מי פפטון: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מי peptone הוא מדיום העשרה נוזלי, לא סלקטיבי, בעיקר משמש דגימות מזון diluent או חומרים אחרים. מדיום זה מבחינה כימית הוא פשוט מאוד, הוא מכיל פפטה בשר, נתרן כלורי ומים.

יש לו ערך תזונתי מסוים, המאפשר להעשיר את הדגימה. אם יש חיידקים שעברו התעללות, למדיום זה יש את הכוח לתקן את הכדאיות. זה שימושי במיוחד בהתאוששות של חיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae.

מי פפטון בבקבוקים. מקור: MSc. מריאלסה גיל

במקרה של התאוששות סלמונלה, מומלץ להשתמש בגרסת מי הפפטון המורדפים; זה משמש אמצעי העשרה לפני הדגימה, במקרה זה הוא מכיל אלמנטים נוספים כמו נתרן פוספט ודיפוטסיום פוספט.

בדרך כלל מיוצרים מים בפפטון בחומציות ניטראלית, עם זאת ישנם גרסאות אחרות בהן יש צורך בכך שה- pH יהיה 8.5 ± 0.2 (אלקליין), מכיוון שהחיידק שיש לבודד הוא אלקפילי, כגון Vibrio cholerae.

יתר על כן, מדיום זה יכול לשמש כמדיום בסיס לבדיקות תסיסה של פחמימות.

בָּסִיס

פפטונים מספקים את החומרים המזינים הנדרשים לצמיחת חיידקים, במיוחד חנקן וחומצות אמינו קצרות שרשרת, בעוד נתרן כלורי שומר על איזון אוסמוטי.

יתר על כן, המדיום מאפשר פיזור, הומוגניזציה ותיקון של תאי חיידקים שנפגעו כתוצאה מתהליכים תעשייתיים.

כדילול זה אידיאלי, תוך החלפה יעילה של פיתרון פיזיולוגי (SSF) או תמיסת חיץ פוספט (PBS).

צמיחה של חיידקים ניכרת על ידי התבוננות בעכירותו.

הכנה

הכנה ביתית (לא מסחרית)

שקלו 1 גרם פפטון ו 8.5 גרם נתרן כלוריד, מומסים בליטר מים מזוקקים. יש להתאים את ה- pH ל 7.0. לשם כך ניתן להשתמש ב- 1N נתרן כלורי.

הכנה באמצעות מדיום מסחרי

שוקלים 15 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר מים מזוקקים. הומוגניזציה של התערובת. במידת הצורך מבשלים את התערובת למשך דקה כדי לעזור לפירוק מוחלט. מגישים בבקבוקי 100 מ"ל או צינורות 10 מ"ל לפי הצורך. החיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

מצננים ומשתמשים או מאחסנים במקרר. ה- pH הסופי של המדיום הוא 7.2 ± 0.2.

צבע המדיום המיובש הוא בז 'בהיר והמדיום המוכן הוא ענבר בהיר.

הכנה לבדיקות תסיסה

לתכשיר הקודם - לפני עיקור - יש להוסיף את הפחמימה לריכוז סופי של 1%, בתוספת אינדיקטור האנדרד (פוקסין חומצה) או פנול אדום (0.018 גרם / ל '). על הצינורות להיות מצוידים בפעמון של דורהאם בכדי לצפות בהיווצרות הגז.

וריאנטים אחרים של מי פפטון

מי פפטון חוצצים או חצופים

הוא מכיל הידרוליזאט אנזימטי של קזאין, נתרן כלוריד, דיהידרוג אשלגן פוספט ודודקהאהידראט נתרן מימן. ה- pH הסופי הוא 7.0 ± 0.2.

להכנתו, שקלו 20 גרם מהמדיום המיובש והמיסו בליטר מים מזוקקים. תנו לו לנוח כ -5 דקות. מחממים דקה עד להמסה מלאה.

יוצקים לצנצנות מתאימות לפי הצורך. יש לעקר בעזרת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

- מי פפטין אלקליין

שוקלים 25 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר מים. המשך כמתואר לעיל. ה- pH נע בין 8.3 ל- 8.7.

להשתמש

החיסון נעשה על ידי הצבת המדגם ישירות.

הוא משמש לדילול דגימות, במיוחד כאשר יש חשד כי עלולים להיגרם חיידקים פגועים. בדרך כלל הדילולים הם 1:10 ו- 1: 100.

דגירה במשך 24 שעות באירוביוזה בטמפרטורה של 35-37 מעלות.

דגימות צואה

עבור דגימות צואה לסלמונלה, מומלץ להשתמש במים חצופים או חצופים כמדיום העשרה לפני כן.

לשם כך המשך באופן הבא:

אם נוצר הצואה, קח 1 גרם מדגם. אם הם נוזלים, קח 1 מ"ל צואה והשהה בצינור עם 10 מ"ל מים פפטון מזופני. במקרה של ספוגיות פי הטבעת, פרוק את החומר הכלול בספוגית לתוך הצינור עם מי פפטון חוצצים.

בכל המקרים, יש לערבב ולהדביק היטב את המדגם.

דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 עד 24 שעות. לאחר מכן תת-תרבות במרק העשרה כמו מרק ציסטין סלניט או מרק tetrathionate בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18-24 שעות נוספות. לבסוף, טיפחו בתקשורת סלקטיבית עבור סלמונלה, כמו אגר SS, אגר XLD, אגר Hektoen, בין היתר.

דגימות מזון

מי פפטון משמשים כמדיום העשרה או כדילול פשוט, אך אם מבקשים מינים של סלמונלה, הם משמשים כאמצעי העשרה לפני, כפי שכבר תואר.

באוכל המשך כדלקמן:

שוקלים 25 גרם מהמדגם ולמזון נוזלי מודדים 25 מ"ל ממנו. הניחו את החלק האמור בבקבוקים המכילים 225 מ”ל מים של פפטון. מערבבים והדגימו את המדגם.

אם יש חשד שהעומס החיידקי גבוה, ניתן לבצע דילולים סדרתיים או עשרוניים כדי להקל על ספירת יחידות היוצרות מושבה (CFU).

מספר הדילולים יהיה תלוי בסוג הדגימה ובחוויה של המטפל.

אם לעומת זאת, על פי החשד, עומס החיידקים נמוך מאוד, אין צורך בדילולים. לאחר מכן תת-תרבות במדיה סלקטיבית.

במקרה של מזון מהים, כמו רכיכה, דגים, בין השאר, בחיפוש אחר Vibrio cholerae או מינים אחרים של ויבריו, יש להשתמש במי פפטה המותאמים ל- pH 8.5 (מי פפטה אלקלים).

QA

מכל אצווה שהוכנה יש לדגור צינורות אחד עד שניים ללא חיסון למשך 24 שעות באירוביוזה ב 37 מעלות צלזיוס. בסופו של זמן, אין לראות עכירות או שינוי צבע.

ניתן להשתמש בזני בקרה ידועים כדי להעריך את יעילותם:

לשם כך ניתן להשתמש בזני החיידקים הבאים: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

בכל המקרים צפויה התפתחות מיקרוביאלית משביעת רצון, הנצפית על ידי עכירות המדיום.

מגבלות

המדיום המיובש הוא היגרוסקופי מאוד, ולכן יש להרחיק אותו מלחות.

אין להשתמש במדיום אם נצפה הידרדרות כלשהי.

יש לאחסן את מדיום התרבות המיובש בין 10 - 35 מעלות צלזיוס

יש לשמור בקירור את המדיום המוכן (2-8 מעלות צלזיוס).

הפניות

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ו- Velázquez O. טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. 2009, מהדורה שנייה. הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו. גרסה למדריכים ומדריכי מסמכים (AMyD) של הפקולטה לכימיה, UNAM 1. ניתן להשיג בכתובת: http://depa.fquim.unam.mx
2. מעבדות בריטניה. מי פפטון מרופדים. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
3. מעבדות Neogen. מי פפטון. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
4. מעבדות בריטניה. מי פפטון. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
5. מעבדות מרק. מי פפטון חוצצים. ניתן להשיג ב: merckmillipore.com
6. מעבדות קונדה פרונדיסה. מי פפטון אלקליין. ניתן להשיג ב: condalab.com
7. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.