מרק לקטוז הוא אמצעי בלתי - בינוני תרבות הנוזלת סלקטיבית משמש בעיקר העשרה-מראש את הבידוד של זני סלמונלה מניתוח מיקרוביולוגית למזונות מעובדים, מוצרי חלב או מים. זה מומלץ על ידי הוועדה הבינלאומית למפרטים מיקרוביולוגיים למזון (ICMPF).
המדיום מכיל עיכול אנזימטי של ג'לטין, תמצית בשר ולקטוז, חומרים הנחוצים לצמיחת חיידקים. יתר על כן, לקטוז הוא פחמימה הניתנת לתסיסה, ולכן חלק מהקוליפורמים מסוגלים לפרק אותה עם ייצור גז.
מרקבים מנותקים עם עכירות. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל
מסיבה זו, מרק לקטוז מומלץ על ידי האיגוד האמריקני לבריאות הציבור (APHA) על המחקר החזוי של חיידקי קוליפורם מוחלט וצואה, ומאפשר זאת כאלטרנטיבה מצוינת להחלפת מרק טריפטוז לוריל סולפט בטכניקה הסטנדרטית של המספר הסביר ביותר (MPN). ), המשמש לניתוח מיקרוביולוגי של דגימות שפכים של מזון, חלב ומשטח, תת קרקעי, פנאי, ביתי ותעשייתי.
בָּסִיס
לצורך הניתוח המיקרוביולוגי של דגימות מסוימות, שלב העשרה לפני כן חיוני בכדי להיות מסוגל לשחזר מיקרואורגניזם ספציפי שעשוי להיות בכמות נמוכה מאוד או בתנאים לא טובים, שמפרים או ממזערים את הכדאיות שלו.
כזה הוא המקרה של מזון מיובש ומעובד, אולי מזוהם בסלמונלה sp. במקרים אלה, אם החיידק קיים, הם סבלו מהתעללות פיזית וכימית בתהליך ייצור המוצר.
באופן שמיקרואורגניזמים נחשפים לגורמים שליליים כמו התייבשות, חשיפה למוצרים מעכבים או רעילים והחפיפה הנוצרת על ידי נוכחות של חיידקים אחרים בכמות גדולה יותר, בין היתר.
במובן זה, למרק הלקטוז השפעה מתקנת על המבנים הפגועים של המיקרואורגניזם, וגורם לו להתאושש ולהתרבות באופן כזה שניתן לאתר אותו.
באופן דומה, למרק הלקטוז יש יכולת לדלל את החומרים המעכבים העלולים להשפיע על הכדאיות שלו, ומאפשרים את התפתחותו. בנוסף, ההרכב התזונתי של מרק הלקטוז הוא אסטרטגי לטובת צמיחת הסלמונלה על פני מיקרואורגניזמים אחרים.
לצורך הזיהוי הסופי, יש לתרבות אותו בתתי-מדיה לתקשורת סופית אחרת.
מצד שני, הרכב המדיום מאפשר גם לאתר מיקרו-אורגניזמים המותססים לקטוז המייצרים גז.
הכנה
להכנת ליטר מרק לקטוז, יש לשקול 13 גרם של המדיום המיובש ולהמיס אותו ב -1,000 מ"ל מים מזוקקים.
כדי לעזור להמיס את המדיום במים, ניתן לחמם את הפיתרון מעט, אך לא יותר מדי.
לאחר ההומוגנה, הפתרון מוכן באופן הבא: אם יש להשתמש במרק לחיפוש קוליפורמים, מכינים מתלה של מבחנות, לתוכו מוחדר צינור תסיסה של דוראם הפוך.
צינור הדרהאם הוא פרט חשוב מאוד, מכיוון שהוא יאפשר איתור היווצרות גז, נתונים בעלי ערך רב בחיפוש אחר קוליפורמים.
ברגע שהצינורות מוכנים, מחלקים לתוכם 10 מ"ל מרק הלקטוז, כמות שצריכה להספיק בכדי לכסות את כל צינור הדורהם.
אם יש להשתמש במרק הלקטוז כמרק העשרה לפני כן, אין צורך למקם צינור תסיסה של דוראם. במקרה זה, יש צורך בכמות גדולה יותר של מדיום (225 מ"ל), שתוגש בבקבוקי 500 מ"ל, פה רחב ועם מכסה בורג עמיד תרמו.
לאחר מכן, צינורות או צלוחיות מוחפים אוטומטית בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
המדיום חייב להישאר בחומציות pH סופית של 6.9 ± 0.2 ב 25 מעלות צלזיוס.
המרקים נשמרים במקרר עד לשימוש.
לפני השימוש יש להביא את המרק טמפרטורת החדר.
מצד שני, ניתן להכין את מרק הלקטוז בריכוז כפול.
מעבדות מסוימות מוסיפות סגול ברומוקרזול למרק הלקטוז כאינדיקטור pH, כדי להראות את הצינורות היכן שהוסס הלקטוז עקב שינוי צבע. במקרה זה, המרק מקבל צבע סגול ואם יש תסיסה הוא הופך לצהוב.
יישומים
במעבדות מיקרוביולוגיה נעשה שימוש נרחב במרק לקטוז שכן מדובר במדיום זול יחסית המציע תוצאות אמינות ומהירות (24-48 שעות).
זה יכול לשמש לניתוח קוליפורמים מוחלטים וצואה במזון ובמים או כמרק העשרה לפני סלמונלה.
העשרה מוקדמת
העשרה מוקדמת היא שלב לפני העשרת הדגימה, המשפר מאוד את התאוששותם של חיידקים של הסוג סלמונלה במזון מעובד.
לשם כך, נזרעים דגימת המזון המוצק (25 גרם) או נוזל (25 מ"ל) ב 225 מ"ל מרק לקטוז, ודוברים במשך 24 עד 48 שעות. לאחר מכן, הוא יעבור תת-תרבות במדיום מועשר כמו מרק ציסטין סלניט או מרק טטרתיונאט. לאחר מכן המשך למדיה סלקטיבית XLD ו- SS.
ניתוח כולל וקוליפורם צואה
זהו אמצעי מצוין כאינדיקטור לזיהום צואה.
מסיבה זו, מרק לקטוז הוא אידיאלי לשלב החזוי של מחקר הקוליפורם בשיטת המספר הגבוה ביותר.
עבור דגימות בהן יש חשד לכמות גדולה של קוליפורמים, תחוסן כמות קטנה יותר ממנה (1 מ"ל) ואילו לדגימות בהן יש חשד לכמות נמוכה יותר של קוליפורמים, יחוסן נפח גדול יותר של דגימות (10 מ"ל).
לצורך הניתוח מבוצעים דילולים של 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 ויוצרים סוללה של 3-5 צינורות לכל ריכוז המשמש.
מכל דילול זורמים אותו נפח למרקאות הלקטוז.
הצינורות מודגרים למשך 24 שעות. מרקים שליליים מודגרים למשך 24 שעות נוספות.
הפרשנות של התוצאות נעשית על ידי התבוננות בשני מאפיינים: הראשון הוא נוכחות או היעדר עכירות וכיוון שמדיום זה אינו מכיל אינדיקטור pH לא יחול שינוי בצבע.
השנייה היא ייצור או לא של גז. ניתן להבחין בגז בקלות בצינור הדורהאם על ידי הופעת בועות אוויר אחת או יותר בתוכו.
זה נחשב לחיובי אם נצפים שני המאפיינים, כלומר עכירות בייצור הגז. יש לזרוע צינורות חיוביים בתקשורת מאשרת (2% מרק מרה ירוקה מרהיב ובריחת EC).
בקרת איכות של המדיום
- כשמכינים את המדיום, חשוב לא לשכוח למקם את צינורות הדורהאם אם מטרתו של זה היא ללמוד קוליפורמים.
- אין לחמם את המדיום לפני שעברו עיקור.
- להפיץ במבחנות לפני הסטריליזציה, לעולם לא אחריה.
- אין להשתמש אם המדיום בן יותר משלושה חודשים.
- אין להשתמש אם אתה מבחין בשינוי כלשהו במאפיינים הרגילים של המדיום.
- כשמכינים אצווה של מרק לקטוז, יש לבדוק את איכותו על ידי זריעת זנים ידועים כמו Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii ו- Klebsiella pneumoniae. הם צומחים טוב מאוד, עם ייצור גז (שליטה חיובית).
- זה יכול לכלול גם Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium או Enterococcus faecalis, שצומחים היטב, אך ללא ייצור גז (בקרה שלילית).
- יש לציין כי הצבע המקורי של המדיום המיובש הוא בז 'וזה של המדיום המוכן הוא צהוב בהיר ושקוף מאוד. אם נצפה שינוי בצבע או במראה, הוא עלול להתדרדר.
הפניות
- Acevedo R, Severiche C, Castillo M. ביולוגיה סביבתית ומיקרוביולוגיה. (2013) מהדורה ראשונה. אוניברסיטת קרטחנה, קולומביה.
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ו- Velázquez O. (2009). טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. מהדורה שנייה הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו.
- מעבדות קונדה פרונדיסה. 2017. ריכוז כפול מרק לקטוז (אירופאי פארם.)
- Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. השוואה בין טכניקות למיצוי חיידקי קוליפורם מהמשקעים של אגם Xochimilco, מקסיקו. הכומר ארגנטנט. מיקרוביול. 2013; 45 (3): 180-184. ניתן להשיג ב: scielo.org.
- Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. קביעת האיכות המיקרוביולוגית של מי הבאר האמנותיים במחוזות המחוזות המרכזיים, קורדילרה ועיריית הבירה. משרד החקירה. מַדָע. בריאות 2013; 11 (1): 5-14. ניתן להשיג ב: scielo.iics.