מדיום מיו: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2024

בינוני MIO היא בדיקה ביוכימית נהג לסייע בזיהוי של מינים של חיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae. הוא די מזין ומורכב מגלוקוזה, תמצית שמרים, פפטון, טריפטין, ל-אורניטין הידרוכלוריד, סגול ברומוקרזול ואגר.

משמעות ראשי התיבות שלו (MIO) מתארת ​​כל אחד מהפרמטרים שניתן לצפות במדיום זה; תנועתיות, אינדול ואורניטין. תנועתיות היא היכולת של המיקרואורגניזם לנוע עקב נוכחותה של סמלונים. בכדי שניתן יהיה לצפות במאפיין זה, על עקביות המדיום להיות חצי מוצק, כך שהתכשיר מכיל פחות אגר.

מתווה הפרשנות של התוצאות במדיום ה- MIO. מקור: הוכן על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל

הייצור של אינדול מראה את נוכחותו של האנזים טריפטופנאז הפועל על חומצה אמינית טריפטופן, המחייב שימוש בריגנט חושפני בכדי להראות את ייצור האינדול.

לבסוף, אורניטין קובע אם החיידק מסוגל לדקרבוקסילציה של חומצת האמינו, כלומר אם יש לו את האנזים אוריניטין decarboxylase.

בָּסִיס

פפטון, תמצית שמרים וטריפטין

אלמנטים אלה תורמים לכוח התזונתי של מדיום זה. הם משמשים כמקור לחומרים מזינים וחומצות אמינו חיוניות להתפתחות חיידקים.

בנוסף, טריפטין הוא מקור ל טריפטופן להראות את נוכחותו של האנזים טריפטופן, אשר משבש את טריפטופן על ידי דימינציה רדוקטיבית, משחרר אינדול, חומצה פירובית, אמוניה ואנרגיה.

אינדול חסר צבע, ולכן נוכחותו מתגלה על ידי הוספת חמש טיפות של מגיב של ארליך או קובץ ', שתיהן עם p-dimethylaminobenzaldehyde.

קבוצת האלדהיד של תרכובת זו מגיבה עם האינול ויוצרת מוצר אדום בצורת טבעת פוקסיה על פני האגר.

כל זכר של צבע צריך להיחשב כמבחן חיובי. יש לקרוא את ההוכחה מייד, שכן עם הזמן הצבע משפיל.

יתרה מזאת, יש לחשוף בדיקה זו לאחר שצוינו תוצאות התנועתיות והדק-בוקסילציה של אורניטין.

פרשנות

מבחן חיובי: היווצרות טבעת אדומה של פוקסיה בעת הוספת טיפות של מגיב Kovacs.

מבחן שלילי: אין היווצרות טבעת.

כּוֹשֵׁר תְנוּעָה

יכולתם של החיידק לנוע תהיה ניכרת אם נצפה מדיום מעונן או אם יש קו גדילה עבה שמתרחב סביב החיסון הראשוני.

ניתן להבחין בבדיקת תנועתיות שלילית על ידי התבוננות בקו צמיחה דקיק, וכל מה שמסביבו יהיה ללא צמיחה.

חשוב לקרוא את התנועתיות לפני שמתגלה האינול, שכן תוספת המגיב מעיבה על המדיום כולו.

בחיידקים ניידים אך בעלי צמיחה איטית קשה להדגים את תנועתיותם עם מדיום זה. במקרה זה, מומלץ להשתמש בבדיקות או בשיטות אחרות, כמו תנועתיות בינונית או שיטת ההמתנה לטיפה.

גלוקוזה

גלוקוז הוא הפחמימה הניתנת להתססה שבנוסף לספק אספקת אנרגיה מחמצת את הסביבה, תנאי הכרחי להתרחשות הדקרבוקסילציה של חומצת האמינו אורניטין.

התסיסה של הגלוקוז חייבת תמיד להתרחש, החל מהעיקרון שכל החיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae מתסיסים את הגלוקוז.

ל-אורניטין

במקרה שהחיידקים מייצרים את האנזים אורניטין דקרבוקסילאז, זה עשוי לפעול ברגע שהמדיום הוחרם על ידי תסיסה של גלוקוז.

האנזים אורניטין דקרבוקסילאז פועל על קבוצת הקרבוקסיל של חומצת האמינו ומייצר אמין המכונה פוטרזין שמבסיס את המדיום מחדש.

יש לקרוא את הבדיקה הזו לאחר 24 שעות של דגירה, מכיוון שאם תנסו לקרוא לפני תוכלו לפרש את הבדיקה בטעות בשלילה שגוי.

יש לזכור שהתגובה הראשונה שמתרחשת היא תסיסה של גלוקוזה ולכן המדיום הופך צהוב בשלב ראשוני (10 עד 12 שעות ראשונות). אם לאחר מכן מתרחשת אורבנין דק-בוקסילציה, המדיום יהפוך לסגול.

חשוב לפרש את מבחן האורבנין decarboxylation לפני חשיפת אינדול, שכן תוספת המגיב של קובץ 'משנה את צבע המדיום.

פרשנות

מבחן שלילי: צהוב בינוני או עם רקע צהוב.

מבחן חיובי: בינוני סגול לחלוטין.

מחוון PH

במקרה זה משתמשים בסגול ברומוקרזול; זה האחראי על החשיפה כאשר יש שינוי ב- pH במדיום. לאחר ההחמצה, האינדיקטור הופך לצהוב, ועם התייבשותו הוא הופך לסגול.

זריעה ופיתוח טכניקה

כדי לזרוע את מדיום ה- MIO משתמשים בלולאה או מחט ישרים ואיתו נאסף חלק מהמושבה הנלמדת.

ניקוב עמוק נעשה באמצע ה- MIO בקו ישר. לא רצוי לבצע ניקוב כפול, מכיוון שהוא יכול לתת דימוי כוזב של תנועתיות אם הפונקציות לא מתבצעות באותו מקום.

דגירה במשך 24 עד 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס באירוביוזיס. התבוננו בתוצאות בסדר הזה: תנועתיות, דק-בוקסילציה של האורניטין וחשפו לבסוף את האינולד.

רצוי להסיר באופן אספטי 2 מ"ל מהמדיום, להעביר אותו לצינור סטרילי ולבצע בו את בדיקת האינול, כך שאם הוא שלילי, ניתן לדגור את שאר הצינור המקורי למשך 24 שעות נוספות, כדי לחשוף את האינדול שוב.

התפתחות האינדול מתבצעת באופן הבא: 3 עד 5 טיפות של מגיב Kovacs מתווספות למדיום ה- MIO ומערבבות במרץ. ניתן לראות אם מופיעה טבעת אדומה-פוקסיה.

הכנה

בינוני MIO

שוקלים 31 גרם ממדיום ה- MIO וממיסים אותו בליטר אחד של מים מזוקקים.

מחממים עד שהתערובת רותחת למשך דקה אחת, מנערים לעיתים קרובות עד שהאגר מומס לחלוטין. מחלקים 4 מ"ל מהמדיום לצינורות מבחן 13/100 עם כובעי כותנה.

יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. הסר מהחיטוי והשאיר לעמוד ישר במתלה, באופן שנוצר גוש חצי מוצק.

מאחסנים במקרר 2-8 מעלות צלזיוס. תן לזה להתחמם לפני שזורעים את זן החיידק.

צבע המדיום המיובש בצבע בז 'וצבע המדיום המוכן סגול מעט אטום.

ה- pH הסופי של המדיום המוכן הוא 6.5 ± 0.2

המדיום הופך צהוב ב pH חומצי והוא סגול ב pH בסיסי.

מגיב Kovacs (מפתח מבחן Indole)

מגיב זה מוכן כדלקמן:

נמדדים 150 מ"ל אמיל, איזואמיל או בוטיל אלכוהול (כל אחד מהשלושה). בתוכו מומסים 10 גרם של p-dimethylaminobenzaldehyde. בהמשך מוסיפים לאט 50 מ"ל של חומצה הידרוכלורית מרוכזת.

המגיב המוכן חסר צבע או צהוב בהיר. יש לשמור אותו בבקבוק ענבר ולשמור במקרר. צבע חום כהה מראה את הידרדרותו.

כמו כן, ניתן להחליף את מגיב ה- Ehrlich עם מגיב ה- Kovacs. זה האחרון, בהיותו רגיש יותר, עדיף לחשוף אינדול בחיידקים המייצרים אותו בכמויות דקות, כמו בחלק מהמוטות הגרא-שליליים הלא-מותססים ובאנאירובים מסוימים.

להשתמש

מדיום זה הוא מבחן המשלים סוללת בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae.

נתוני הדקרבוקסילציה של ornithine משמשים להבדיל בין Shigella sonnei, הבודק חיובי, בין Shigella boydii, Shigella flexneri ו- S. dysenterieae, הבודקים שליליים.

הוא גם מבדיל את הסוג קלבסיאלה, הבודק שלילי, מהסוג Enterobacter, בו רוב המינים שלו בוחנים חיוביים.

מקור: Koneman E, אלן S, ג'נדה W, שרקנברגר P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.

QA

בכל פעם שמכינים אצווה של מדיום MIO, ניתן לבצע בדיקת בקרה. לשם כך משתמשים בזנים ידועים או מוסמכים כדי להתבונן בהתנהגות המדיום.

הזנים בהם ניתן להשתמש הם Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ו- Proteus mirabilis.

התוצאות הצפויות הן E. coli ו- M. morganii. דן M: +, אני: + ו- O: +.

Klebsiella pneumoniae כולו שלילי (M: -, אני: -, O :-). Proteus mirabilis ו- Enterobacter aerogenes נותנים M: + I: - ו- O: +.

הפניות

1. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
4. מעבדות בריטניה. מדיום MIO 2015. זמין ב: britanialab.com
5. מעבדות BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) בינוני. 2007. זמין ב: bd.com
6. מעבדות וולטק. תנועה MIO בינונית, אינדול, אורניתין. 2010. זמין בכתובת: andinamedica.com