אגר ירוק בהיר: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

אגר ירוק המבריק הוא מדיום תרבות מוצק עם רמה גבוהה של סלקטיביות. הוא משמש אך ורק לבידוד זנים של הסוג סלמונלה, עם זאת ישנם כמה יוצאים מן הכלל, כמו מיני הטיפי והפרטיפי שאינם צומחים על מדיום זה.

החיפוש אחר הסוג סלמונלה מתרחש בתדירות צואה, מים או מזון. במובן זה, המדיום הזה יכול להיות שימושי מאוד. אגר זה נוצר בשנת 1925 על ידי קריסטנסן, לסטר ויורגנס, בהמשך הוא שונה על ידי קאופמן.

אגר ירוק בהיר. מושבות תסיסה ולא מתססות בהתאמה. מקור: תערוכת MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/foto/2815842 Creative Commons License.

זה מורכב מפלוריפפטונים מעיכול פפטי של רקמות בעלי חיים ומעיכול לבלב של קזאין, הוא מכיל גם תמצית שמרים, נתרן כלורי, לקטוז, סוכרוז, אדום פנול, ירוק בהיר ואגר-אגר.

היא מאופיינת בכך שהיא סביבה בלתי מרשימה למדי עבור מרבית החיידקים, ומעדיפה את צמיחתה של סלמונלה, אולם חלק מהקוליפורמים מסוגלים להתקיים בה ולהתפתח בצורה חלשה.

חשוב לציין כי סוג השיגלה אינו גדל על מדיום זה, וגם סלמונלה טיפימוריום או סלמונלה פארטיפי. לכן, אם ברצונך לבודד את המיקרואורגניזמים הללו, יש להשתמש בתקשורת אחרת, כגון אגר XLD, בין היתר.

בָּסִיס

אגר ירוק בהיר

כל אחד מהמרכיבים המרכיבים את המדיום ממלא פונקציה ספציפית שקובעת את מאפייני האגר.

פלוריפפטונים ותמצית שמרים הם המקור לחומרים מזינים שמהם מיקרו-אורגניזמים לוקחים את החנקן והמינרלים הנחוצים להתפתחותם. לקטוז וסוכרוז הם מקורות אנרגיה למיקרואורגניזמים המסוגלים להתסיס אותם.

ירוק בהיר הוא החומר המעכב המונע צמיחת חיידקים גראם חיוביים ומספר גדול של מיקרואורגניזמים שליליים.

נתרן כלוריד מספק יציבות אוסמוטית למדיום. בעוד שפנול אדום הוא מדד החומציות, הוא הופך לצבע כשאתה מזהה ייצור חומצות מתסיסה של פחמימות.

מושבות לא-תוססות של לקטוז וסוכרוז גדלות על מדיום זה בצבע לבן ורדרד או שקוף, על רקע אדום. למשל, חיידקים מהסוג סלמונלה.

בעוד שלקטריות או סוכרוז המתססות חיידקים המסוגלים לצמוח על מדיום זה מפתחים מושבות צהובות-ירוקות או צהובות-ירוקות על רקע ירוק-צהוב. לדוגמה, Escherichia coli ו- Klebsiella pneumoniae.

גרסאות אגר ירוק בהיר (BGA)

ישנן גרסאות אחרות של אגר ירוק בהיר; נובוביוסין מבריק גלוקוז ירוק (NBG) אגר ונובוביוסין מבריק גליצרול ירוק לקטוז (NBGL) אגר.

נובוביוסין אגר גלוקוז ירוק בהיר

מכיל טריפטיקאז סויה אגר, פרי אמוניום ציטרט, נתרן תיוסולפט פנטהידרט, פנול אדום, גלוקוז, ירוק בהיר, נובוביוזין ומים מזוקקים.

הוא משמש לבידוד מושבות סלמונלה מדגימות צואה.

במקרה זה, ירוק בהיר ונובוביוזין הם החומרים המעכבים המונעים את צמיחתם של חיידקים גראם חיוביים וכמה מיקרו-אורגניזמים שליליים.

נתרן תיוסולפט הוא המקור לסולפיד וציטראט פרי הוא מקור הברזל, שניהם הכרחיים לחשיפת ייצור מימן גופרתי באמצעות היווצרות משקע שחור שחור גופרתי.

הגלוקוז הוא הפחמימה המותססת ופנול אדום הוא אינדיקטור ה- pH.

על מדיום זה, מושבות סלמונלה מתפתחות גדולות עם מרכז שחור מוקף הילה אדמדמה ואחריה אזור ברור וברור. כמה זנים של Citrobacter freundii מייצרים מושבות זהות לזו של סלמונלה.

Novobiocin ירוק מבריק גליצרול לקטוז אגר (NBGL)

מדיום זה מכיל אגר סויה של טריפטיקאז, אמוניום פריום, נתרן תיוסולפט, לקטוז, גליצרול, ירוק בהיר, נובוביוזין ומים מזוקקים.

ההבדל בין מדיום זה לקודם הוא שגלוקוז מוחלף על ידי לקטוז, ולא משתמשים בגליצרול ופנול אדום.

המדיום משמש גם לבידוד מיני סלמונלה, המושבות מפתחות שחורות, עקב ייצור מימן גופרתי.

רק מושבות שאינן מייצרות חומצה מגליצרול או לקטוז משיגות ייצור מספיק של H ₂ S, מכיוון שרמת החומציות הנמוכה מפריעה להיווצרות H ₂ S. הדבר גורם למושבות חסרות צבע עבור מרבית המינים של פרוטאוס וסיטרובקטר.

הכנה

-משקל 58 גרם מהמדיום המיובש המסחרית. הוסף אותו לליטר מים נטועים מחדש. מערבבים, נותנים לעמוד כמה דקות, ומניחים את התערובת על מקור חום עד להמסה מלאה.

-החיטוי במעל 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, אל תחרוג מזמן העיקור.

תנו לו לנוח ולהגיש כשהוא חם בתבשילי פטרי סטריליים. ה- pH הסופי צריך להיות 6.9 ± 0.2.

- יש להתמצק ולאחסן במקרר עד לשימוש. לפני זריעת הלוחות צריכים לקחת טמפרטורת החדר.

-מתווך האבקה בצבע ירוק והמוכן לוקח צבע חום-כתום או ירוק-אדמדם, תלוי בחומציות ה- pH ובחברה המסחרית. צבע חום מאוד מעיד על כך שהאגר היה מחומם יתר על המידה.

ברגע שהאגר התמצק, לא מומלץ לטשטש מחדש שכן המדיום מתדרדר.

שימושים / יישומים

מדיום זה משמש לחיפוש אחר זנים של הסוג סלמונלה מדגימות צואה ומזון חלב, בין היתר.

מכיוון שמדובר בסביבה די לא מרושעת, רצוי לזרוע חיסון שופע אם משתמשים במדגם הישיר. אחרת, יש לעשות העשרה מוקדמת והעשרה של הדגימות לפני הזריעה במדיום זה.

מכיוון שזני סלמונלה מסוימים מעוכבים או צומחים בקושי, רצוי ללוות את המדיום הזה עם אגר סלקטיבי אחר לסלמונלה.

יש להגיש כל מושבה עם מאפיין סלמונלה טיפוסי לבדיקות ביוכימיות לצורך זיהוי מוחלט.

QA

כדי לבדוק את הביצועים הטובים של מדיום האגר הירוק הבהיר, ניתן להשתמש בזני ATCC בכדי לצפות בהתפתחותם עליו.

הזנים השכיחים ביותר המשמשים לבקרת איכות הם: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus 65.

3 הראשונים צריכים לתת מושבות לבנות ורודות או שקופות על רקע אדום. סלמונלה עם התפתחות טובה ופרוטאוס עם צמיחה מועטה או קבועה.

עבור קלבסיאלה ואשלצ'ריה צפויות מושבות צהובות-ירוקות עם רקע צהוב ובמקרה של שיגלה וסטפילוקוקוס יש לעכב אותן.

יש לאחסן את המדיום המיובש בטמפרטורת החדר, במקום יבש, מכיוון שהמדיום הוא היגרוסקופי מאוד.

הפניות

1. המעבדה דיסקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו SA אגר ירוק מבריק. 2009
2. מעבדת בריטניה. אגר ירוק בהיר. 2015.
3. מעבדת BD. BD מבריק ירוק אגר. 2013.
4. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהדורה חמישית). ארגנטינה, עריכה Panamericana SA
5. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. ביילי וסקוט אבחון מיקרוביולוגי. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה