מרק TETRATHIONATE: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מרק tetrathionate TT או המרק הוא מדיום תרבות הנוזלית סלקטיבי להעשרה וההתאוששות של זני סלמונלה סוג. זה נוצר על ידי מולר ושונה לאחר מכן על ידי קאופמן, וזו הסיבה שיש מי שקורא לזה מרק מולר-קאופמן.

המדיום המקורי הכיל פפוטונים לפרוטוז, סידן פחמתי ונותר תיוסולפט. קאופמן הוסיף לזה מלחי מרה ויצר אופציה נוספת עם ירוק בהיר. חומרים אלה מעכבים את צמיחת הקוליפורמים, ומשאירים את המדיום פנוי להתפתחות חיידקים פתוגניים, במקרה זה סלמונלה.

הוספת תמיסת יוד למרק tetrathionate. מקור: מנואל אלמגרו ריבס

השינוי היה מוצלח מאוד מכיוון שהוא הגביר משמעותית את הרגישות של המדיום. לפיכך, כיום מועיל לחיפוש סלמונלות בכל סוג של דגימה, אך בעיקר לצואה ומזון מוצק או נוזלי.

הכנתו מורכבת משני שלבים; המדיום המסחרי הוא בסיס להכנת מרק הטטרה-ביונאט, ובהמשך, כך שניתן ליצור את הטטרה-ביונאט, מתווסף תמיסת יוד מיודקת להשלמת המדיום.

האיגוד האמריקני לבריאות הציבור (APHA) ממליץ על שימוש במרק Tetrathionate בתוספת ירוק בהיר להעשרת דגימות לסלמונלה, מכיוון שהוא סלקטיבי יותר מאשר מרק Tetrathionate ו- Selenite.

באופן כללי, מרק טטרתיוניט הוא אידיאלי כאשר יש חשד לנוכחותם של חיידקים של הסוג סלמונלה בכמויות קטנות או כאשר הם מנוצלים לרעה על ידי חשיפה לחומרים מעכבים או על ידי תהליכים תעשייתיים אשר ממזערים את הכדאיות שלהם.

בָּסִיס

הפפטונים הנוכחים תואמים לעיכול הלבלב של קזאין ולעיכול פפטי של רקמות מן החי. אלה מספקים את המקור לפחמן, חנקן וחומרים מזינים כלליים לצמיחת חיידקים.

מצדו, נתרן תיוסולפט מגיב עם התמיסה המיודדת ויוצר טטרה-ביונאט. זה מעכב את צמיחת הקוליפורמים ומעדיף את התפתחותם של חיידקים המכילים את האנזים tetrathionate reductase, ביניהם הסוג סלמונלה, אך גם Proteus.

מלחי מרה משמשים גם כחומר מעכב לרוב החיידקים גראם-חיוביים וחלקם שלילי גראם (קוליפורמים).

סידן פחמתי סופג את החומרים הרעילים הנוצרים על ידי פירוק הטטרה-ביונאט, היוצר חומצה גופרתית. במובן זה, סידן פחמתי מנטרל את החומציות, ושומר על רמת החומציות של המדיום יציבה.

במקרה של המצב הירוק הבהיר, חומר זה מגדיל את העוצמה הסלקטיבית של מרק טטרתיונאט על ידי עיכוב מיקרואורגניזמים שאינם מין סלמונלה.

הכנה

-מרק מרתק

תמיסת יוד

לשקול:

• 6 גרם יוד.
• 5 גרם של אשלגן יוד.

יוד אשלגן מומס בכ- 5 מ"ל של מים מזוקקים סטריליים, ואז מוסיפים את היוד מעט לאט בזמן שהתערובת מחוממת. לאחר פירוקו המלא, מלא את הסימן עם מים מזוקקים סטריליים עד להגיע לנפח סופי של 20 מ"ל.

בסיס בינוני למרק טטרתיונט

שוקלים 46 גרם מהמדיום המיובש ומשלים אותו בליטר של מים מזוקקים סטריליים. מערבבים ומחממים עד להמסה מלאה, זה יכול להביא לרתיחה רק לכמה דקות. אל תחטא אוטומטית. לבסיס המדיום מותר להתקרר לכ- 45 מעלות צלזיוס ובמועד זה מתווסף 20 מ"ל מתמיסה יוד.

לאחר הוספת התמיסה המיודדת למדיום יש להשתמש בה מייד. אם אינך רוצה להשתמש בתערובת כולה, המשך כדלקמן:

10 מ"ל מתווך הבסיס מחולק לצינורות, ורק לאלו שיש לחסן באמצעות דגימות מתווסף 0.2 מ"ל מתמיסה יוד.

את אלה שלא מתכוונים להשתמש בהם ניתן עדיין לאחסן במקרר, אולם מכיוון שהמדיום אינו מעוקר, האידיאל הוא להכין את הכמות המדויקת הדרושה.

צבע המדיום לפני הוספת תמיסת היוד המיודן הוא לבן חלבי עם משקע לבן ואחרי ההוספה הוא חום עם משקעים צפופים. המשקעים שנצפו תקינים ומתכתב עם סידן פחמתי שאינו מתמוסס. ה- pH הסופי של המדיום הוא 8.4 ± 0.2.

וריאנט מרק משתנה עם ירוק בהיר

כדי להכין את המרק הירוק הטטרה-ביוניטי הבהיר, כל הצעדים המתוארים לעיל מבוצעים, אך בנוסף יתווספו לתערובת 10 מ"ל מהתמיסה הירוקה הבהירה שהוכנה ב- 0.1%.

ירוק זוהר

פיתרון זה מוכן כדלקמן:

שוקלים 0.1 גרם של ירוק בהיר ומשחים ב 100 מ"ל מים מזוקקים. מחממים לרתיחה בכדי להשיג פירוק מוחלט. לאחסן בבקבוק ענבר.

להשתמש

עבור דגימות צואה (תרבות צואה) הפרוטוקול הוא כדלקמן:

מחסנים 1 גרם של שרפרף מוצק או 1 מ"ל של שרפרף נוזלי בצינור עם 10 מ"ל של מרק tetrathionate מוכן לשימוש. מנערים נמרצות ודוגרים אירובי ב 43 מעלות צלזיוס למשך 6-24 שעות.

לאחר מכן, קח כמות של 10 עד 20 μl של המרק והתת-תרבות במדיום סלקטיבי לסלמונלה, כמו אגר SS, אגר XLD, אגר ירוק בהיר, אגר אנטיק Hektoen, בין היתר.

במקביל, יש לחסן מדיה סלקטיבית לסלמונלה במדגם הישיר (צואה) ללא העשרה. עבור דגימות ספוגיות רקטליות, פרוק את החומר שנאסף לתוך הצינור והמשך כמתואר לעיל.

עבור דגימות מזון, שקלו 10 גרם של מזון מוצק או 10 מ”ל של מזון נוזלי וחסמו בקבוק עם 100 מ”ל מרק טטרתיונאט מוכן לשימוש. המשיכו באותו אופן כפי שתואר לעיל אך דגרו בחום של 37 מעלות צלזיוס.

כפי שניתן לראות, הקשר בין המדגם למרק יהיה תמיד 1:10.

QA

ניתן להשתמש בזני בקרה ידועים לבדיקת מדיום התרבות. הנפוצים ביותר הם זנים מאושרים על ידי ATCC.

הזנים שישמשו הם סלמונלה טיפימוריום ATCC 14028, סלמונלה אבוני DSM 4224, סלמונלה enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ו- Staphylococcus aureus ATCC 25923.

צמיחה מצוינת צפויה לזני סלמונלה, בעוד שקולי Escherichia עשויים להיות בעלי צמיחה חלשה או קבועה, וזני Gram חיוביים (Enterococcus ו- Staphylococcus) מעוכבים באופן חלקי או מוחלט.

המלצות

מכיוון שמדיום זה אינו מעכב את צמיחתו של פרוטאוס, חלק מהמעבדות משתמשות ב- 40 מ"ג לליטר נובוביוזין כדי למנוע התפתחות זן חיידקי זה. יש להוסיף את האנטיביוטיקה לפני תמיסת היוד.

לאחר הכנת המדיום כולל תמיסת יוד, לא צריך לקחת יותר משעתיים לחיסון.

בעת חלוקת המדיום בצינורות, יש לבצע הומוגניזציה של התערובת ברציפות על מנת להחיות את המשקעים הנוצרים.

-בדגימות פחות מזוהמות, מרק ה- tetrathionate מודגר בטמפרטורה של 35-37 מעלות צלזיוס, ובדגימות מזוהמות מאוד מומלץ לבצע דגירה על 43 מעלות צלזיוס.

הפניות

1. מעבדת קונדה פרונדיסה. 2010. בסיס מרק Tetrathionate על פי Müeller-Kauffmann. זמין ב:
2. מעבדות BD. 2003. בסיס מרק Tetrathionate. זמין ב:
3. מעבדות בריטניה. 2015. מרק בסיס טטרנייט. זמין ב:
4. BBL מדיה. 2005. הוכן במבחנות לתרבות זן הסלמונלה.
5. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
6. פלורס-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. השוואה בין מדיה תרבותית של נתרן סלניט וטריאתטר נתרן, שניהם מודגרים ב 37 מעלות צלזיוס ו- 42 מעלות צלזיוס הבידוד של סלמונלה spp מצואה של נשאים. רב 'ביומד 2003; 14 (4): 215-220