מרק malonate הוא המדיום תרבות נוזלי המשמש את בדיקת האבחון (malonate), המשמש להבחין בכמה סוגים של המשפחה Enterobacteriaceae. זה נוצר על ידי ליפסון בשנת 1933 ושונה אחר כך על ידי יואינג, שהוסיף כמות קטנה של תמצית דקסטרוז ושמרים לנוסחה המקורית.
המדיום מורכב כיום מתמצית שמרים, אמוניום סולפט, דיפוטסיום פוספט, מונופוטסיום פוספט, נתרן כלורי, נתרן מלונאט, דקסטרוז וכחול ברומותימול. בדיקה זו כלולה בדרך כלל בסוללת הזיהוי הביוכימית של Enterobacteriaceae, ועוזרת להבדיל בין סוגים ומינים מסוימים.
ייצוג גרפי של המבחן הממאיר. מבחן שלילי, ב. (חומציות) מבחן שלילי, ג. (בסיס בסיס בינוני) מבחן חיובי. מקור: צינורות צבע publicdomainpictures.net
בדיקת המלונאט מבוססת בעיקר על יכולתם של מיקרואורגניזמים מסוימים להשתמש במלונאט נתרן כמקור הפחמן היחיד שלהם ואמוניה סולפט כמקור החנקן שלהם.
בדיקת המלונאט לרוב חיובית בכמה מינים מסוג הזנים Enterobacter, Klebsiella ו- Citrobacter. ואילו מרבית מיני הז'אנרים אשלצ'ריה, סלמונלה, שיגלה, אדוארדיסה, ירסיניה, סרטריה, מורגנלה, פרוטאוס ופרובידנסיה, נותנים תגובה שלילית.
בָּסִיס
מבחן המלונאט מורכב מלהראות את אותם חיידקים המסוגלים להשתמש בנתרן מלונאט כמקור הפחמן היחיד ואמוניום סולפט כמקור החנקן.
מרבית Enterobacteriaceae שאינם משתמשים במלונאט מסוגלים לגדול במדיום זה, ולוקחים תמצית דקסטרוז ושמרים כחומרים מזינים.
במקרה זה, כל ניסיון לבצע בסיס בסיס על ידי שימוש בפפטונים יופעל על ידי ייצור חומצות הנוצרות כתסס של דקסטרוז. באופן דומה, דיפוטסיום ופוספטים מונופוטסיום פועלים כחוצץ ושומרים על רמת החומציות על 6.7.
זו הסיבה, כאשר הבדיקה שלילית, המרק נשאר באותו צבע מקורי (ירוק). במקרים נדירים המדיום עלול להפוך לחומצי בגלל תסיסה של דקסטרוז; ללא שימוש בפפונים ומחוון pH זה היה הופך את צבע המדיום לכיוון צהוב. כדי שזה יקרה, על ה- pH לרדת ל -6.
עם זאת, כאשר בדיקה זו חיובית, נאמר כי המיקרואורגניזם השתמש במלונט ובאמוניום סולפט כמקורות פחמן וחנקן בהתאמה, מבלי לעשות שימוש במרכיבים האחרים.
במקרה זה המדיום הופך להיות אלקליין בגלל שחרור הנתרן והיווצרותו של NaOH כתוצאה מכך. במובן זה, אינדיקטור ה- pH (כחול ברומותימול) הופך את צבע המדיום לירוק לכחול כאשר ה- pH שווה ל- 7.6 או יותר. כחול יכול להיות קל או עז (כחול פרוסי).
לבסוף, נתרן כלוריד שומר על האוסמולולריות של המדיום והמים הם הדילול של כל המרכיבים.
פרשנות
מרק צבע זהה (ירוק) - מבחן שלילי
מרק צהוב: מבחן שלילי
מרק כחול בהיר או עמוק: מבחן חיובי
יש וריאנט הנקרא מרק מלונאט פנילאלנין, המכונה גם שו והמדיום של קלארק. במקרה זה, ניתן לנתח שתי בדיקות, השימוש במלונט כמקור פחמן וייצור חומצה פירובית מפנילאלנין.
הכנה
מרק Malonate
שוקל כמות הגרמים שצוינה על ידי התוסף של החברה המסחרית שנבחרה (זה עשוי להשתנות מאחד לשני). הגרמים השוקלים מושעים במיליון מים מזוקקים. מחממים מעט עד להמסה מלאה. מחלקים 3 מ"ל מהמדיום לתוך צינורות מבחן 13/100 עם כובעי כותנה.
יש לעקר במערכת החיטוי בחום של 121 מעלות למשך 15 עד 20 דקות.
מצננים לפני השימוש. אם הם לא מתכוונים להשתמש מייד, יש לאחסן במקרר עד לשימוש. הביאו את המרק לטמפרטורת החדר לפני החיסון.
PH של המדיום צריך להיות 6.7 ± 0.2. צבע המדיום המוכן הוא ירוק בקבוק.
מרק פנינה אללנין
שקלו 11 גרם מהמדיום המיובש והמיסו בליטר מים מזוקקים. שאר ההכנה זהה לתאר קודם.
ניתן להכין אותו גם על ידי הוספת 2 גרם / ליטר פנילאלנין למדיום המרק המלונתי לפני שהוא מעוקר.
להשתמש
הוא משמש כחלק מסוללת הבדיקות הביוכימיות המורכבות לזיהוי חיידקים ממשפחת Enterobacteriaceae.
עוזר להבחין בין:
-הסוג Klebsiella ו- Enterobacter (+) של הסוג Escherichia ו- Serratia (-).
-מינים של סלמונלה enterica ssp arizonae, סלמונלה enterica ssp salame ו- Salmonella enterica ssp diarizonae (+), מהמין Salmonella enterica ssp enterica (-).
-ממין Klebsiella בדרך כלל (+) מהסוג Actinobacillus (-).
-לפעמים זה יכול לעזור להבדיל בין ז'אנרים ומינים של חיידקים שאינם שייכים למשפחת Enterobacteriaceae, כמו בקרב חסילי התסיסה Gram השליליים Alcaligenes faecalis (+) ו- Acinetobacter sp (-).
מקור: Koneman E, אלן S, ג'נדה W, שרקנברגר P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
תהליך
תחת מצית, נלקח חלק מקלן טהור, באמצעות ידית פלטינה מעוקרת ומקוררת כראוי. הדגימה שנלקחה (חיסון קל) מומסת במרק המלונאט. דגרו עם המכסה הרופף באירוביוזה בטמפרטורה של 35 מעלות צלזיוס ± 0.2 למשך 24 עד 48 שעות.
ניתן לבצע חיסון של מרק מלונאט מתרבית של 18-24 שעות במרק סויה טריפטיקאז. במקרה זה, נלקחים 0.01 מ"ל עם פיפטה סטרילית ומזריקים את המרק המלונתי. דגרו עם המכסה הרופף באירוביוזה בטמפרטורה של 35 מעלות צלזיוס ± 0.2 למשך 24 עד 48 שעות.
לאחר הזמן התוצאות מתפרשות. כל זכר של צבע כחול לאחר 48 שעות של דגירה צריך להיחשב חיובי. אין לפרש את הבדיקה כשלילית עד שחלף זמן הדגירה של 48 שעות.
במקרה של שימוש בווטר מרק פנילאלנין מלונאט, מלונאט מתפרש תחילה ואז מתווספות 5 טיפות של 1N HCl ו 3-5 טיפות של 8% כלוריד ברזלי. צבע ירוק כהה מתפרש כמבחן חיובי לפנילאלנין. אם לעומת זאת המדיום הופך לכחול בהיר, הבדיקה שלילית עבור פנילאלנין.
QA
כדי לבצע את בקרת הסטריליות של המדיום, יש לדגור מרק אחד או שניים בחום של 35 מעלות צלזיוס 0.2 למשך 24 שעות של דגירה. לאחר זמן זה לא צריך להיות עננות או שינוי צבע.
לבקרת איכות ניתן להשתמש בזנים ידועים או מוסמכים כגון: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 ו- Escherichia coli ATCC 25922.
התוצאות הצפויות הן:
- Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae ו- Salmonella enterica ssp arizonae נותנים תגובה חיובית (צבע כחול בינוני).
- עבור קולי Escherichia, התוצאה צריכה להיות שלילית, כלומר צפוי שלא יהיה שינוי צבע (ירוק) או שהוא יהפוך לצהוב בגלל התסיסה של הגלוקוז.
מגבלות
אל תשתמש במרק שמראה עכירות, משקעים, שינוי צבע או כל סימן להתדרדרות.
הפניות
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. בידוד מיקרוביולוגי של סלמונלה spp. וכלים מולקולריים לגילויו. Uninorte בריאות. Barranquilla (אל"מ) 2014; 30 (1): 73-94. ניתן להשיג ב: scielo.org.co
- BBL. Malonate Broth, יואינג שונה. 2007. זמין ב: bd.com
- מעבדות סנה. מרק מלונטו. ניתן להשיג ב: cientificasenna.com
- RenyLab. מרק מלונטו. 2013. זמין בכתובת: es.renylab.ind.br
- אבחון מביולוג. מרק מלונטו. ניתן להשיג ב: mbiolog.com
- Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- מעבדות קונדה פרונדיסה. מרק פנינה אלאלנין. ניתן להשיג ב: condalab.com