מריחת דם: מאפיינים, סוגים, טכניקות והיסטולוגיה - ביולוגיה - 2025

כתם הדם הוא כתם דם היקפי המשמש לנתח את הרכיבים הנמצאים במחזור הדם. התבוננות במריחת דם מספקת מידע המטולוגי שימושי מאוד לאבחון ומעקב אחר פתולוגיות רבות.

מריחת הדם מאפשרת לכמת את מספר הסוגים השונים של תאי דם לבנים (פורמולת לויקוציטים), וכן לנתח את המורפולוגיה ואת צורתם של אריתרוציטים, לויקוציטים וטסיות דם.

הכנת מריחת הדם. מקור: דם בכוס מעבדה. Public DomainPictures.net

בו ניתן לאתר חריגות במספר התאים, כגון: לויקוציטוזיס או לויקופניאוס, לימפוציטוזה או לימפופניה, נויטרופיליה או נויטרופניה, פקקת או טרומבוציטופניה ואאוזינופיליה. ניתן להבחין גם בהפרעות בתא ובצורות.

בנוסף ניתן לאתר סוגים שונים של אנמיות, לוקמיה ודלקות טפיל בחיידקים או בדם.

לשם כך ישנם סוגים שונים של מריחות אשר מבוצעים בהתאם למטרת המחקר. ישנם מריחות דקות ומריחות עבות. מריחות אלה נבדלות זו מזו בטכניקת הביצוע ובתכלית המחקר.

אלה עם טיפות עדינות משמשים כתוספת לחיסון המטולוגיה מלאה. זה מספק נתונים על פורמולת הלוקוציטים, בנוסף לניתוח הצורה והמורפולוגיה של שלוש סדרות התאים המרכיבות את הדם: סדרה אדומה, סדרה לבנה וטסיות דם. אם כי הם משמשים גם כהשלמה לחקר סרט הדם העבה.

הסרט העבה משמש לאבחון של מחלות הנגרמות כתוצאה מההמופרזיטים, כמו מלריה או מלריה, טוקסופלזמוזיס, לישמניאזיס, מחלת צ'אגס, babesiosis ו- microfilariasis.

מאפייני מריחת דם

מריחת דם טובה חייבת לעמוד במאפיינים מסוימים. ביניהם אנו יכולים להזכיר:

המדגם חייב לעמוד בדרישות האיכות המינימלית כדי להיות מייצג.

-דגימה חייבת להיות מבוצעת היטב.

-ביצוע של המריחה ברגע.

-אם מתבצע בדם ורידי, השתמש בנוזל קרישה שאינו מעוות את התאים ומערבב את הצינור לפני ביצוע המריחה.

-אם זה נעשה בדם נימי, השלך את הטיפה הראשונה.

-הפיזור חייב להיות הומוגני. זה מבטיח כי התאים מופצים באופן שווה וכי ניתן לנתח היטב את תאי הדם לצורתם ולמספרם.

- צידי המריחה צריכים להיות חלקים מההתחלה ועד הסוף.

-המרח חייב לכבד שולי של 1 עד 2 מ"מ לדפנות המגלשה.

שכבת המריחה צריכה לרדת בהדרגה בעובי מההתחלה עד הסוף (למרוח עם טיפה דקה בשיטת השקופית).

זה חייב להיות מסומן כראוי כדי למנוע בלבול מדגימה.

-תקן וכתם כראוי להתבוננות ברורה של יסודות הדם.

תן למריחה להתייבש היטב לפני שתרכיב את התכשיר מתחת למיקרוסקופ. הנחת שמן טבילה על מריחה רטובה תגרום להיווצרות מיקרונים המונעות את התאים להראות.

סוגים של מריחת דם

ניתן לסווג מריחות דם היקפיות למריחה דקה ומריחה עבה. בעלי שכבה דקה משמשים לחקר פורמולת הלוקוציטים והתבוננות מורפולוגית בתאי הדם. ניתן לראות גם חיידקים חוץ תאיים כמו בורליה והמופרזיטים תוך תאיים, כמו פלסמודיום, בין היתר.

בגליעה העדינה ניתן לזהות את המין של הטפיל, לפיכך מדובר בטכניקה ספציפית יותר מהגובה העבה, אך הגליבה העבה רגישה יותר, מכיוון שמדובר בטכניקת ריכוז המשמשת לחיפוש ממצה אחר ההמפרסיטים החוץ תאיים.

ישנם שני סוגים של מריחות טיפות עדינות: אלה המבוצעים על שקופיות ואלה מבוצעים על כיסויי כיסוי. מריחות העבות מבוצעות בשקופיות.

טכניקות לנטילת דגימות דם

מריחת דם יכולה להיעשות מנקב נימי או מדגימה ורידית שנלקחה עם נוגד קרישה. אם הוא מבוצע מדם עם נוגד קרישה, ניתן להכין את המריחה עד שעתיים לאחר נטילת הדגימה.

יש להיזהר בשימוש בנוגדי קרישה שאינם מעוותים את תאי הדם. האפשרות הטובה ביותר היא EDTA. נהפוך הוא, יש להימנע משימוש בנוגדי קרישה כמו טריסודיום ציטרט.

אם הדגימה נלקחת על ידי ניקוב נימי, יש להאריך את המריחה מיד לפני שקרישי הדם.

יש לזרוק את הטיפה הראשונה, ולאפשר לטיפה הבאה לברוח באופן ספונטני כדי להימנע מדילול הדגימה בנוזל רקמות. זוהי הטכניקה המומלצת ביותר להתבוננות במורפולוגיה של התא, מכיוון שלדם אין תוספים.

לצורך התבוננות בהמפרסיטים, הסיקו סולארי ואח 'בעבודת המחקר שלהם כי שתי הטכניקות (ווניפקטורה ונימית) יעילות באותה מידה.

סוגי דגימות דם: א. ניקוב נימי. ב. ניקוב ורידי. מקור: A. Flickr.com B. Pxhere.com

טכניקות להכנת מריחת הדם

מריחת הדם ניתנת לביצוע ידנית על מגלשות מיקרוסקופ או על מגן שקופיות או שקופיות. זה אפשרי גם באמצעות ציוד אוטומטי.

מריחת שקופיות

זוהי הטכניקה המועדפת על ידי מרבית המעבדות בשל הטיפול הקל שלה.

בעזרת פיפטה של ​​פסטר, הנח טיפת דם לא מאוד עבה או דקה מאוד במרכז קצה אחד של השקופית הנקייה.

המריחה נעשית בעזרת מגלשה אחרת עם קצה קרקעי. מגלשת הזכוכית הטחונה מונחת בניצב לקצה הנגדי של היכן שנמצאת הטיפה.

הוא נוטה לזווית שבין 30 - 45 מעלות ומחליק לעבר הטיפה; כשנוגעים בו, הוא מתרחב באופן לינארי על שפת מגלשת האדמה ובתנועה קבועה ומוגדרת הגיליון חוזר; לפני שמגיעים לסוף מרימים את השקופית.

בדרך זו מתפשטת שכבה הומוגנית על פני מגלשת הקליטה.

מריחה מותרת להתייבש. לאחר מכן הוא מקובע ומוכתם בכתם המועדף. אפשר להתייבש היטב לפני הצפייה במיקרוסקופ. טיפת שמן מונחת על הפנים המציגה את המריחה ונצפתה תחת מיקרוסקופ אור.

מריחת דם בשקופית. תמונה עליונה: מריחה לא מוכתמת. תמונה תחתונה: מריחה מוכתמת. מקור: Coinmac

חלקי מריחה מיוצרים בשקופיות

בסוג מריחה זה ניתן להבחין בין שלושה אזורים מוגדרים: הראש, הגוף והזנב. הראש תואם את האזור בו מתחילים למרוח, זה האזור העבה ביותר ולא טוב להתבונן בו.

הגוף הוא החלק המרכזי או הביניים של המריחה, זה האזור הטוב ביותר שצריך לצפות בו תחת המיקרוסקופ, כי שם התאים מופצים בצורה אחידה והמורפולוגיה שלהם נשמרת.

הזנב תואם את החלק האחרון של המריחה; כאן ההתפלגות כבר לא אחידה והמורפולוגיה של אריתרוציטים נוטה לאבד.

בקרת איכות בטכניקת השקופיות

בטכניקה זו ממלא תפקיד בסיסי:

ניקוי ושומניות של השקופית: זה מבטיח החלקה טובה של המדגם.

-גודל הטיפה: עם טיפות גדולות מאוד יתקבל מריחה עבה וארוכה יותר, עם טיפה קטנה מאוד הממרח יהיה קצר יותר ויפה מאוד.

-המהירות המיושמת בתוסף: ככל שהמהירות תהיה נמוכה יותר, הריח יהיה דק יותר, כך המהירות גבוהה יותר.

-זווית הביצוע: ככל שהזווית קטנה יותר ככל שהמריחה עדינה יותר, כך הזווית יותר גדולה יותר.

- הקפד על כיסוי השקע

הוא אינו נמצא בשימוש נרחב מכיוון שהטיפול במכסים שבריריים הוא מסורבל, אולם הוא מציע יתרונות גדולים מכיוון שמתקבלת תפוצה טובה יותר של תאים לאורך כל המריחה.

טיפה לא מאוד עבה ולא דקה מונחת במרכז כיסויי כיסוי. מיד מכסים מכסה נוסף נוסף על גבי זה באופן שקצות שתי כיסויי הכיסוי בולטות ויוצרים כוכב.

הטיפה תתפשט באופן ספונטני על פני שני כיסויי הכיסוי. בסוף הרחבה כל שקופית מוחלגת לצד הנגדי זה לזה (האחת מימין והשנייה משמאל) במהירות.

הטכניקה מספקת שני מריחות במקום אחת.

הם מונחים לייבוש כשהצד המורח כלפי מעלה. ברגע שהוא יבש, הוא קבוע ומוכתם בטכניקה שבחרת. תן לזה להתייבש. טיפת שמן טבילה מונחת על גבי שקופית, המריחה מונחת עם הצד למריחה כלפי מטה ונצפה מתחת למיקרוסקופ.

בקרת איכות בטכניקת coverslip

כדי להשיג מריחה טובה לטכניקה זו חשוב:

ניקוי כיסויי הכיסוי (עוזר לדגימה להחליק בצורה חלקה).

גודל הטיפה (משפיע על עובי המריחה).

המהירות בה מופרדים כיסויי הכיסוי (משפיעה על ההומוגניות של הממרח).

-עם ציוד אוטומטי

הם יכולים להיעשות באמצעות כל אחד מהצוותים האלה: ספינר ומחלף אוטומטי.

הספינר מורכב מהנחת שקופית עם טיפת דם על צלחת צנטריפוגה מיוחדת. המדגם נמצא בצנטריפוגה במהירויות גבוהות; בדרך זו נוצר מריחה הומוגנית ועדינה של הדגימה. יש לו החיסרון של אפשרות למוליזה של הדגימה.

השקופית האוטומטית היא מכשיר שמבצע באופן מכני את התנועות לביצוע המריחה על שקופיות. ניתן גם לתקן ולהכתים את המריחה. ניתן אפילו להתאים אותו לכמה מונים אוטומטיים של המטולוגיה.

טכניקת מריחה עבה

לחיפוש המופראיטיס מומלץ שני מריחות: אחת עם טיפה דקה ואחת עם טיפה עבה.

בצע ניקור נימי, נקה את הטיפה הראשונה. הניחו טיפה דקה על השקופית וריחו ​​כפי שהוסבר בעבר. עבור החרוז העבה, מניחים חרוז גדול בשקופית אחרת ומורחים לריבוע בגודל 1.55 מ"מ. תן לשני המריחות להתייבש.

כתמי מריחה

כתמים בג'ימסה או רייט, בין היתר, יכולים לשמש לטיפות נאות. כתם של Giemsa או May-Grunwald מומלץ להשתמש במריחות עבות.

כתם בג'ימסה

המריחה קבועה למשך 3 דקות עם מתנול, מתנקזת ומאפשרת להתייבש שוב. לאחר מכן מכסים את המריחה בכתם Giemsa למשך 10-15 דקות. הוא נשטף במים מזוקקים ומניח להתייבש. לצפייה מתחת למיקרוסקופ מונחת טיפת שמן טבילה.

הכתם של רייט

המריחה מכוסה בכתם של רייט במשך 5 דקות. השלך והניח את תמיסת החיץ ב pH 6.8 למשך 6 דקות. לפוצץ את התכשיר להומוגניזציה. שוטפים במים מזוקקים ומניחים לייבוש. התבונן מתחת למיקרוסקופ.

סוגי מריחות פגומות

זה מתרחש אצל מתאמנים בטכניקת הטיפה העדינה עם שקופיות.

מריחות עם אזורים בעובי שונה (שזורים דקים ועבים)

הסיבה לכך היא שהתנועה שבוצעה לא הייתה קבועה במהלך ההתפשטות, ועצרה והפעלה מחדש.

מריחה קצרה מאוד

יש להם שני גורמים: האחד נובע מהעובדה כי מגלשת האדמה הונמה לפני שהגיעה לקצה השני של המגלשה. במקרה זה הוא עבה וקצר ביותר.

מצד שני, אם המריחה קצרה אך דקה, זה מכיוון שגודל הטיפה היה קטן מאוד.

מרחו עם שטח גרוף לקראת סוף המריחה

יש לו כמה גורמים: האחד הוא שהקצה הקרקעית לקויה, שהלחץ המופעל על השקופית המקבלת מוגבר בזמן ההתפשטות או שהקצה הקרקעי של המגלשה נשחק.

מריחה עם היווצרות שקע או אזורים מעוגלים או אליפטיים ברורים

הם נובעים משימוש במריחות שמנוניות (שטופות ושומניות לא טובות).

מריחות מאוד עבות או דקות מאוד

טיפות גדולות מדי יפיקו מריחות עבות מאוד מההתחלה ועד הסוף וטיפות קטנות מאוד יפיקו מריחות עדינות מאוד.

היסטולוגיה

ניתן לראות תאי דם במריחת דם. ביניהם:

-ארתרוציטים או כדוריות דם אדומות

דם אנושי, אריתרוציטים או כדוריות דם אדומות ושני תאי דם לבנים. צולם ונערך מתוך: Viascos. לתצפיתך חשיבות עליונה. ברמה זו ניתן לאתר אנמיות, תלסמיה, מחלת מח עצם וכו '.

מספר האריתרוציטים או כדוריות הדם האדומות הוא כ 5 x 10 ⁶ מ"מ ³ אצל גברים ו -4.5 על 10 ⁶ בנשים. תאי דם אדומים מעוצבים כדיסקיות דו-קונוויים, עם חיוורון פיזיולוגי מרכזי. ניתן לראות אותם בנפרד (רגילים) או יוצרים ערימות רולו (לא תקינות).

מריחות מראות גם פואיקילוציטוזיס (תאי דם אדומים בצורות שונות), אניסוציטוזיס (תאי דם אדומים בגדלים שונים), אניסופויקילוציטוזיס (צורות וגדלים שונים), אניסוכרומיה (צבעים שונים), אריתרובלסטים (תאי דם אדומים בשלים), מיקרוציטוזיס (תאי דם אדומים קטנים יותר) ) ומקרוציטים (אריתרוציטים גדולים יותר).

כאשר הם מציגים מחסור בכמות ההמוגלובין והחיוורון המרכזי עולה, נאמר שיש היפוכרומיה. כאשר נצפתה סדרה אדומה רגילה, היא תדווח כנורמוציטית ונורמוכרומית.

- תאי דם לבנים או לויקוציטים

תאי דם לבנים

הסכום הרגיל נע בין 5,000 ל- 10,000 מ"מ ³ . הם משתנים בתהליכים זיהומיים, באלרגיות ובלוקמיה. ניתן להבחין במספר סוגים במריחת הדם, אשר מוסברים להלן.

נויטרופילים מפולחים

הם מייצגים 55-65% מכלל הלוקוציטים. הם מודדים בין 10-15 מיקרומטר. יש להם גרעין מפולח או אונה המאמצת מורפולוגיות שונות, ומכאן שהוא נקרא פולימורפונוקלירי.

יש להם גרגירים נויטרופיליים בשפע בציטופלסמה שלהם וכמה אזורופילים. הם מתגברים בזיהומים חיידקיים (נויטרופיליה), ירידה בזיהומים נגיפיים (נויטרופניה).

ניתן להבחין במומים מורפולוגיים כמו pleokaryocytosis (גרעינים היפר-קטעים), קשתות (תאים לא בשלים) או מדיניות מאקרו (בצורת אליפסה וגדולה).

שינויים אחרים:

-גרגירים רעילים

-פסאודו נויטרופילים פלגר (הגרעין אינו מציג לובציות או שהם דו-גלגליים).

-גופות דמויות: תכלילים של ציטופלזמה כחולה כהה.

-בסופיליה מוגברת של ציטופלסמה.

Vakuoles אנטי-אטפלסמיים.

פיקניקוזה תאי (אובדן גשרים פנים-גרעיניים).

אאוזינופילים מפולחים

הם מייצגים 1-3% מכלל תאי הדם הלבנים. הם מודדים 9-10 מיקרומטר. הם מאופיינים בנוכחות גרגירים ציטופלסמיים אסידופיליים בשפע ומעט אזורופילים. בגרעין שלו שני לובולציות. מספרם עולה באלרגיות ובמחלות ממקור טפילי.

בזופילים מפולחים

הם נדירים ביותר, המהווים 0-1% מהלוקוציטים. הם מודדים 10-12 מיקרומטר. הגרעין בדרך כלל אינו סדיר בגבולות והוא עשוי להיות דו-ממדי, אך הוא לא נראה בגלל המספר הגדול של גרגרי בזופיל גסים בציטופלזמה שלו. לעיתים רחוקות מאוד ניתן לראות בזופיליה.

לימפוציטים

מדובר בתאים קטנים עם ציטופלזמה בזופילית, עם גרעין, מוגדר היטב, עגול, עם כרומטין מרוכז. הגרעין מקיף כמעט את כל התא. הם מייצגים 26-40% מכלוקוציטים בדם. הם מתגברים בזיהומים נגיפיים (לימפוציטוזיס). ניתן לראות לימפוציטים תגוביים.

מונוציטים

תאים גדולים מלימפוציטים, עם ציטופלזמה גדולה יותר וגרעיני כרומטין סגלגלים. הם מודדים 9-12 מיקרומטר. הציטופלזמה בשפע ונראה בדרך כלל כחול אפרפר בהיר בטכניקות צביעה סטנדרטיות. ניתן להבחין במונוציטים ריקים ומונוציטוזיס בין השינויים.

-טלטות

הם מודדים בין 1.5-3 מיקרומטר. צורתו עגולה או סגלגלה. הערך הרגיל נע בין 150,000 ל- 350,000 טסיות דם / mm3. הם יכולים לרדת בכמה זיהומים נגיפיים. אין להם גרעין והם בצבע סגול. ניתן לראות אי-תקינות בסדרה זו, כגון טסיות מאקרו או מיקרו, פקקת או טרומבוציטופניה וקטעי טסיות דם.

אלמנטים פתולוגיים

טפילי דם

המופרזיטים, כמו הסוכן הגורם למלריה או מלריה (טפילים מהסוג פלסמודיום), עשויים להופיע במריחות דם. מסיבה זו, חשוב שהמריחה תנותח ידנית, מכיוון שציוד אוטומטי מחמיץ את הממצא הזה.

בַּקטֶרִיָה

בפתולוגיות כמו חום חוזר ונשנה או מחלת ליים, ניתן לראות את הסוכן הסיבתי שלו. במקרה זה, זה תואם את Borrelia recurrenti spirochetes ו- Borrelia burgdorferi במריחת הדם.

תאים לא בשלים

מקרים חמורים נצפים בין היתר בלוקמיה, בתגובות לויקמואידיות ובתגובה לויקו-טרוסטרובלסטית. בזיהומים חיידקיים יתכנו סטיות קלות לשמאל (נוכחות נוכלים). ארתרובלסטים עשויים להופיע גם בכמה אנמיות.

הפניות

1. דם ורקמות המטופואטיות. ניתן להשיג ב: sld.cu
2. גומז A, Casas M. 2014. Angel. פרשנות מעבדתית קלינית. מהדורה 8. העריכה של מדיקה פאנמריקנה.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Accounts A. השוואה בין צפיפות טפילית בטיפת דם ורידית עבה לעומת אקופרסורה באבחון ויברקס מלריה. גב מד הרד 2002; 13 (4): 140-143. ניתן להשיג ב: scielo.org.
4. טרי לאונרד נלסון, מנדוסה הרננדס קרלוס. חשיבות המחקר של מריחת הדם ההיקפית בקרב קשישים. מדיסור 2017; 15 (3): 362-382. ניתן להשיג ב: scielo.sld
5. Grinspan S. מחקר של מריחת הדם ההיקפית. המשך לימודי רפואה. ניתן להשיג ב: bvs.hn/RMH