רוז בנגל היא בדיקת מעבדה המבוססת על תגובה נוגדן נוגדן לאבחון ברוזלוזיס. הטכניקה מאפשרת איתור נוגדנים ספציפיים כנגד חיידק ברוסלה אבורטוס בדגימות סרום אנושיות. ניתן לדווח על התוצאה באופן איכותי או חצי כמותי.
הצורה האיכותית מבטאת אם המטופל חיובי או שלילי למבחן, כלומר האם יש נוגדנים או לא. בינתיים הדוח הכמותי החציוני מדווח ב- IU / ml ומציין את הכמות המשוערת של הנוגדנים הקיימים. יש לציין כי נוגדנים יופקו רק אם המטופל היה במגע עם המיקרואורגניזם.
תגובת רוז בנגל בצלחת אגרגינציה. מקור: לקוח מהסרטון https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
בשל הפשטות הרבה, הרגישות הגבוהה והספציפיות שלו, זוהי אחת מטכניקות הסרוגגלוטינציה המשמשות ביותר ברפואה כבדיקה ראשונית לאבחון של מחלה זו.
ישנם חוקרים שהשוו את היעילות של בדיקת רוז בנגל עם טכניקות אחרות, כמו סרוגגלוטינציה (אנטיגנים קדחתניים), וצפו כי למרות שיש קשר טוב, הם ראו מקרים בודדים שבהם בדיקת האנטיגן הקודחת הייתה שלילית ורוז דה התלקחות חיובית.
ההבדל שהתקבל נבע מהעובדה שלמטופלים אלה הייתה תת-סוג של נוגדנים מסוג IgG כנגד abortus Brucella עם יכולת קשירה טובה יותר ב- pH חומצי, ולכן הם יכלו להגיב עם המגיב של רוז בנגל אך לא עם זה של אנטיגנים קדחתיים.
במובן זה, הם הציעו לשנות את הריאגנטים בטכניקת האנטיגן הקודח ל- pH חומצי, כך שיוכלו לאתר סוג זה של המקרים.
בָּסִיס
המגיב רוז בנגל מורכב ממתלה אנטיגני. זה מורכב מהזן S99 של ברוסלה אבורטוס, המדולל במאגר חומצה לקטט (pH 3.6), בתוספת פנול וצבע הוורד בנגל.
לכן, במדגם שמבקש הם נוגדנים נגד ברוסלה, אם אלה קיימים הם יגיבו עם האנטיגן המגיב ותצפה תגובה אגרגינציה גלויה מקרוסקופית. הבדיקה מגלה נוגדני IgM או נוגדנים מסוג IgG.
המשמעות היא שהיא יכולה לגלות את המחלה הן בשלב האקוטי שלה בו נוגדניות IgM שולטות והן בשלב הכרוני שבו נוגדני IgG שולטים.
זה מייצג יתרון מכיוון שהוא מגביר את הרגישות של הבדיקה, אך יחד עם זאת זהו חיסרון מכיוון שהוא אינו מבחין בין שלב לשלב, מכיוון שהתגובה עם נוגדני IgM ו- IgG זהים.
תמיד יש לבצע את הבדיקה יחד עם בקרה שלילית ובקרה חיובית. הביקורת השלילית מכילה סרום מן החי ללא נוגדנים והשליטה החיובית מכילה סרום ממקור בעלי חיים עם 50 IU / ml של נוגדנים נגד ברוסלה.
להשתמש
ברוסלוזיס היא מחלה קשה הנוטה להיות כרונית ומסוכנת, ולכן חשוב מאוד שתאבחן אותה בשלב מוקדם. זהו זונוזיס ובני אדם יכולים להידבק במגע ישיר עם חומר מזוהם, כאשר האנשים הפגיעים ביותר הם וטרינרים ומטפלים בבעלי חיים.
זיהום יכול להתרחש גם על ידי אכילת בשרים גולמיים נגועים, בין צורות זיהום אחרות.
מחלה זו תוקפת מקומית או מערכתית. הצורה המערכתית היא החמורה ביותר, מכיוון שאפשר להיפגע באיברים שונים, כולל מערכת האנדותל הרטיקולי (כבד, טחול, מח העצם), עור (צלוליטיס ולמפדנאופתיה), מערכת הנשימה (דלקת ריאות), מערכת שרירים ושלד (דלקת פרקים, sacroiliitis ו- spondylitis), בין היתר.
מבחן רוז בנגל הוא טכניקה שימושית מאוד לביצוע סינון ראשוני, מכיוון שהיא מאוד לא יקרה, נוחה לשימוש ובעלת ספציפיות ורגישות רבה.
מקרים של שליליים כוזבים וחיובי כוזבים הם נדירים ביותר ויכולים להופיע אצל אנשים עם כותרות נוגדנים נמוכות מאוד (<25 IU / ml) או גבוהים במיוחד (> 1000 IU / ml) בהתאמה.
תהליך
חומרים
ערכת בנגל ורוז
-צלחת אגרגינציה רקע לבן
פיפטה -50 μl
-רוטורור (לא חובה)
-מְעַרבּוֹלֶת
טכניקה (שיטה איכותית)
ערכות רוז בנגל מסחריות מגיעות עם ריאגנטים מוכנים לשימוש.
- טמפרטורת הריאגנטים לפני שתתחיל לעבוד.
-לוחות האגרגינציה מצוירים מעגלים, כל אחד מהם למדגם שונה. השתמש בשלושה מעגלים, הראשון לבקרה השלילית, השני לדגימה והשלישי לבקרה החיובית.
- הניחו טיפה או 50 μl מהפקדים והמדגם במעגל המתאים שלהם.
-ערבב את המגיב רוז בנגל באמצעות מערבולת. הניחו טיפה לצד אלה שהונחו בעבר.
-ערבב עם קיסמי עץ (השתמש באחד לכל דגימה או בקרה). בצע תנועות סיבוביות ונמרח כך שתכסה את כל העיגול.
מקור: תמונות שצולמו מווידיאו: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. פריסת תמונה ערוכה.
-הניח את הצלחת על סיבוב אוטומטי בסביבות 80 עד 100 סל"ד או סובב ידנית במשך 4 דקות. קרא את ההוכחה בסוף זמן זה.
ודא שהבקרות נתנו כצפוי. השווה את התגובה של מדגם הבדיקה עם הפקדים. דווח כחיובי אם נצפתה agglutination וכשלילי אם אין agglutination.
בדיקה חיובית מצביעה על כך שלמטופל יש כמות השווה ל- 25 IU / ml של נוגדנים נגד ברוסלה.
פרשנות של תגובה חיובית (עם agglutination) ושלילית (ללא agglutination). מקור: Citrulline. תמונה ערוכה.
טכניקה (כמותית-כמותית)
אם בתגובה האיכותית המדגם חיובי מאוד, ניתן לכמת אותו למחצה. לשם כך, דילולים כפולים סדרתיים של הדגימה נעשים עם תמיסת מלח פיזיולוגית. ההליך שתואר קודם מתבצע בכל דילול.
זה מתפרש גם על ידי התבוננות באגרגינציה מקרוסקופית. התוצאה תהיה הכותרת של הדילול הגבוה ביותר בו נצפתה תוצאה חיובית.
כדי לחשב את הערך המשוער של נוגדנים נגד ברולה, משתמשים בנוסחה הבאה:
25 IU / ml x titer תגובה = IU / ml
דוגמה, אם חולה בבדיקה החצי כמותית בודק חיובי בדילול ½, ¼ ו- 1/8 ומתחיל להיות שלילי מהדילול 1/16 ואילך, פירוש הדבר שלמטופל יש טיטר של 8 .
החלת הנוסחה:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
לערכות יש תאריך תפוגה ויש לכבד אותו. אין להשתמש בו אם התוקף פג.
במהלך השימוש, וודא כי המגיב אינו מכיל חלקיקים מוצקים, מכיוון שזה סימן להתדרדרות.
- שמור על בין 2 ל 8 מעלות צלזיוס.
- אל תקפיא, מעשה זה פוגע בתגובה באופן בלתי אפשרי.
תמיד מבצעים את הבדיקה יחד עם הביקורת השלילית והחיובית.
-הטכניקה סובלת דגימות סרום בדרגה מסוימת של ליפמיה והמוליזה, אולם לא מומלץ להשתמש בסתר מוגזם ליפמתי וממווליזה, שני התנאים משנים את תוצאות הבדיקה.
תמיד מביאים ריאגנטים לטמפרטורת החדר לפני תחילת הניתוח.
-אל תפרש את התגובות שנמשכות זמן רב יותר מהזמן המומלץ, מכיוון שהדבר מייצר דיווח על פוזיטיביות שגויות, שכן לאחר זמן מסוים המגיב יורד, המדמה תגובה חיובית.
הטכניקה רגישה במאה אחוז ובעלת ספציפיות של 98%.
לאחר כימות למחצה של 1000 IU / ml קיימת אפשרות לצפות באפקט פרוזון (שלילי שגוי בגלל עודף נוגדן בהשוואה לכמות האנטיגנים).
הפניות
- Rubio M, Barrio B ו- Díaz R. ערך בדיקות הרוזה דה בנגאלה, קומבס ובדיקות נגד אימונואלקטורפורזה לאבחון מקרים של ברוזלוזיס אנושי בהם agglutination סרום שלילי. המחלקה למיקרוביולוגיה. שירות מיקרוביולוגיה קלינית. מרפאת האוניברסיטה. אוניברסיטת נווארה. 406-407. ניתן להשיג ב: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "ברוסלוזיס." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 6 דצמבר 2019, 14:37 UTC. 18 בדצמבר 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- מעבדות מונלב. מונלב רוז בנגל - מבחן. 2016. זמין ב: monlab.es/
- קרילו סי, גוטוזו אי ברוסלוזיס. הכומר פרו. Med. Exp. בריאות הציבור 1997; 14 (1): 63-66. ניתן להשיג ב: scielo.org
- Morales-García R, García-Meneze N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. מעקב תגובת שרשרת קלינית, סרולוגית ופולימראזית של משפחה עם ברוזלוזיס. הכמרית צ'יל. אינפקטול. 2014; 31 (4): 425-433. ניתן להשיג ב: scielo.conicyt.