אגר צי: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

אגר TSI או אגר ברזל סוכר משולשת הוא מדיום מוצק המשמש בדיקה ביוכימית להנחות את הזיהוי הראשוני של החיידקים גרם שליליים. זה מבוסס על הצגת התסיסה של הסוכרים הקיימים, וייצור מימן גופרתי וגז.

ההרכב והבסיס שלו דומים מאוד לבדיקת ברזל קליגלר, עם ההבדל כי האחרון מכיל רק גלוקוז ולקטוז. במקום זאת, כשמו כן הוא, אגר ברזל משולש סוכר מכיל שלושה פחמימות מותססות: גלוקוז, לקטוז וסוכרוז.

תמונות של בדיקת ה- TSI עם מיקרואורגניזמים שונים A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. מקור: Witmadrid, מ- Wikimedia Commons

בנוסף, למדיום ה- TSI ארבע נגזרות חלבון שהופכות אותו לאגר מזין מאוד: תמצית שמרים, תמצית בשר, פפטון ופפטון פרוטאוז. הוא מכיל גם אמוניום גופרתי ברזלי, נתרן תיוסולפט, נתרן כלוריד, פנול אדום ואגר.

חוסר היכולת של מיקרואורגניזם לתסוס את הגלוקוז הקיים במדיום מוציא אותו מייד משייכות למשפחת Enterobacteriaceae. מכאן שמבחן זה חיוני בהחלטה לאיזה מסלול זיהוי יש לנקוט כדי לקבוע את המין והמינים.

כל מעבדה מחליטה אם לעבוד עם אגר TSI או עם אגר ברזל של קליגלר.

בָּסִיס

כל אחד מהתרכובות ממלא פונקציה בתוך המדיום.

נתרן כלוריד ואגר

נתרן כלורי הכרחי לשמירה על האיזון האוסמוטי של המדיום. ואילו האגר נותן את העקביות המוצקה.

מחוון PH (אדום פנוול)

PH של המדיום המוכן מאוזן על 7.3 ומצב החומציות (אדום פנוול) הופך לצהוב מתחת ל 6.8. המשמעות היא שכמויות קטנות של חומצות המיוצרות על ידי תסיסה של סוכרים יהפכו את המדיום לאדום-כתום לצהוב.

אם לא מתרחש תסיסה, תתבצע אלקליניזציה של המדיום באמצעות פפונים, והופכת מאדום-כתום לאדום חזק.

נגזרות חלבון (תמצית שמרים, תמצית בשר, פפטון ופפטון חלבון)

כאשר החיידק מטבוליזם את החלבונים המצויים באגר TSI, נוצרים אמינים המיישבים את הבסיס (בעיקר ברמת פוע), מכיוון שהתגובה דורשת חמצן. האמינים הופכים את הלוח לאדום בהיר.

אבל זה יהיה תלוי ביכולתם של החיידקים לתסס פחמימות או לא.

תסיסה של פחמימות (גלוקוז, לקטוז וסוכרוז)

מחקר התסיסה של סוכרים יכול לתת כמה תמונות וכל אחת מתפרשת אחרת. פרשנות הבדיקה מחלקת את המיקרואורגניזמים לשלוש קטגוריות: תוספי גלוקוז שאינם תוססים, תוססי לקטוז ללא תסיסה, ותוססי לקטוז / סוכרוז.

יש לציין כי כמות הגלוקוזה במדיום מוגבלת ואילו ריכוז הלקטוז והסוכרוז גבוה פי 10.

חיידקים ממשפחת Enterobacteriaceae ומיקרואורגניזמים המתססים גלוקוז אחרים יתחילו לתסוס סוכר זה מכיוון שהוא הפחמימה הפשוטה ביותר לאנרגיה.

לעומת זאת, לקטוז וסוכרוז הם פחמימות מורכבות שיש לפרק ולהמיר לגלוקוז בכדי שיוכלו להיכנס למחזור אמבדן-מאירוף.

מיקרו-אורגניזמים שאינם מתססים את הגלוקוז

כאשר המיקרואורגניזם המחוסן אינו מסוגל לתסוס גלוקוז, הרבה פחות הוא יוכל לתסס פחמימות אחרות. לפיכך, לא נוצרות כאן חומצות, אך קיימת היווצרות של אמינים במישור על ידי שימוש בפפטונים.

במקרה זה הלוחית פונה לאדום חזק יותר ותחתית הצינור עשויה להישאר ללא שינוי או שהיא עשויה להיות בסיסית, כך שתשאיר את כל הצינור אדום.

פירוש: K / K פירושו פוע אלקליין / אלקליין או תחתון ניטרלי

בתמונה בתחילת המאמר ראו את דמותה של צינור D.

תוצאה זו מצביעה על כך שהמיקרואורגניזם אינו שייך למשפחת Enterobacteriaceae.

מיקרו-אורגניזמים שאינם תוססים לקטוז / סוכרוז

אם החיידקים מסוגלים לתסוס גלוקוז אך לא לקטוז או סוכרוז, הדבר יקרה:

החיידקים יצרכו את כל הגלוקוזה שנמצאת לאחר 6 עד 8 שעות, ויכולים להחמיר גם את הפוע וגם את הבלוק; כלומר, האגר יהיה צהוב לחלוטין. אך כאשר גלוקוז מתרוקן ולא ניתן להשתמש בלקטוז וסוכרוז, החיידקים יתחילו את חילוף החומרים של חלבונים.

תגובה זו זקוקה לחמצן, ולכן השפלה של פפונים מתרחשת על פני השטח (שפוע). האמינים שנוצרו מייצרים בסיסים על הלוח והופכים מצהוב לאדום. עדות לתגובה זו לאחר 18 עד 24 שעות של דגירה.

פירוש: K / A פירושו פוע אלקליין וחומצה חומצה.

בתמונה בתחילת המאמר ראו את דמותה של צינור B.

-מיקרו-אורגניזמים המתססים לקטוז / סוכרוז

מיקרואורגניזמים המסוגלים לתסוס לקטוז וסוכרוז יכולים כמובן לתסוס את הגלוקוז. לאחר מיצוי הכמות המינימלית של הגלוקוזה שנמצאת במדיום, הפירובט שנוצר מתחיל להתלבש כדי ליצור חומצות דרך מחזור הקרבס האירובי, ובתקופה של 8 עד 12 שעות כל המדיום יהיה צהוב.

אם החיידק מסוגל לפרק את הלקטוז או הסוכרוז, ימשיכו לייצר חומצות, ואחרי 18 עד 24 שעות הצינור כולו - שפוע ותקע - ימשיך להצהיב.

יש לציין כי השימוש בגלוקוז מתבצע בשתי דרכים: האחת אירובית שפונה של הצינור, והשנייה באנאירובית בתחתית הצינור.

פרשנות: A / A פירושו פונה חומצה / תחתית חומצה. יתכן שיש בו גז.

בתמונה בתחילת המאמר ראו את דמותה של צינור א.

ייצור גז

ישנם מיקרואורגניזמים המסוגלים לייצר גז במהלך תסיסה של סוכרים. הוכחת הגז בצינור על ידי הלחץ שהוא מפעיל בתוך האגר. לחץ גורם להיווצרות בועה או לעקירת האגר. לפעמים היווצרות גז יכולה לשבור את המדיום.

חשוב שבזריעה של מדיום ה- TSI, הניקוב נעשה בצורה נקייה דרך מרכז האגר עד שהוא מגיע לתחתית. אם הניקוב יוסט לכיוון דפנות הצינור, זה יכול לגרום לחיוביות כוזבות בייצור הגז, מכיוון שהוא יברח דרך התעלה שנוצרה באופן שגוי.

ייצור הגז, כמו גם התגובות שמתרחשות במפלס האגר, זקוקים לחמצן, ולכן מומלץ לכסות את הצינור בתקע כותנה, ואם משתמשים בכובע בקליט, הוא לא אמור להיות הדוק לחלוטין.

ייצור הדלק מדווח כחיובי (+) או שלילי (-).

דפוסי היווצרות גז. מקור: תכנית שנעשתה על ידי MSc. מריאלסה גיל. מקור תמונה: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, באמצעות Wikimedia Commons

נתרן תיוסולפט וסולפט אמוניום ברזלי

חיידקים המסוגלים לייצר מימן גופרתי (גז חסר צבע) תופסים את הגופרית מנותר תיוסולפט שנמצא במדיום. ברגע שנוצר H ₂ S, הוא מגיב עם אמוניום גופרתי ברזלי, ומייצר סולפיד ברזל (משקע שחור שחור נראה לעין).

ייצור H ₂ S מדווח כחיובי (+) או שלילי (-).

בתמונה בתחילת המאמר ראו את דמותה של הצינור C.

הכנה

שקלו 62.5 גרם מהמדיום המיובש אגר ברזל משולש סוכר (TSI) וממיסים אותו בליטר מים מזוקקים.

מחממים עד שהאגר מומס לחלוטין. מרתיחים דקה, תוך ערבוב תדיר. מחלקים 4 מ"ל מהמדיום לצינורות מבחן 13/100 עם כובעי כותנה.

יש לעקר בחיטוי בחום של 121 מעלות למשך 15 דקות. הסר מהחיטוי והניח לו לנוח בזווית. יש להקפיד כי הבסיס והן הלוחית יהיו באותו מרחק.

מאחסנים במקרר 2-8 מעלות צלזיוס. תן לזה להתחמם לפני שזורעים את זן החיידק.

צבע המדיום המיובש בצבע בז 'בהיר והמדיום המוכן אדום-כתום.

ה- pH הסופי של המדיום המוכן הוא 7.3 ± 0.2.

יישומים

מבחן ה- TSI נמצא בשימוש נרחב ברמת המעבדה למיקרוביולוגיה. בדיקה זו חיונית בכדי להנחות את סוג הבדיקה שיש ליישם על מנת לזהות את הסוג והמינים. הביצוע והפרשנות הטובים שלו יכולים להציל חומר ועבודה.

אם התוצאה היא TSI K / K ובדיקת הציטוכרום אוקסידאז חיובית, ידוע שיש להשתמש בבדיקות לזיהוי מוטות שליליים גראם שאינם תוססים, כמו Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, בין ז'אנרים אחרים. אם הוא שלילי אוקסידאז, הוא מכוון לסוגות Acinetobacter, Stenotrophomonas וכו '.

מצד שני, אם מתקבל TSI A / A או K / A ובדיקת הציטוכרום אוקסידאז שלילית, ככל שהניטראטים מצטמצמים לניטריטים, נהיה בטוחים שמדובר במיקרואורגניזם השייך למשפחת Enterobacteriaceae. במקרה זה, מסלול הזיהוי יתמקד בבדיקות ספציפיות לקבוצת חיידקים זו.

לעומת זאת, אם מתקבלת תמונה של K / A או A / A ובדיקת הציטוכרום אוקסידאז חיובית, הבדיקות הנוספות שיש להרכיב מכוונות לזיהוי זני תסיסה שאינם שייכים למשפחת Enterobacteriaceae, כגון: Aeromonas, פלסיומונאס, ויבראו ופסטורלה.

TSI עם מימן גופרתי, אוקסידאז שלילי, ידריך את הזיהוי של הז'אנרים הבאים ממשפחת Enterobacteriaceae: פרוטאוס, סיטרובקטר, אדוארדיאלה, למינורלה, פרגיה, טרבוסיאלה או סלמונלה.

TSI עם מימן גופרתי מועט או בינוני במפלס האלקלי עם רקע אלקלי ואוקסידאז חיובי ינחה את השימוש בבדיקות לזיהוי מוטות גראם שליליים המייצרים H ₂ S, כגון Shewanella putrefaciens.

לבסוף, TSI יכול לשמש לחקירת ייצור מימן גופרתי בבזילי Gram חיובי, במיוחד כאשר יש חשד ל- Erysipelothrix rhusiopathiae.

זָרוּעַ

יש לחסן את המדיום של ה- TSI במושבות טהורות, מבודדות בתרבויות ראשוניות או סלקטיביות. אם המושבה נלקחת מכלי תקשורת סלקטיביים שזרעו בדגימות עם פלורה מעורבת, יש להקפיד לקחת רק מפני השטח, מכיוון שזנים קיימים המעוכבים במדיום זה עשויים להתקיים בחלק התחתון של המושבה.

לכן, אסור לקרר את הלולאה על מדיום סלקטיבי ואז מושבת המושבה ומחוסמת עם מדיום TSI.

הזריעה תיעשה בעזרת לולאה או מחט ישרה. ייעשה ניקור, תוך הקפדה שהוא יהיה במרכז האמצע עד שיגיע לתחתית, ואז תסתיים הזריעה על ידי חיסון המשטח בצורה של זיגזג. אל תעשו שני פיסוק.

דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באווירוביוזה למשך 18-24 שעות. לפרש בשלב זה, לא לפני ולא אחרי.

מגבלות

יש לקרוא את מבחן ה- TSI תוך 18 עד 24 שעות מהדגירה. קריאה לפני זמן זה עשויה לתת חיובית שגויה לתסיסה של A / A. ואילו קריאה לאחר זמן זה יכולה להוליד דימוי שלילי כוזב של לא-תסס, עקב צריכת פפטיונים המיישבים את בסיס המדיום.

הפניות

1. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
4. "אגר TSI." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 10 יולי 2018, 08:09 UTC. 10 פברואר 2019, 03:33 ניתן להשיג ב: es.wikipedia.org
5. מעבדות בריטניה. TSI Agar (אגר ברזל משולש סוכר). 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
6. מעבדות BD. אגר ברזל משולש סוכר (TSI Agar). 2003. זמין ב: bd.com