התגובה, הבדיקה נחשבת לחיובית. הצביעה שנצפתה נובעת מהיווצרותם של תרכובות חנקניות הנגזרות מהכפלה של קבוצות בנזן.

אם צריך לכמת את כמות החלבון הכוללת, יש צורך להשתמש בשיטות אחרות לקביעת חלבון, כמו Biuret.

תגובת הקסנטופרוטאין משמשת בעיקר כאשר מנותחים חומרים שההרכב הכימי שלהם אינו ידוע. תגובה זו היא בדרך כלל חלק ממערך הבדיקות שיסייעו לקבוע את ההרכב הכימי של חומר או תמצית מסוימים. זו הסיבה שהוא נמצא בשימוש נרחב על ידי חוקרים.

מצד שני, תגובת ה- Xantoprotein של בכר משמשת לאיתור חומרים פנולים ואינוליים בדם, ומאפשרת לחזות את הופעת הנפרופטיה, לפני שיגדילו פרמטרים מאוחרים אחרים.

בָּסִיס

התגובה מגלה בעיקרון את נוכחותה של קבוצת הבנזן, הן בחומצות אמינו, כמו גם בחלבונים ובפפטידים. חומצה חנקתית פועלת על טבעת הבנזן של חומצות אמינו המחזיקות בה ויוצרת תרכובות ניטרו פנוליות.

התגובה צריכה לבצע חום, בדרך כלל נוצר משקע שמעיב על המדיום, והופך אותו לחלב. המשקעים יכולים להיות לבנים או צהובים. לבסוף, זה דורש שלב אלקליזציה המדגיש את הצבע. לשם כך משתמשים בבסיס כמו 40% נתרן הידרוקסיד או אמוניה.

התגובה תתפרש כחיובית אם נצפה צבע צהוב חזק במהלך תהליך החימום או כתום כהה כאשר התגובה מתייבשת. חומצות האמינו שהוא מזהה הן בעיקר טירוזין וטריפטופן.

תגובה Xanthoprotein. מקור: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

במקרה של פנילאלנין, למרות שמדובר בחומצת אמינו ארומטית, קשה לנטרל את גרעין הבנזן של חומצת אמינו זו בתגובה פשוטה, לפיכך, הוא ישפיע על תגובה חיובית שלילית או חלשה.

באופן כללי ניתן להוסיף את בדיקת הקסנטופרוטאין במבחן הופקינס קול שמשמש לזיהוי ספציפי של טריפטופן. אם בדיקת הקסנטופרוטאין חיובית ובדיקת הופקינס קול שלילית, נשללת נוכחות הטריפטופן באותו פתרון, מה שמצביע על נוכחותו של טירוזין בעיקר. כמו כן, ניתן להשלים אותה גם עם תגובת מילון לגילוי טירוזין, בין היתר.

ניתן להשתמש בתגובה זו גם על דגימות של דם, פלזמה או סרום desalbumined לאבחון של אורמיה או אי ספיקת כליות. במקרה זה, מה שמבקש הוא איתור חומרים רעילים (פנוול ואינול) המיוצרים מפגיעת מעיים.

לחומרים אלה יש את קבוצת הבנזן ולכן נותנים תגובה חיובית ל- xanthoprotein, למרות שהחומר המגיב אינו חומצה אמינית ולא חלבון.

תהליך

- תגובת קסנטופרוטאין לגילוי חומצות אמינו בקבוצות ארומטיות

הכניסו 1 מ"ל מדגם הבדיקה למבחנה נקייה ויבשה.

הוסף 0.5 מ"ל של חומצה חנקתית מרוכזת.

-דגור את התערובת באמבט מים בחום של 70 מעלות למשך 2 דקות. הכינו בעבר את אמבטיית המים בטמפרטורה שהוזכרה.

בעת הוצאת הצינור מאמבט המים ניתן לראות כי התמיסה הפכה חלבית ולבשה צבע לבן-צהבהב מסוים.

הפתרון מקורר על ידי הפלת מים קרים בבסיס הצינור.

ההכנה נעשית בסיסית על ידי הוספה (טיפה אחר טיפה) לאט של תמיסת נתרן הידרוקסיד 40% עד שיהיה שינוי בצבע.

אם הבדיקה חיובית, טבעת כתומה כהה תיווצר בממשק הנוזלים.

אם התגובה שלילית לא תהיה שום היווצרות צבע.

- תגובה Xanthoprotein לאיתור חומרים פנולים ואינוליים בדם

מחלקים 5 סמ"ק של 20% חומצה טריכילורואתית על 5 סמ"ק של דם ורידי, פלזמה או סרום, כאשר האחרון הוא המצוין ביותר. מערבבים היטב ומסננים.

קח 2 מ"ל מהסינון וערבב אותו עם 0.5 מ"ל חומצה חנקתית. ואז הוא מחומם לרתיחה, בשביל זה הצינור ממוקם ישירות מעל הלהבה הקלה למשך 30 שניות. הוא מקורר במים ומתווסף 1.5 של 33% נתרן כלורי.

זה מתפרש כך:

-תוצאה שלילית: צבע צהבהב.

-תוצאה חיובית (+) בצבע צהוב לימון.

- (++) צהוב זהוב.

- (+++) צהוב כהה עד חום

ניתן לפרש אותו גם באמצעות סולם קולורמטרי Autenrieth רפרנטי, המורכב מריכוזים שונים של דיכרומט אשלגן. זה מוכן ב 10 מתוך 10 דילולים מתמיסה של 0.03874% מלאי. כל צינור מייצג אחוז.

מאזני הפרשנות

ישנם שני סולמות פרשנות הנקראים עתיקים ומודרניים. הערכים הרגילים הם:

טבלה ישנה: בין 75 עד 85%

שולחן מודרני: בין 15-25%

אם צבע צינור המבחן הוא באמצע של שני צינורות סטנדרטיים, נעשה ממוצע בין שתי המדידות.

הפתרון הסטנדרטי של אשלגן דיכרומט מוכן כדלקמן: 7.9 מ"ל של 10 N אשלגן דיכרומט נמדד ומורכב עד 100 מ"ל בבקבוק נפח. הדילולים מתבצעים כמוצג בטבלה הקולומטרית Autenrieth.

שולחן קולרימטרי אוטומטי. מקור: תגובה Vásquez A. Xanthoprotein. כתב עת קליני ספרדי. 1949; 35 (5): 326-327. ניתן להשיג ב: Elsevier

להשתמש

השימוש בתגובת הקסנטופרוטאין הוא חלק ממערך הבדיקות הביוכימיות המסייעות לדעת את ההרכב הכימי של חומר לא ידוע. בדיקה זו תורמת לניתוח הכימי לגילוי חלבונים המכילים קבוצות בנזן במבנה שלהם.

תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב על ידי חוקרים במחקרים שונים על חומרים בעלי עניין.

במובן זה, וסקז-חורחה ומשתפי הפעולה השתמשו בתגובות זו ואחרות כדי לחקור את תכולת החלבון של נוזלים המופקים מן הצדפה המנגרובה (Crassostrea rhizophorae).

באופן דומה, Rojas et al. (2009) השתמשו בסדרה של בדיקות, כולל תגובת ה- xanthoprotein, בכדי לנתח glycomacropeptides בשטויות מי גבינה מי גבינה.

מצד שני, תגובת ה- Xantoprotein של בכר שונתה על ידי וולהרד לשימוש למטרות אחרות. במקרה זה, לגילוי חומרים פנוולים ואינוליים שיכולים לעלות הרבה יותר מוקדם (שבועות או חודשים) לפני שרמות האוריאה והחנקן הנותר בדם עולים.

פסולת רעילה זו נוצרת כתוצאה מעכבת המעיים של המזון.

חומרים אלה מצטברים בדם כאשר אינם מבוטלים כראוי, לכן בדיקת קסנטופרוטאין חיובית יכולה לחזות את הופעתה המוקדמת של אי ספיקת כליות תקינה או מצב של אורמיה.

בהתאם לעוצמת הצבע תוכלו לקבוע עד כמה הוא מתקדם. במקרה זה הבדיקה היא כמותית.

אצל אנשים בריאים בדיקה זו מעניקה צבע צהוב קל, המתאים לרמות הרגילות של טריפטופן וטירוזין העשויות להיות בדם.

בעוד שבחולי כליות, תגובת הקסנטופרוטאין חיובית מאוד בגלל נוכחותם של החומרים הבאים: פנול, אינדול, paracresol, oxyacids ארומטיים, בין היתר.

אמצעי זהירות

בדיקה זו חייבת להתבצע על ידי אנשי מקצוע מיומנים. יש לקחת בחשבון את כל התקנות הבטיחותיות הבטיחותיות, מכיוון שהריגנטים המשמשים הם חומצות מאכלים ובסיסים.

אם במקרה נופלים כמה טיפות של חומצה חנקתית על העור או על הציפורניים, הם יהפכו לצהובים, מכיוון ששני המבנים מכילים חלבונים. בנוסף, על העור והריריות זה גורם לכוויות קשות.

אם מתרחש מגע עם העור, הפרוטוקול שיש למלא אחרו צריך להיות שטיפת האזור מייד עם סבון ומים למשך כ 20 דקות.

אם הוא מתזה בעיניים יש לשטוף אותו עם הרבה מים טריים, לנסות להשאיר את העיניים פקוחות.

הפניות

1. "תגובת Xanthoprotein" ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 2 ספטמבר 2019, 17:49 UTC. 21 באוקטובר 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. אפיון פיזיקוכימי ותכולת חלבון של תמציות נוזלים של צדפת מנגרובים (Rhassoptrae Crassostrea). הכומר קובאנה דה קווימיקה, 2014; 26 (1): 66-74. ניתן להשיג ב- Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. בידוד וביצועים של GMP על ידי משקעים של מי גבינה עם חומצה Trichloroacetic. סנט. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. ניתן להשיג ב: ve.scielo.
4. תגובה Vásquez A. Xanthoprotein. כתב עת קליני ספרדי. 1949; 35 (5): 326-327. ניתן להשיג ב: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. התגובות של בכר ואנדרוס בניתוחים בשתן. שירות אורולוגיה של בית החולים הספרדי. כתב העת הארגנטינאי לאורולוגיה 395-404