תא NEUBAUER: היסטוריה, מאפיינים, שימושים - ביולוגיה - 2025

קאמרי נויבאואר , hematometer או hemocytometer, הוא מכשיר מעבדה מורכב צלחת זכוכית עבה מיוחדת. מצלמה זו משמשת לספירת סוגים מסוימים של תאים כגון תאי דם אדומים, תאי דם לבנים וטסיות דם, אם כי ניתן להשתמש בה לספירת נבגים, זרע, טפילים וכו '.

הוא מציג כמה מאפיינים מוזרים מאוד, מכיוון שהוא מורכב משלושה אזורים, אחד מרכזי לספירה ושני אזורי תמיכה. לכל חדר שני אזורי ספירה או כיסאות, אחד בחלקו העליון ואחד בתחתית.

חדר Neubauer. מקור: SantiBadia. תמונה ערוכה.

אלה יש חלוקות מרובות בצורה רשת. אזורי הספירה הם הריבועים הבינוניים הנמצאים בארבע הפינות של שתי הגרבולות, בתוספת הריבוע המרכזי.

הרכבת המצלמה חייבת להיעשות בזהירות רבה, שכן כל פרט משפיע על ספירת התא. ישנן טעויות רבות שניתן לבצע, אך אם מתרחשות אחת מהן, יש לפרק את המצלמה, לנקות אותה ולהרכיב אותה מחדש. השגיאות העיקריות כוללות את הדברים הבאים:

הצפת החדר או מילוי מלא, מניחה לתא להתייבש, מנסה להסיר עודף נוזלים עם גזה, להטות את החדר בעת הובלתו, למלא תא מלוכלך או רטוב, לא לערבב היטב את הדילול או הדגימה, בין היתר. כל השגיאות הללו יובילו לערך לא מציאותי.

הִיסטוֹרִיָה

תא Neubauer הוא מכשיר דיוק, ותהליך הייצור עובר בקרת איכות קפדנית. הוא נוצר לספירה מדויקת של חלקיקים או אלמנטים נוצרים למ"מ ³ , כמו תאים בנוזלים שונים. הגרפיקה העדינה שלה מגולפת בעפרון יהלום.

מאפייני תא Neubauer

החדר כולו הוא בגודל של מגלשה רגילה כך שניתן יהיה למקם אותה על במת המיקרוסקופ.

החדר מורכב משלושה משטחים מלבניים מרכזיים (a, b, c). באזור "b" נמצא אזור R או אזור הספירה, המכונה גם תכנית reticulation. אחד מכל צד של המצלמה, מופרד על ידי אזור "d".

תרשים גרפי של לשכת נויבאואר. מקור: מדריך מעשי להמטולוגיה. בית הספר לביואנליזה של אוניברסיטת קרבובו, ונצואלה.

כל גרטולה היא אזור מלוטש המכיל את שטח הספירה החקוק. הוא מורכב מריבוע עם שטח פנים של 9 מ"מ ² ומחולק באופן פנימי ל 9 ריבועים עם שטח פנים של 1 מ"מ ² כל אחד. ארבעת ריבועי הפינה מחולקים ל -16 ריבועים קטנים יותר (0.0625 מ"מ ² בשטח).

רשתות אלה נוצרות על ידי סדרה של קווי מילימטר המצטלבים זה עם זה, ומהווים רשתות גרף מושלמות המופרדות למדידות שצוינו. קווים אלו נחרטו בקצה יהלום.

תוכנית משופרת של Neubauer משופרת. מקור: מדריך מעשי להמטולוגיה של בית הספר לביואנליזה של אוניברסיטת קרבובו, ונצואלה.

ארבעת הצדדים תואמים את שטח הספירה. בצדדים או בפינות אלה סופרים רוב התאים (תאי דם אדומים ולויקוציטים) ואילו טסיות הדם סופרות באזור המרכז.

באזור המרכזי יש יותר חלוקות, הוא מורכב מריבוע 1 מ"מ ² המחולק ל -25 ריבועים שיש שטח פנים של 0,04 מ"מ ² כל אחד. אלה בתורם מחולקים ל -16 רשתות בשטח של 0.0025 מ"מ ² .

תיאור התוכנית המשופרת של Neubauer. א) ריבוע הפינות, ב) ריבוע מרכזי, ג) ריבוע חציוני של הכיכר המרכזית. מקור: מדריך מעשי להמטולוגיה של בית הספר לביואנליזה של אוניברסיטת קרבובו, ונצואלה.

אזור "a" ו- "c" משמשים כתמיכה להצבת חפץ כיסוי מיוחד הנקרא שקופית המטומטרית או כיסוי המטמטרימי.

הגובה בין נייר הכסף למשטח הספירה הוא 0.1 מ"מ. מדידות שטח הפנים של תיבות האות, כמו גם גובה החדר ודילול הדגימה, הן נתונים הנחוצים לצורך ביצוע החישובים הסופיים.

יישומים

הוא משמש לספירת תאים. זה מועיל במיוחד באזור המטולוגיה, מכיוון שהוא מאפשר ספירה של 3 סדרות תאי הדם; כלומר כדוריות דם אדומות, תאי דם לבנים וטסיות דם.

עם זאת, ניתן להשתמש בו באזורים אחרים, למשל לספור זרע, נבגים, חיידקים או פריטים אחרים החשובים בהתאם לסוג הדגימה.

איך להישתמש?

הכנת מדגם

כדי לבצע את ספירת התאים, בדרך כלל זה מתחיל מדילול קודם. דוגמה: לספור תאי דם לבנים, הכינו דילול 1:20 עם הנוזל של טורק. הדילול מעורבב היטב לפני טעינת הפיפטה והרכבת תא Neubauer.

יש מקרים שבהם די דילול 1:20 אינו מספיק כדי לספור. לדוגמה, בחולים הסובלים מסוגים מסוימים של לוקמיה כרונית. במקרים אלה יש לבצע דילולים גבוהים יותר כמו 1: 100.

אם לעומת זאת הספירה נמוכה מאוד, כמו בסרטן לויקופנינים חמור, ניתן לבצע דילולים קטנים יותר כדי לרכז את הדגימה. דוגמה: אתה יכול לבצע דילול של 1:10.

השינויים שבוצעו משפיעים על החישובים.

הרכבה בחדר Neubauer

תא Neubauer מורכב על ידי הצבת השקופית המטומטרית באזור המרכז. שניהם חייבים להיות מאוד נקיים ויבשים. כדי למקם את הלמלה, היא נלקחת בקצוות ומוטלת בעדינות על המצלמה.

זה ממולא על ידי הצבת קצה פיפטה או פיפטה אוטומטית של תומא בזווית של 35 מעלות בקצה אזור הטעינה. הנוזל מוזרם בצורה חלקה ואזור הטעינה מתמלא בקיבולת. זה נעשה משני הצדדים כדי לטעון את שני הכסאות.

אסור להעמיס על הרשתות יתר ולא לשלול מהם נוזלים. העומס חייב להיות מדויק. חשוב שהמילוי ייעשה בצורה הומוגנית, כלומר שלא יהיו בועות.

לאחר הרכבת החדר נותר לנוח למשך 2 דקות כך שהתאים יורדים לתחתית והדמייתם וספירתם קלה יותר.

לאחר זמן המנוחה הוא מותקן על במת מיקרוסקופ האור לתצפית. ראשית הוא ממוקד עם מטרה 10X ובמידת הצורך אז הוא עובר ל 40X.

כדי לשפר את הדמייתו, מעבר האור מהמיקרוסקופ מצטמצם. לשם כך מורידים את הקבל והסרעפת מעט סגורה.

סְפִירָה

עבור ספירת תאי דם לבנים או לויקוציטים, יש למנות את כל פני השטח של ארבעת ריבועי הפינה החציוניים והריבוע המרכזי של כל תכנית reticulus.

הספירה מתחילה בכיכר בפינה השמאלית העליונה. אתה מתחיל מהריבוע הראשון בשורה הראשונה, כלומר משמאל לימין עד שתגיע לקצה ההפוך.

שם אתה יורד ומחזיר את מבטך מימין לשמאל עד שתגיע לקצה השני וכן הלאה, התאים בתוך כל רשת נספרים בצורה של זיגזג. 16 הרשתות של כל ריבוע חציוני נספרות.

כדי להימנע מספירת תא פעמיים, ישנם כללים לגבי התאים שנמצאים בקווי הגבול של כל רשת. תאים בשורות השמאליות והעליונות נספרים ומתעלמים מהתאים בקווים הימניים והתחתונים.

מונה תא ידני חייב להיות זמין כך שהמפעיל לוחץ על מקש ההתקן פעמים רבות ככל שיש תאים שנצפו. בעזרת הדלפק, המפעיל יכול לספור מבלי שיצטרך להסתכל מהשדה המיקרוסקופי. בסוף הספירה תראה את המספר הכולל של התאים שנספרו.

חישובים

לצורך החישובים תוכלו להמשיך בכמה דרכים. ניתן למנות גרטולה בודדת או לספור את שניהם ושניהם ממוצעים. בשני מצבים אלה, יש להכפיל את התאים שנספרו בגורם, שבמקרה זה יהיה 40. וכך ^מתקבלת הספירה הכוללת למ"מ ³ .

אבל אם שתי הרשתות נספרות והממוצע לא נלקח, יש להכפיל אותה בגורם אחר, במקרה זה ב- 20.

- גורם ריבוי

כך מחושב גורם הכפל.

נתונים שונים נלקחים בחשבון לצורך החישובים, כולל טיטר הדילול, גובה החדר והאזור שנספר.

מְהִילָה

הדילול הסטנדרטי המשמש הוא 1:20 לספירת הלוקוציטים.

גובה החדר

הגובה בין החדר לעליית תאי הדם הוא 0.1 מ"מ.

שטח נספר

אם נספרו 5 ריבועים של שטח ¹ מ"מ ² , זה אומר ששטח הספירה הכולל הוא 5 מ"מ ² . יש להכפיל את הנתונים האלה בגובה התא כדי להשיג את הנפח הכולל שנספר. כלומר, 5 מ"מ ² x 0.1 מ"מ = 0.5 מ"מ ³ .

נוסחאות וחישובים

עם הנתונים שיש לנו נאמר:

אם ב 0.5 מ"מ ^{3 -} ישנם --- מספר התאים שנספרו

ב 1 מ"מ ³ --- יהיו - X מעלות תאים

מספר X של תאים = (מספר תאים שנספר x 1) / 0.5 מ"מ ³

אך יש לקחת בחשבון גם דילול. לכן הנוסחה היא כדלקמן:

(מספר התאים שנספרו x 1) x 20 / 0.5 מ"מ ³

לבסוף, לסיכום, ניתן להכפיל את מספר התאים שנספרו ב- 40. לפיכך, ^מתקבל הערך של לויקוציטים למ"מ ³ .

אם נספרים שני הרשתות משנה את הנתונים עבור האזור שנספר, שבמקרה זה יהיו 10 ריבועים, כלומר 10 מ"מ ² . ונפח כולל של 1 מ"מ 3. הנוסחה תהיה:

(מספר התאים שנספרו x 1) x 20/1 מ"מ ³

לכן, במקרה זה גורם הכפל יהיה 20.

טעויות

-אם בעת טעינת המצלמה חריגה או חריגה מנוזל, גובה המצלמה ישתנה. התוצאה היא שהספירה גבוהה מהדבר האמיתי. אם אתה מנסה להסיר את העודפים בעזרת גזה או כותנה, זו טעות ענקית. פעולה זו תגרום להתרכז של התאים, תגדיל את הספירה.

אם הוא טעון בצורה לא טובה, הספירה תהיה נמוכה מהספירה.

אם המצלמה מותקנת ומורשה להתייבש, כבר לא ניתן לספור מכיוון שהיא תביא תוצאות שגויות.

אם הדילול של הדגימה לא מתערבב היטב לפני טעינת החדר, ישנו סכנה לשגיאה בקריאה, מכיוון שהתאים לא יופצו בצורה הומוגנית. לכן תהיה ריכוז נמוך יותר או גבוה יותר של תאים, תלוי אם הדגימה נלקחת משטח הנוזל או מתחתית הצינור בהתאמה.

נוכחות בועות מפחיתה את כמות הנוזל שחייבת להיכנס לתכנית הרשת, מה שמפריע להדמיה ולהפצה נכונה של התאים. כל זה משפיע באופן משמעותי על התוצאות.

במהלך הספירה, אל תסתכל מהמיקרוסקופ עד שתושלם כל ריבוע גדול כדי לא ללכת לאיבוד.

-סיבה לטעות היא הטיית המצלמה לאחר ההרכבה. מסיבה זו, יש להעלות בזהירות את שלב המיקרוסקופ.

המלצה

אם מסיבה כלשהי אתה מגלה חריגה במילוי החדר, מומלץ לפרק את התכשיר הזה, לנקות את החדר ולהרכיב אותו מחדש מאפס.

יש לנקוט בזהירות רבה כשאתה מנקה את המצלמה כדי למנוע שריטות בשערות הצולבות. מצד שני, שימו לב שהמגלשה ההמטומטרית עדינה ושברירית. טיפול לא נכון יכול לשבור אותו.

לפני שתתחיל לספור, וודא שהתאים מופצים היטב. התפלגות לא אחידה של תאים מתרחשת מתוך ערבוב או דילול מדגמים לקויים. אם זה קורה, יש לחזור על ההרכבה.

אחת הדרכים לדעת אם התאים מפוזרים היטב היא על ידי השוואת ספירת כל ריבוע גדול, אין לתלות את הגודל של התאים שנספרו לכל ריבוע באופן מוגזם מאחד לשני.

- אם ספירת תאי הדם הלבנים היא מעל 50,000 מ"מ ^3, רצוי לחזור על הספירה, תוך ביצוע דילול גדול יותר.

אם תשנה את הדילול, עליך לחשב מחדש את גורם הכפל, מכיוון שזה משפיע על הנוסחה.

הפניות

1. קרדונה-מאיה ו ', ברדוגו ג'יי, קדאוויד א'. השוואה בין ריכוז הזרע באמצעות חדרו של מקלר וחדרו של נובאואר. אקטאס אורול אספ 2008; 32 (4): 443-445. ניתן להשיג ב: scielo.
2. חדר Neubauer. (2018, 27 במרץ). ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. תאריך ייעוץ: 04:10, 23 ביוני, 2019 מ- es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. יישום שיטת ספירה אלטרנטיבית בחדר נובאואר לקביעת ריכוז Trichomonas vaginalis. הכמרית קוב מד טרופ 2001; 53 (3): 180-8. ניתן להשיג ב: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. ניתוח הספרוגרמה. הכמרית ונציה. אנדוקרינול. מטאב. 2007; 5 (2): 19-20. ניתן להשיג ב: ve.scielo
5. מדריך המטולוגי המעשי של בית הספר לביואנליזה של אוניברסיטת קרבובו. ונצואלה, 1998