בינוני סטיוארט: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2024

סטיוארט הבינוני הוא אגר מוצק למחצה או מרק ללא חומרים מזינים, המשמש להובלת דגימות ביולוגיות. מטרתו לשמור על קיום זנים הקיימים במדגם למשך זמן מסוים, אך מבלי להגדיל את אוכלוסיית החיידקים.

הוא נוצר על ידי מופט, יאנג וסטיוארט בשנת 1948 ושונו לאחר מכן על ידי טושח ופסולה. זה מורכב מנותר גליצרופוספט, נתרן תיוגליקולט, סידן כלוריד ואגר-אגר. האחרון קיים במדיום החצי מוצק ונעדר בנוזל. מעבדות מסוימות מוסיפות לזה כחול מתילן.

תרבות עם הסעות סטיוארט. מקור: מאת: CDC / Dr. גילדה ג'ונס, באדיבות: ספריית תמונות לבריאות הציבור

הם משמשים בדרך כלל כאשר לא ניתן לזרוע את הדגימה באופן מיידי. במקרה זה, הדגימה מונחת במדיום ההובלה, תוך שהיא מועברת למעבדה שתעבד את התרבות.

באופן זה מובטח כי המיקרואורגניזמים הקיימים נשארים בחיים עד שהם מחוסנים בתקשורת התרבות המתאימה.

בתחילה, השימוש בו נועד להובלת דגימות שופכה או בנרתיק בהן היה חשד בנוכחות Neisseria gonorrhoeae. מאוחר יותר הם הבינו שהשימושיות שלה יכולה להיות רחבה יותר.

המדיום של סטיוארט התגלה כיעיל מאוד בשימור מיקרואורגניזמים סבילים ועזים כמו Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis, ועוד. בנוסף למיקרו-אורגניזמים שאינם מעצבנים אחרים כמו Enterobacteria.

המדיום של סטיוארט בעצם מונע את ייבוש הדגימה, שומר על האיזון האוסמוטי ושומר על המיקרואורגניזמים בחומציות אידיאליות. מצד שני, אסטרטגית המדיום הזה אינו מכיל חומרים מזינים, ובכך מונע מהתרבות מיקרואורגניזמים.

בשוק ישנם מכשירי הובלה מדגמיים מיוחדים המכילים אמצעי תובלה זה או אחר, המכונה culturette. ניתן להכין אותם גם במעבדה.

בָּסִיס

מטרת אופן ההובלה של סטיוארט היא לשמור על הדגימות קרובות למצבם המקורי עד לעיבודן.

נתרן גליצרופוספט וסידן כלוריד היא מערכת חיץ הפועלת על ידי שמירה על pH ואוסמולולריות.

בינתיים, נתרן תיוגיקולאט משמש כחומר מצמצם ובמקרה של מכיל אגר הוא נותן לו עקביות חצי מוצקה, כדי לעכב את החמצון של המדיום. לבסוף, כחול מתילן הוא אינדיקטור לחמצון, כלומר הוא מגלה את נוכחות החמצן.

המדיום החצי מוצק עם מחוון redox הוא אידיאלי להובלת דגימות בהן יש חשד לנוכחות חיידקים אנאירוביים.

מאפייני אמצעי התחבורה

המדיום סטיוארט, כמו כל אמצעי התחבורה, עומד במאפיינים מסוימים, כולל:

-שמירה על זני מיקרוביאלי קיימא ללא כפל.

-לא מכיל חומרים מזינים; תרכובותיה מכוונות לשמור על מדגם התייבשות, בתנאי pH ו osmolarity נאותים.

- מעכב את האוטוליזאט של מיקרואורגניזמים עדינים, כגון פנאומוקוקוס.

השימוש בה הוא זמני, אין להאריך אותו יותר מדי.

הכנה

בינוני סטיוארט למחצה מוצק עם מחוון redox

הכנת בית

רכיבים

נתרן גליצרופוספט 10 גר '

נתרן תיוגיקולאט 1.0 גר '

סידן כלוריד 0.1 גר '

כחול מתילן 0.002 גרם

אגר-אגר 3 גר '

מים מזוקקים 1 ליטר

מערבבים את הרכיבים ומחממים עד להמסה מלאה. יוצקים לתוך צינורות או ספלים מיוחדים. הם מוחדרים לחיטוי ומעוקרים בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. תנו לצינורות להתקרר במצב אנכי (בצורת בלוק). שמור בטמפרטורת החדר.

הכנה עם מדיום מסחרי

שקלו 14.1 גרם מהמדיום בליטר מים מזוקקים. מחממים לרעוד לעתים קרובות עד להמסה מלאה, ניתן להרתיחה. שאר ההליך כפי שכבר תואר.

המדיום המיובש הוא בצבע שמנת והמוכן צריך להיות כחול על פני השטח. זה נובע מנוכחות כחול מתילן.

יש להתאים את pH של המדיום ל -7.4 ± 0.2

סטיוארט בינוני-שונה נוזלי (תוצרת בית)

רכיבים

נתרן גליצרופוספט 10 גר '

נתרן תיוגיקולאט 1 גר '

סידן כלוריד דיאטראט 0.1 גר '

מים מזוקקים 1000 מ"ל

יש לו אותם רכיבים כמו המוצק למחצה, אך אין לו אגר, או כחול מתילן. במקרה זה, הרכיבים מעורבבים ללא חימום ומחולקים 0.5 מ"ל בצינורות 16X125 מ"מ עם מכסי בורג.

זה מעוקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 10 דקות. לצורך הדגימה, יש להשתמש במטליות דקרון אם המדגם מיועד ל- PCR או לרזון אם זה מיועד לתרבות.

הצינורות מאוחסנים בטמפרטורת החדר.

יישומים

מבחינה מסחרית ישנם מכשירי הובלה מדגמיים מיוחדים הנקראים culturette; מכשיר זה הוא צינור מוארך ודק שיש בו ספוגית בפנים ובקצהו יש קטע המכיל את מדיום סטיוארט חצי מוצק או נוזלי.

המכשיר נפתח והדגימה נלקחת בעזרת ספוגית. לאחר מכן הוא מוחדר חזרה לתוך הצינור עד לקצה המשטחית מוחדר למדיום ההובלה למחצה; יש המביאים ספוג פוליאוריטן הספוג בתווך סטיוארט הנוזל, איתו נשמרת הדגימה כאשר היא כלואה רטובה.

במקרה שיש חשד לנוכחותם של מיקרואורגניזמים עדינים, יש להשתמש בספוגות כותנה עם פחם לאיסוף הדגימה.

הדגימות הניתנות לנטילה בעזרת מטליות או מטליות והעברה במדיום זה הן אקסודטים של הלוע, ספוגיות פי הטבעת והפרשות שונות, ביניהן: נרתיק, שופכה, פצע, עיכול, אוטיק ומורסה.

במהלך העברת הדגימה במדיום ההובלה למעבדה יש ​​להימנע מכפיית התנאי לתנאים סביבתיים קיצוניים (קרים מדי או חמים מדי). יש להימנע גם משינויים פתאומיים בלחץ האטמוספרי.

הזמן בו המדיום מסוגל לשמור על קיום של מיקרואורגניזם יהיה תלוי בגזע המדובר. לדוגמה, עבור מיקרואורגניזמים של הסוג נייסריאס והמופילוס הם יכולים להישאר בר-קיימא עד 24 שעות, אך זנים כמו סלמונלה או שיגלה יכולים להימשך ימים ואף שבועות.

אם מעריכים כי עיבוד הדגימה עשוי לארוך יותר מארבעה ימים, עדיף להקפיא את המדגם על -70 מעלות צלזיוס.

זיהוי המדגם באמצעי תובלה

אמצעי התובלה המוכנים או התרבות המסחרית חייבים להיות בעלי תווית ובה יוצב המידע הבא:

שם פרטי ושם משפחה של המטופל: נמנע מבלבול מדגימה.

מספר זיהוי: נוח לשמור על סדר בעבודה.

מקור איסוף דוגמאות: מסייע לחיידק לבחור את אמצעי המדיה המתאימים לתרבות.

רופא מטפל: לעיתים יש צורך בהתייעצויות אפשריות.

תאריך ושעה של איסוף הדגימה: יש צורך בקבלה או דחיית המדגם בהתאם לזמן שחלף בין איסוף הדגימה לקבלה במעבדה.

מידע אחר שעשוי מאוד לצרף הוא:

האבחנה החזקה: מנחה את הוספת המדיה התרבותית המיוחדת על פי החשד לאבחנה.

טיפול אנטיביוטי: כדאי לספח אותו לאנטיביוגרם.

כל מידע זה חיוני בכדי להבטיח עיבוד מדגם נכון.

QA

כדי להעריך את הביצועים של מדיום סטיוארט, ניתן להזריק זנים ידועים ולהישמר על 25 מעלות צלזיוס, כגון: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, StreptococcCC pneumoniae.

בכל המקרים צפוי להחלים את המיקרואורגניזם המדובר, שנשמר למשך 24 שעות.

מצד שני, ניתן להשתמש בזנים אחרים כגון: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ו- EschCerichia coli.

בכל המקרים צפויה התאוששות בשפע של עד 96 שעות.

מגבלות

כמה מחקרים מבטיחים כי ניתן לחילוף חומרים של גליצרופוספט הקיים במדיום סטיוארט על ידי חלק מהקוליפורמים, בין היתר חיידקים גראם שליליים, ולכן הם מתרבים במדיום זה.

סיכון זה גדל ככל שעיבוד הדגימה מתעכב. באופן דומה, חשיפת המדיום סטיוארט לטמפרטורות גבוהות במהלך ההובלה משפיעה על כך.

הפניות

1. "אמצעי תעבורה (מיקרוביולוגיה)." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 13 אפריל 2018, 10:36 UTC. 1 באפריל, 2019. זמין בכתובת: es.wikipedia.org
2. מעבדות מיקרו קיט: מדיה תרבותית. הסעות סטיוארט. ניתן להשיג ב: זמין ב: Medioscultivo.com
3. LabLisan. אמצעי התחבורה של סטיוארט. ניתן להשיג ב: lablinsan.cl
4. MDM מדעי. היתרונות של אמצעי הובלה מיקרוביולוגי של סטיוארט. ניתן להשיג ב: mdmcientifica.com
5. מעבדות מטריקס. סטיוארט. 2017. זמין ב: metrixlab.mx
6. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
7. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.