מרק THIOGLYCOLLATE: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מרק thioglycollate הוא עקביות נוזל מועשר בינוני. זה ידוע בשם ראשי תיבות FTM בזכות ראשי תיבות שלו באנגלית Fluid Thioglycollate Medium. הוא נוצר על ידי ברואר ושונה בשנת 1944 על ידי ורה, שהוסיפה לו קזאין פפטון.

למדיום זה פוטנציאל הפחתת חמצון נמוך, ולכן הוא אינו מומלץ להתפתחות של חיידקים אירוביים קפדניים, אך הוא אידיאלי לשחזור חיידקים מיקרואירופיליים אירוביים, אנאירוביים קפדניים ובלתי דורשים.

מרק Thioglycollate ללא אינדיקטור. מראה פריקה בנרתיק. מקור: Bobjgalindo

הביצועים הגבוהים שנצפו עם מדיום זה בבידודם והתאוששותם של מגוון רחב של מיקרואורגניזמים, גרמו לכך שהוא התקבל על ידי הפרמקופיה האמריקנית (USP), על ידי האיגוד הרשמי של כימאים חקלאיים (AOAC) ועל ידי הפרמקופואה האירופית ( EP).

ארגונים אלה ממליצים עליה לבדיקת סטריליות לבדיקת מוצרים תרופתיים ולהעשרת דגימות מסוגים שונים.

הקאדו תיוגליקולט מורכב מתמצית שמרים, עיכול לבלב של קזאין, דקסטרוז מים נטול מים, ל-ציסטין, נתרן כלורי, נתרן תיוגליקולאט, רזזאורין ואגר בכמות קטנה.

ישנן מספר גרסאות של מדיום זה, ביניהן: מרק תיוגיקולייט עם אינדיקטור, מרק תיוגיקולאט ללא אינדיקטור, מרק תיוגיקולאט עם אינדיקטור מועשר בממין וויטמין K _1, ומרזל תיוגיקולאט עם סידן פחמתי.

ראוי לציון, משתנה המרק התיוגליקולאט המועשר בממין ובוויטמין K משמש להגברת צמיחתם של אנאירובים חריפים, וריאנט המרק התיוגיקולייט המכיל סידן פחמתי מועיל כנגד החומצות המיוצרות במהלך צמיחת המיקרוביום.

בָּסִיס

מרק Thioglycollate נחשב לאמצעי העשרה לא סלקטיבי שכן הוא מאפשר גידול של רוב החיידקים הלא קשוחים. הדרישות התזונתיות מסופקות על ידי תמצית השמרים, עיכול הלבלב וגלוקוזה.

מצד שני, המדיום הזה, למרות היותו מרק, מכיל כמות קטנה של אגר; המשמעות היא שיש לו פוטנציאל הפחתת חמצון נמוך, בשל העובדה שהוא מאט את כניסת החמצן, באופן שחמצן יורד ככל שהוא הולך עמוק יותר בצינור.

זו הסיבה שמדיום זה אידיאלי להתפתחות של חיידקים אנאירוביים אירוביים, מיקרואירופיליים ומחמירים, האחרונים 2 ללא צורך לדגור בתנאים אלה. אותו מדיום מווסת את כמות החמצן בתוך המדיום, בהיעדר בתחתית הצינור ובכמות מספקת על פני השטח.

כמו כן, התיוגליקולאט ו- L-cystine משמשים כגורמי הפחתה, ומסייעים במניעת הצטברות חומרים המזיקים להתפתחות חיידקים, כגון חמצן. בנוסף, תרכובות אלה מכילות קבוצות סולפידריל (-SH-), ומנטרלות את ההשפעות המעכבות של נגזרות כספית, ארסן, בין מתכות כבדות אחרות.

Resazurin מצדו הוא אינדיקטור להפחתת תחמוצת. חומר זה חסר צבע כאשר הוא מופחת וורוד כאשר הוא מחומצן. ישנם גרסאות מרק תיוגיקולייטות שאינן אינדיקטור. השימוש בו יהיה תלוי בסוג הדגימה ובהעדפת המעבדה.

בינתיים, נתרן כלורי שומר על האיזון האוסמוטי של מרק התיוגליקולאט והשימוש בגלוקוזה בצורה נטולת מים מונע עודף לחות במדיום המיובש.

הכנה

מרק Thioglycollate עם מחוון

שקלו 29.75 גרם מהמדיום המיובש והמיסו בליטר מים מזוקקים. ניתן לתערובת לעמוד כ -5 דקות. מביאים למקור חום ומערבבים לעתים קרובות עד להמסה מוחלטת.

שופכים את המדיום לצינורות המבחן והחיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. אפשר להתקרר לפני השימוש. בדוק בתוספות הבית המסחרי לצורך שימורו. חלקם ממליצים לאחסן בטמפרטורת החדר במקום חשוך, ואחרים במקרר מוגן מפני אור.

PH של המדיום המוכן הוא 7.1 ± 0.2.

צבעו של המדיום המיובש הוא בז 'בהיר והמדיום המוכן הוא ענבר בהיר עם מעט אופלסנטיות.

מרק Thioglycollate עם אינדיקטור מועשר בהמין וויטמין K

יש אמצעי מדיה מסחריים שכבר מכילים הממין וויטמין K ₁ , במיוחד לגידול אנאירובים.

אם אין לכם את המדיום המועשר לאנאירובים, תוכלו להכין את מרק התיוגיקולייט הבסיסי. לשם כך _{מתווספים} 10 מ"ג של המין הידרוכלוריד ו- 1 מ"ג ויטמין K ₁ לכל ליטר בינוני. עם זאת, אם מתווספים דם או סרום למרק התיוגליקולאט, אין צורך בתוספת חמין או ויטמין K.

מרק Thioglycollate עם סידן פחמתי

זה מגיע באופן מסחרי ומוכן לפי ההוראות בתוספת.

מרק Thioglycollate ללא אינדיקטור

יש לזה אותו הרכב של התיוגליקולאט הבסיסי, אך אינו מכיל רזזאורין.

שוקלים 30 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר מים מזוקקים. שאר התכשיר זהה לזה שמתואר במרק התיוגליקולאט עם המחוון.

להשתמש

מרק Thioglycollate שימושי להעשרת דגימות קליניות, במיוחד אלה מאתרים סטריליים. זה שימושי גם לדגימות לא קליניות, כמו קוסמטיקה, תרופות וכו '.

לצורך חיסון של דגימות נוזליות (כמו CSF, נוזל סינוביאלי, בין השאר), הדגימות עוברות תחילה צנטריפוג ואז נלקחות 2 טיפות מהמשקעים ומניחות בתוך המרק התיוגיקולולט. דגירה בחום של 35 מעלות למשך 24 שעות. אם אין צמיחה (עכירות) במהלך תקופה זו, היא מודגרת עד 7 ימים.

אם הדגימה נלקחת עם ספוגית, ראשית מחוסמים את אמצעי התרבות בצלחות ולבסוף מכניסים את הספוגית לתוך המרק, החלק הבולט מפוצל והצינור מכוסה, ומשאיר את הספוגית בפנים. דגירה בחום של 35 מעלות למשך 24 שעות, מקסימום 7 ימים.

עבור דגימות מוצקות, הומוגניזציה בתמיסת מלח פיזיולוגית (SSF) ואז חוסן את מרק התיוגיקולייט בשתי טיפות מההשעיה.

לעיתים זה יכול לשמש אמצעי הובלה לדגימות בהן יש חשד לאנאירובים קפדניים או כמרק העשרה לגיבוי.

משתנה המרק התיוגליקולאט עם סידן קרבונט משמש לשמירה על זני בקרה למשך זמן רב יותר, מכיוון שיש לו את היכולת לנטרל את החומצות המיוצרות על ידי שימוש בגלוקוז; חומצות אלה רעילות לחיידקים מסוימים.

צמיחה במרק התיוגיקולולט תצפה בעכירות המדיום. מומלץ לבצע כתם גראם ובהמשך תת-תרבות בתקשורת לא סלקטיבית וסלקטיבית, תלוי בסוג הדגימה ובמיקרו-אורגניזמים החשודים.

QA

לבקרת סטריליות מומלץ דגירה של מרק אחד או שניים ללא חיסון. התוצאה הצפויה היא מרק ברור, ללא שינוי צבע, אם כי נורמלי לראות צבע ורוד קל על פני הצינור.

לבקרת איכות יש לחסן בין 10 - 100 CFU של זני בקרה מוסמכים, כגון Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCCes 19404 Clogen 1940 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

דגירה בטמפרטורה של 30-35 מעלות צלזיוס באווירוביוזה למשך 24 שעות עד 3 ימים לכל היותר, מכיוון שמיקרואורגניזמים אלה צומחים במהירות.

התפתחות טובה צפויה בכל המקרים, למעט Micrococcus luteus ו- Bacillus subtilis, שם עשויה להיות התפתחות מתונה.

לבקרת איכות על מרק תיוגליקולאט מועשר בממין וויטמין K ₁ , ניתן להשתמש בזרני הבקרה Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 ו- Bacteroides fragilis ATCC 25285. התוצאה הצפויה היא צמיחה משביעת רצון.

המלצות

-לפעמים ניתן להבחין כי פני השטח של מרק התיוגליקולאט עם החיווי הופך ורוד; זה נובע מחמצון המדיום. אם הצבע הוורוד מכסה 30% או יותר מכל המרק, ניתן לחמם אותו באמבט מים למשך 5 דקות, לקרר אותו שוב ולהשתמש בו.

זה יסיר את החמצן שנספג, ויחזיר את המדיום לצבעו המקורי. ניתן לבצע הליך זה רק פעם אחת.

כדי לשפר את צמיחתם של חיידקים אירוביים, דגרו עם המכסה מעט משוחרר. עם זאת, עדיף להשתמש למטרה זו מרק עירוי לב מוח או מרק סויה טריפטיקאז לפיתוח נכון של אירובים קפדניים.

יש להימנע מהקפאת המדיום או התחממות יתר מכיוון ששני התנאים פוגעים במדיום.

-אור ישיר פוגע במדיום התרבות, יש לאחסן אותו מוגן מפני אור.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. Thioglycollate USP עם מחוון. 2015. זמין ב: labBritania.com.
2. מעבדות Chios Sas. 2019. מרק Thioglycollate. ניתן להשיג ב: quios.com.co
3. מעבדות BD נוזל Thioglycollate בינוני (FTM). 2003. זמין ב: bd.com/Europe
4. מדיה BBL שהוכנה בצינורות לגידול של מיקרואורגניזמים אנאירוביים. אמצעי תקשורת דו-גליקולית. 2013. זמין ב: bd.com
5. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.