מרק EC: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מרק EC coli Escherichia או המרק הוא מדיום תרבות נוזל סלקטיבית. אמצעי זה מומלץ על ידי השיטות הסטנדרטיות לספירת קוליפורמים כולליים וצואיים, על ידי טכניקת המספרים הסבירה ביותר (MPN) במדגימות מים ומזון, כאשר הסוכן העיקרי המעורב הוא Escherichia coli.

מרק EC מורכב מטריפטין, לקטוז, מלחי מרה, דיפוטסיום פוספט, מונופוטסיום פוספט, נתרן כלורי ומים. הנוסחה שלה מיועדת אסטרטגית לטובת צמיחתם של קוליפורמים מוחלטים וצואה ומניעת התפתחות של מיקרואורגניזמים נלווים אחרים.

ייצוג פיגורטיבי של הכנת מרק EC. מקור: Pixabay.com

חיידק קולי Escherichia coli הוא הקוליפורם הצואה העיקרי שנמצא כמזהם במקורות מים ומזון, והוא הגורם להפרעות חשיבות במערכת העיכול.

יש לציין שישנם הרבה סרוטיפים של Escherchia coli; ביניהם ניתן להזכיר את enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) ו- enteroaggregative (EAEC).

למדיום זה יש את היכולת לאפשר התפתחות של כולם, אך מבלי שהוא מסוגל להבדיל ביניהם. זה דורש בדיקות נוספות.

המחקר המיקרוביולוגי של מים ומזון לפי המספר הסביר ביותר (MPN) לחיפוש קוליפורמים מוחלטים וצואה הוא פרוטוקול המורכב ממספר שלבים; שלב חזקה, שלב אישור ושלב השלמה. מרק EC משמש בשלב האישור.

בָּסִיס

מרק EC

המדיום EC מבוסס על אספקת האלמנטים התזונתיים הנחוצים להתפתחות מיטבית של קוליפורמים מוחלטים וצואיים, בהם כלולים חיידקי הקולי Escherichia.

אלמנטים תזונתיים אלו ניתנים על ידי טריפטין, היותם מקור מצוין לפפטידים וחומצות אמינו. בנוסף, הוא מכיל גם לקטוז, פחמימה מותססת המספקת אנרגיה ומאפשרת להראות אם החיידקים מייצרים גז.

מצד שני, המדיום מכיל מלחי מרה המספקים את האופי הסלקטיבי, מכיוון שהוא מעכב את צמיחתם של מיקרואורגניזמים חיוביים גראם שעלולים להימצא במדגם.

באופן דומה, דיפוטסיום פוספט ומונופוטסיום פוספט משמשים כמערכת איזון pH. מערכת זו הכרחית מכיוון שהלקטוז הכלול במרק נוטה להחמיר את המדיום כאשר הוא תוסס על ידי מיקרואורגניזמים, אך זה מפוצה על ידי מלחי הפוספט.

לכן, יסודות אלה הם חיוניים, מכיוון שהחומציות הבלתי מבוקרת יכולה להשפיע על ההתפתחות התקינה של המיקרואורגניזמים המבוקשים.

מצידו, נתרן כלוריד מייצב את המדיום באופן אוסמוטי, בעוד מים הם הממס למומסים הקיימים ומספקים את העקביות הנוזלית למדיום.

מרק EC-Novoviocin שונה

אוקרנד ורוז יצרו מגוון של מרק EC, שנקרא מרק EC שונה ב- Novobiocin. השינוי כלל הפחתת ריכוז מלחי המרה והוספת 20 מ"ג / ד"ל של נובוביוזין.

שינוי זה תומך בהתאוששות זני Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

סרוטיפ חיידקי זה גורם לקוליטיס hemorrhagic קשה שיכול להוביל לתסמונת האורמית המוליטית (HUS); אשר בתורו יכול ליצור אי ספיקת כליות חריפה, עם שיעור תמותה גבוה שיכול להגיע עד 50% בקרב קשישים.

בשל התחלואה והתמותה השנתית הנגרמת על ידי חיידק זה כתוצאה מצריכת מזון מזוהם, ממליצה משרד החקלאות של ארצות הברית (USDA) מאוד להשתמש במדיום זה.

הכנה

מרק EC

שוקלים 37.4 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר של מים מזוקקים. יש לאפשר לתערובת לעמוד 5 דקות. לאחר מכן, במקור חום, הוא מסיים להתמוסס על ידי ערבוב תכוף.

לאחר פירוקו, הוא מופץ לתוך מבחנות מבחן מראש עם צינור דוראם בפנים. יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

PH של המדיום צריך להיות 6.9 ± 0.2. צבע המדיום המיובש בצבע בז 'והמדיום המוכן הוא ענבר בהיר.

המרקים נשמרים במקרר עד לשימוש. בזמן השימוש, המרק חייב להיות בטמפרטורת החדר.

מצד שני, ניתן להכין את מרק ה- EC בריכוז כפול.

מרק EC-Novoviocin שונה

שוקלים 36.7 גרם של מדיום מיובש וממיסים בליטר 1 מים. שאר התכשיר זהה לתאר לעיל.

להשתמש

ניתוח כולל וקוליפורם צואה

מרק EC אידיאלי לשלב המאשר של חקר הקוליפורמים בשיטת NMP, הן בדגימות מים, כמו גם במוצרי תרופות ומזון.

יש להקיש מחדש מרקבי לקטוז מייבשים ומייצרים גז המתקבלים בשלב החזקה, בשני מרקמים ירוקים בהירים של מרה 2% ובמרק EC.

עבור סה"כ קוליפורמים, מרדיבי EC מודגרים באופן אירובי במשך 24 עד 48 שעות בחום של 37 מעלות צלזיוס, ולגבי קוליפורם צואתיים הם מודגרים אירובית במשך 24 עד 48 שעות ב 44 מעלות צלזיוס.

בשני המקרים זה מתפרש כך: צינורות עכורים עם ייצור גז נחשבים לחיוביים. אם אין ייצור גז תוך 24 שעות, הדגירה נמשכת עד 48 שעות.

מרווחים חיוביים ל- EC עוברים לשלב האישור המלא, המורכב בהשבתה מחדש על מדיה סלקטיבית כמו אגר מק קונקי, אגר EMB או אגר אנדו.

אם המרק בו נעשה שימוש הוא EC-novobiocin שונה, מומלץ לשחזר צינורות חיוביים על אגר מק-קונקי עם סורביטול.

QA

חייבים להיות מבוקרים על כל אצווה של מדיום מוכן. ראשית, יש להעריך את הסטריליות של המדיום. במובן זה, מרק אחד או שניים מודגרים ללא חיסון באירוביוזה למשך 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. התוצאה הצפויה היא מרק שקוף, ללא עכירות או שינוי צבע.

שנית, יש להעריך את גידול הזנים הידועים, לשם כך ניתן להשתמש בחיידקים הבאים: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

בכל המקרים, צפויה התפתחות מיקרוביאלית משביעת רצון, תוך התבוננות במרק מעונן עם ייצור גז עבור E. coli וללא גז לסלמונלה.

זנים אחרים שניתן לכלול בבקרה הם: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. יש לעכב זנים אלה לחלוטין.

המלצות

-מיקום צינורות הדורהם חיוני למחקר קוליפורמים.

- חלוק המדיום במבחנות לפני הסטריליזציה, לעולם לא לאחר מכן.

אל תשתמש אם המדיום בן יותר משלושה חודשים.

אל תשתמש אם נצפה שינוי כלשהו בתכונות הרגילות של המדיום.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. EC בינוני. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. המרכז לביטחון מזון ובריאות הציבור. 2010. זמין בכתובת: cfsph.iastate.edu
3. תאגיד Neogen. EC בינוני. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
4. ניוגן. Novobiocin שונה בינוני EC. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. איתור, בידוד ואפיון של קולי Escherichia המייצרים רעלן שיגה מבשר טחון טרי מקצבים בקונספסיון, מחוז מטוקומאן. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. ניתן להשיג באתר: www.scielo.org.