סויה מרק tryptone הוא מדיום תרבות נוזלי, מזינים ביותר, לא סלקטיבי. בשל הרבגוניות הרבה שלה, זהו אחד ממדיות התרבות הנוזלית הנפוצות ביותר במעבדה למיקרוביולוגיה.
זה ידוע גם בשם מרק סויה טריפטי או קזאין-סויה מעוכל, שקיצורו הוא TSB עבור ראשי התיבות שלו באנגלית Tryptic Soy Broth או CST עבור ראשי תיבות שלו בספרדית. השימושים בו מגוונים מאוד בגלל הרכבו. זה מורכב מטריפטין, פפטה סויה, נתרן כלוריד, דיפוטסיום פוספט וגלוקוזה.
מרק סויה טריפטיקזין זרע עם זן של Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 שם נצפה ייצור פיגמנט. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל.
הוא מסוגל לשחזר חיידקים פתוגניים חשובים קלינית, כולל חיידקים תובעניים תזונתיים וחיידקים אנאירוביים. כמה פטריות אופורטוניסטיות ומזהמות יכולות להתפתח גם בסביבה זו.
בשל כוחו התזונתי הגבוה, יש לו רגישות גבוהה לאיתור זיהום מיקרוביאלי, מסיבה זו הוא נבחר על ידי שירות הבדיקה לבריאות הצומח של USDA לניתוח מיקרוביולוגי של חיסונים.
כמו כן, מרק סויה טריפטיקזין עומד בדרישות התרופות שונות (EP, אירופאי, ג'יי.פי. יפני וצפון אמריקה USP) למחקר מיקרוביולוגי של מוצרים ברמה התעשייתית, כגון קוסמטיקה ומזון.
מצד שני, ראוי להזכיר שלמרות התועלת הרבה שלה, המדיום הזה הוא יחסית זול, מה שהופך אותו בר השגה לרוב המעבדות המיקרוביולוגיות. זה גם קל מאוד להכנה.
בָּסִיס
טריפטין, פפטון וגלוקוזה מספקים תכונות תזונתיות חיוניות כדי להפוך אותו למדיום אידיאלי לצמיחה מיקרוביאלית מהירה.
בתוך 6 עד 8 שעות של דגירה, ניתן כבר לראות צמיחה ברוב המיקרואורגניזמים. עם זאת, ישנם זנים הגדלים באיטיות שיכולים לקחת ימים עד לגדילה.
נתרן כלוריד ודיפוטסיום פוספט פועלים כמאזן אוסמוטי ורגולטור pH בהתאמה. נוכחות נוכחות הצמיחה מעידה על ידי הופעת עכירות במדיום; אם אין צמיחה המדיום נשאר שקוף.
בשל צבעו האור, ניתן לצפות בייצור פיגמנטים, כמו זה שמוצג בתמונה בתחילת המאמר, התואם את הפיגמנט המיוצר על ידי Pseudomonas aeruginosa.
הכנה
מרק סויה סטרטיפטין
כדי להכין מרק סויה טריפטי, יש לשקול 30 גרם מהמדיום המסחרי המיובש בקנה מידה דיגיטלי. ואז הוא מומס בליטר מים מזוקקים הכלולים בבקבוק.
התערובת נותנת לנוח למשך 5 דקות ואז היא נלקחת למקור חום כדי לעזור להמיס את המדיום. יש לערבב אותו לעתים קרובות תוך כדי רתיחה למשך דקה.
לאחר מומס זה מופץ לצינורות בגודל המתאים לפי הצורך. ניתן להשתמש בצינורות עם תקעי כותנה או עם כובעי בקליט. בהמשך, מעוקרים הצינורות עם המדיום החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.
PH של המדיום חייב להישאר על 7.3 ± 0.2
יש לציין כי צבעו של מדיום התרבות המיובש הוא בז 'בהיר ויש לאחסן בין 10 עד 35 מעלות צלזיוס, במקום יבש. בעוד המרק המוכן בצבע ענבר בהיר ויש לאחסן במקרר (2 עד 8 מעלות צלזיוס).
-סוגים של מרק סויה טריפטיקזין
ניתן להכין מרק סויה טריפטיקזין שונה על ידי הוספת מלחי מרה ונובוביוזין בכדי להפוך אותו לסלקטיבי לבידודו של E. coli. אפשרות נוספת לאותה מטרה היא להכין מרק סויה טריפטיקאז בתוספת וונקומיצין, cefixime וטלוריט (2.5 מיקרוגרם / מ"ל).
מצד שני, ניתן להוסיף יותר גלוקוז (0.25%) למרק סויה טריפטיקזין כאשר המטרה היא לעורר היווצרות ביו-פילם.
להשתמש
הוא מזין דיו בכדי לאפשר גידול של חיידקים חריפים או קשים כמו Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp ו- Brucella sp, ללא צורך בתוספת דם או סרום.
באופן דומה, פטריות מסוימות יכולות להתפתח במרק זה, כמו מתחם קנדידה אלביקנס, אספרגילוס sp ו- histoplasma כמוסת.
יתר על כן, מדיום זה בתנאים אנאירוביים הוא אידיאלי להחלמת חיידקים השייכים לסוג קלוסטרידיום, כמו גם לחיידקים אנאירוביים שאינם ספורטיביים בעלי חשיבות קלינית.
אם מוסיפים 6.5% נתרן כלורי, ניתן להשתמש בו לצמיחת אנטרוקוקוס וסטרפטוקוקוס מקבוצה D.
ברמה המחקרית זה שימש מאוד בפרוטוקולים שונים, במיוחד במחקר של חיידקים ביו-פילם או ביו-פילם. הוא משמש גם להכנת ההשעיה החיידקית של Mac Farland 0.5% הנחוצה לביצוע האנטיביוגרם בשיטת קירבי ובאואר.
במקרה זה, 3 עד 5 מושבות בעלות מראה דומה נלקחות ומוחלפות ב 4-5 מ"ל של מרק סויה טריפטיקזין. לאחר מכן היא מודגרת במשך שעתיים עד 6 שעות בטמפרטורה של 35-37 מעלות צלזיוס ומותאמת לאחר מכן לריכוז הרצוי באמצעות מלח סטרילי. אין להשתמש במרחבי סויה של טריפטיקזין מ 18 עד 24 שעות של דגירה.
זָרוּעַ
ניתן להזריק את הדגימה ישירות או שניתן יהיה לתרבית תת-תרבות למושבות טהורות הנלקחות מהתקשורת הסלקטיבית. החיסון צריך להיות קטן כדי לא להעיב על המדיום לפני הדגירה.
בדרך כלל הוא מודגר ב 37 מעלות צלזיוס באירוביוזה למשך 24 שעות, אך תנאים אלה עשויים להשתנות בהתאם למיקרואורגניזם המבוקש. ניתן לדגור גם בתנאים אנאירוביים ב 37 מעלות צלזיוס למשך מספר ימים במידת הצורך. לדוגמה, ניתן לדגור דגימות מיקרואורגניזמים הצומחים במהירות או לקשיים עד 7 ימים.
בניתוח המיקרוביולוגי של חומרים תרופתיים - כמו חיסונים - הפרוטוקולים מחמירים יותר. במקרים אלה, המרק ללא הצמיחה אינו מושלך עד שהוא מגיע ל 14 יום של דגירה רציפה.
QA
מכל אצווה שהוכנה, יש לדגור דגימות של 1 או 2 צינורות לא מחוסנים. עליו להישאר ללא שינוי.
ניתן לשתול זנים ידועים כדי להעריך את התנהגותם. בין הזנים בהם ניתן להשתמש:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 או 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococc5C8C5C5C8C5C5C5C5C5C8C5C5C5C8C5C8C5C5C5C8C5, ATCC, 1961
בכל המקרים, הצמיחה חייבת להיות מספקת בתנאי האווירה והטמפרטורה המתאימים לכל מיקרואורגניזם.
מגבלות
התסיסה של הגלוקוז גורמת לירידה ב pH של המדיום עקב ייצור חומצות. זה יכול להיות שלילי לטובת הישרדותם של מיקרואורגניזמים מסוימים הרגישים לחומציות.
זה לא מומלץ לשמירה על זנים, מכיוון שבנוסף לחומציות, חיידקים מתכלה חומרים מזינים לאחר מספר ימים עם הצטברות כתוצאה של חומרים רעילים שהופכים את הסביבה ללא יכולת.
-אתה חייב לעבוד כדי לדאוג לכל פרוטוקולי הסטריליות, מכיוון שהמרקים מזוהמים בקלות.
לאחר הכנת מרק סויה של טריפטיקזין אסור לך לנסות להעביר מרק לצינור סטרילי אחר, מכיוון שתמרון זה פגיע מאוד לזיהום.
הפניות
- קונה E. תנאים למחקר רגישות טוב על ידי מבחן דיפוזר אגר. הכמרית צ'יל. אינפקטול. 2002; 19 (2): 77-81. ניתן להשיג ב: scielo.org
- מעבדת בריטניה. מרק סויה טריפטין. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדת MCD. מרק סויה טריפטיקזין. ניתן להשיג באתר: electronic-systems.com
- מעבדת נוגן. מרק סויה טריפטיך. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
- פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. הערכת טכניקת ההפרדה החיסונית המגנטית להחלמת Escherichia coli O157: H7 בקרמים חלביים. אלן. 2006; 56 (3): 257-264. ניתן להשיג בכתובת: scielo.org.ve
- גיל M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm formation in Staphylococcus aureus isolates על פי רגישות אנטי מיקרוביאלית ומקור קליני. ויטה. 2015; 62 (1): 1-8. ניתן להשיג ב: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. בידוד של Escherichia coli O157: H7 במצבים כפיים למטרה של צואת מעיים מעיריית מירנדה, מדינת זוליה, ונצואלה. הכומר סינט. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. ניתן להשיג ב: scielo.org