מרק אוריאה: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מרק אוריאה הוא מדיום תרבות נוזלי, נהגו לזהות נוכחות של אנזים באוראז ב מיקרואורגניזמים מסוימים. Ureas הוא אנזים מיקרוביאלי המיוצר בצורה מכוננת, כלומר הוא מסונתז ללא קשר אם המצע עליו הוא פועל או לא.

תפקוד השתן קשור לפירוק של תרכובות אורגניות. לא כל המיקרואורגניזמים מסוגלים לסנתז אנזים זה, ולכן קביעתו במעבדה מאפשרת זיהוי זני חיידקים מסוימים ואף להבדיל בין מינים מאותו הסוג.

בדיקת אוריאה שלילית וחיובית. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל.

ישנם שני סוגים של בדיקת אוריאה: סטיוארט וכריסטנסן. הם נבדלים זה מזה בהרכב וברגישות. הראשון הוא מיוחד להראות כמות גדולה של שתן המיוצר על ידי מינים של הסוג Proteus.

השנייה רגישה יותר ויכולה לאתר כמויות קטנות של שתן שנוצרו מאוחר על ידי ז'אנרים חיידקיים אחרים, כמו קלבסיאלה, אנטובקטר, סטפילוקוקוס, ברוסלה, בורדלה, באצילוס, מיקרוקוקוס, הליקובקטר ומיקובקטריום.

מרק האוריאה של סטיוארט מורכב מאוריאה, נתרן כלוריד, דיפוטסיום פוספט, מונופוטסיום פוספט, תמצית שמרים, פנול אדום ומים מזוקקים.

בינתיים, המרק או אגר אוריאה של כריסטנסן מורכב מפפונים, נתרן כלוריד, מונופוטסיום פוספט, גלוקוזה, אוריאה, אדום פנול, מים מזוקקים ואגר אגר. האחרון רק אם זהו המדיום המוצק.

בָּסִיס

האנזים אוראז ממצה הידרוליזה של אוריאה ליצירת פחמן דו חמצני, מים ושתי מולקולות של אמוניה. תרכובות אלה מגיבות ליצירת המוצר הסופי הנקרא אמוניום פחמתי.

האוריאה מרק של סטיוארט

מרק האוריאה של סטיוארט מאופק יותר עם pH של 6.8. לכן, המיקרואורגניזם חייב להיות מסוגל ליצור כמויות גדולות של אמוניה כדי להפוך את הפנול לאדום. ה- pH אמור לעלות מעל 8.

לפיכך, מרק האוריאה של סטיוארט הוא סלקטיבי עבור מינים של חלבון, ומביא תוצאות חיוביות תוך 24 עד 48 שעות מהדגירה, והוא אינו יעיל לחיידקים המייצרים כמויות נמוכות של שתן או שמאטים באטיות את האוריאה.

הסיבה לכך היא שמינים של חלבון מסוגלים להשתמש באוריאה כמקור חנקן. במקום זאת, חיידקים אחרים המייצרים urease זקוקים למקור נוסף.

עם זאת, פרז ואח '. (2002) קבע כי מרק האוריאה של סטיוארט היה יעיל כמו אגר האוריאה של כריסטנסן בקביעת שתן בגזעי שמרים של הז'אנרים קנדידה, קריפטוקוקוס, רודוטורולה, טריכוספורון וסכארומיומס.

מחברי המחקר טוענים כי השיגו הסכמה של 100% עם שתי המדיה (סטיוארט וכריסטנסן) בעת דגירה במשך 24 ו 48 שעות; למעט העובדה שהזנים שהצליחו להפוך את התקשורת לצבע ורדרד-פוקסיה חזקים נתפסו כחיוביים.

הבהרה זו הכרחית, מכיוון שלודר (1970) הצהיר שכמעט כל השמרים מצליחים להפוך את פוע אגר אוריאה של כריסטנסן לורוד בהיר. זה נובע מהעובדה שהם יכולים לעשות הידרוליזה של אוריאה בכמויות מינימליות, והיווצרות אמינים על ידי דקבוקסילציה חמצונית של חומצות אמינו על פני השטח. אין לפרש זאת כחיובי.

אוריאה של כריסטנסן אגר או מרק

מרק אוריאה של כריסטנסן או אגר פחות חוצצים, ויכול לגלות כמויות קטנות של אמוניה. יתר על כן, המדיום הזה מועשר בפפונים וגלוקוזה. תרכובות אלה גורמות לצמיחה של מיקרואורגניזמים אחרים המייצרים אורז שאינם צומחים במרק סטיוארט.

באופן דומה, בדיקת האוריאה של כריסטנסן מציעה תוצאות מהירות יותר, במיוחד עבור Proteus, היכולה לתת חיוביות חזקה תוך 30 דקות בלבד כזמן מינימלי ועד 6 שעות כזמן מקסימאלי.

שאר המיקרואורגניזמים המייצרים אורז מצליחים להפוך את צבע המדיום מעט לאחר 6 שעות, ובאופן חזק אחרי 24, 48, 72 שעות ומעלה, ואפילו כמה זנים יכולים לתת תגובות חלשות לאחר 5 או 6 ימים.

פרשנות של שתי המדיות (סטיוארט וכריסטנסן)

המדיום במקורו בצבע צהוב-כתום ותגובה חיובית תהפוך את צבע המדיום לורדרוד-פוקסיה. עוצמת הצבע עומדת ביחס ישר לכמות האמוניה המיוצרת.

תגובה שלילית תשאיר את המדיום של הצבע המקורי למעט שמרים, שעשויים להאיר ורוד בהיר על המדיום של אגרס אוריאה.

הכנה

האוריאה מרק של סטיוארט

שקלו את הגרמים הדרושים על פי האינדיקציות של החברה המסחרית. ממיסים במים מזוקקים סטריליים רצוי. אל תשתמש בחום כדי להתמוסס, שכן אוריאה רגיש לחום.

סינון הממברנה משמש לעיקור. לשם כך משתמשים במסנן מילייפור עם נקבוביות בקוטר 0.45 מיקרוגרם. אל תשתמש בחיטוי אוטומטי. לאחר סינון התמיסה, הוא מופץ לצינורות סטריליים. כדי להשיג תוצאות אמינות, יש להעבירו בין 1.5 מ"ל בכמות מינימלית ל- 3 מ"ל בכמות מקסימאלית לצינור.

מאחסנים במקרר ומחממים לפני השימוש.

אם שיטת הסינון אינה זמינה, יש להשתמש מיד במדיום בכדי להשיג תוצאות אמינות.

דרך נוספת להכין את מרק האוריאה של סטיוארט היא כדלקמן:

חלק מבתי המסחר מוכרים את המדיום הבסיסי לבדיקת אוריאה, לא כולל אוריאה.

נשקלת הכמות שצוינה על ידי החברה המסחרית. הוא מומס במים מזוקקים ומעוקר בחיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. מותר לעמוד מעט וכשהמדיום חם, מוסיפים 100 מ"ל של תמיסת אוריאה שהוכנה ב 20% ומעוקרים על ידי סינון.

זה מופץ בצינורות סטריליים, כפי שתואר קודם.

אוריאה של כריסטנסן אגר או מרק

הכנת תמיסת האוריאה

שוקלים 29 גרם של אוריאה מיובשת וממיסים אותם ב 100 מ"ל מים מזוקקים. יש לעקר את שיטת הסינון. אל תחטא אוטומטית.

-גר אגר בסיס

ממיסים 24 גרם אגר הבסיס המייבש ב 950 מ"ל מים מזוקקים. יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. הניחו לו לנוח עד שהוא יגיע לטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס והוסיפו את האוריאה שהוכנה בעבר באופן אספטי.

שופכים 4-5 מ"ל לצינורות סטריליים והטים עד ליציבות. צריך להיות מקור חליל ארוך.

ניתן להכין מדיום זה גם בצורה נוזלית.

יישומים

בדיקת האוריאה יעילה ביותר להבחנה בין הסוג Proteus לבין סוגים אחרים ב- Family Enterobacteriaceae, נוכח התגובה המהירה שמספקת Proteus.

באמצעות הרכב כריסטנסן, הבדיקה עוזרת להבדיל בין מינים מאותו הסוג. לדוגמא, S. haemolyticus ו- S. warneri הם Staphylococcus שליליים ו- Staphylococcus שליליים וקוגולאז, אך נבדלים זה מזה בכך ש S. haemolyticus הוא שלילי באוריאה ו- S. warneri הוא חיובי לאוריאה.

מצד שני, מקנולטי השתמש בהצלחה במתן אוריאה בשיעור 2% של כריסטנסן בכדי לחקור את נוכחותו של הליקובקטר פילורי בדגימות ביופסיה שנלקחו מרירית הקיבה (אזור האנטרלי).

הוכחת נוכחותו של H. pylori על ידי בדיקת אוריאה חיובית. משך הזמן לצפייה בתוצאות עומד ביחס ישר לכמות המיקרואורגניזמים הקיימים.

כפי שניתן לראות, זוהי שיטה פשוטה לאבחון של הליקובקטר פילורי בביופסיות קיבה.

לבסוף, בדיקה זו שימושית גם להבחנה בין מינים מהסוגות ברוסלה, בורדטלה, באצילוס, מיקרוקוקוס ומיקובקטריה.

זריעת בדיקת אוריאה

שתי השיטות דורשות חיסון מיקרוביאלי חזק בכדי לייעל את התוצאות. רצוי לקחת מושבות חיידקיות מאגר הדם ושמרים מאגר סבורוד, למעט כמה יוצאים מן הכלל. החיסון מתחלב במדיום הנוזלי.

עבור מרק האוריאה של סטיוארט, דגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות, בידיעה שאתה מחפש רק זני פרוטאוס כאשר הזן הוא חיידק. עבור שמרים ניתן לדגור אותה ב 37 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת החדר למשך 24 עד 48 שעות של דגירה.

במקרה של מרק אוריאה של כריסטנסן, הוא מודגר בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. אם הבדיקה שלילית, ניתן לדגור אותה עד 6 ימים. אם הבדיקה חיובית לפני 6 שעות, היא מצביעה על היותה זן של הסוג Proteus.

במקרה של אגר אוריאה של כריסטנסן, שפוע האגר מחוסן בחוזקה, ללא ניקוב. המרק מודגר ומפורש באותה צורה.

QA

ניתן להשתמש בזני בקרה כמו Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ו- Salmonella typhimurium לבדיקת המדיום. השניים הראשונים צריכים לתת תוצאות חיוביות ושתי התוצאות השליליות האחרונות.

מקור: Koneman E, אלן S, ג'נדה W, שרקנברגר P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.

הפניות

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. שימוש במרק השתן של סטיוארט לבדיקת השתן, כמבחן באבחון שמרים. הכמרית סגן וונ. מיקרוביול. 2002; 22 (2): 136-140. ניתן להשיג ב: Scielo.org.
2. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
3. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
4. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
5. מעבדות בריטניה. כריסטנסן בינוני (בסיס אגר אוריאה) 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com