אגר TCBS הוא אמצעי התרבות מוצקה סלקטיבי הפרש מאוד, המשמש לבידוד וטיפוח חיידקים ממין Vibrio, במיוחד Vibrio cholerae, parahaemolyticus V. ו vulnificus V. כמו פתוגנים גדולים מסוג זה.
ראשי תיבות TCBS מייצגים את Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. אגר זה ידוע גם כמדיום סלקטיבי עבור ויברואים. הנוסחה המקורית נוצרה על ידי נקנישי ושונתה לאחר מכן על ידי קובאיאשי.
מסחרי TCBS בינוני וצלחת אגר TCBS זרע עם Vibrio cholerae. מקור: תמונה 1: צולם על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל / תמונה 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
הוא מורכב מתמצית שמרים, פפטון בשר, טריפטין, נתרן ציטראט, נתרן תיוסולפט, מרה שור, סוכרוז, נתרן כלוריד, ברזל ציטרט, כחול ברומותימול, כחול תימול ואגר.
הרכב זה מאפשר התפתחות נאותה של מיני ויבריו מדגימות מים, מזון וצואה; למעט Vibrio hollisae, שאינו צומח במדיום זה. יתר על כן, מדיום TCBS מסוגל לעכב את צמיחתם של חיידקים נלווים אחרים, במיוחד קוליפורמים.
בשל הבעיות הקשות במערכת העיכול והמעיים הנוצרות על ידי מינים מסוימים של סוג הוויבריו, אבחנתה חשובה מאוד. בני אדם נגועים בעיקר באכילת אוכל גולמי או לא מבושל מהים או מים מזוהמים, אך גם באמצעות זיהום פצע.
משום כך, על מעבדות קליניות לכלול אגר TCBS במחקר תרבות הצואה של דגימות צואה נוזלית, במיוחד עם הופעת מי אורז. במיוחד אם המטופל מדווח כי היה במגע עם מי ים או שאכל רכיכה או דגים.
בָּסִיס
תמצית שמרים, פפוטות בשר וטריפטין הם המקור התזונתי למדיום זה. עם זאת, אגר TCBS הוא אמצעי בלתי אפשרי עבור מרבית החיידקים.
הסלקטיביות הגבוהה שלו ניתנת על ידי תוספת נתרן ציטראט ומרה שור; שניהם הם חומרים מעכבים המספקים גם pH בסיסי למדיום, המגבילים את צמיחת הפלורה המלווה ומעדיפים את צמיחתם של V. cholerae, בקרב מינים אחרים. יש לציין כי Vibrio cholerae רגיש מאוד לחומציות.
נתרן כלוריד מצידו מאזן בצורה אוסמוטית את המדיום. יתר על כן, מכיוון שריכוזו גבוה, הוא פועל גם כחומר מעכב, העדיף את גידולם של חיידקים הלופיליים.
סוכרוז הוא הסוכר הניתן לתסיסה שיחד עם מדדי ה- pH הכחול ברומותימול וכחול תימול מעניקים למדיום את אופיו ההבדל. מסיבה זו, בעזרת מדיום זה ניתן להבדיל בין זני תסיסה של סוכרוז לבין תוססים שאינם תוססים.
מושבות של זני תסיסה של סוכרוז מפתחים צבע צהוב ויהפכו את המדיום לירוק לצהוב עקב ייצור חומצה. הלא-תוססים צומחים שקופים והמדיום נשאר בצבע המקורי (ירוק).
באופן דומה, מדיום זה מכיל נתרן תיוסולפט כמקור גופרית וציטראט כחומר מתפתח. שניהם מראים חיידקים המסוגלים לייצר מימן גופרתי (גז חסר צבע). H 2 S נוצר מתיוסולפט ואז לאחר הגיבו עם ציטראט ברזלי נוצר משקע שחור שחור.
לבסוף, האגר הוא זה שמספק את העקביות המוצקה למדיום.
הכנה
שוקלים 89 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר אחד של מים מזוקקים. עזרה בפירוק על ידי חימום ובחישה תכופה. ניתן להרתיח את התערובת עד 2 דקות.
המדיום הזה לא נחרץ אוטומטית. לאחר המסה הוא מוגש ישירות על צלחות סטריליות. כשהם מתמצקים, הם מסדרים בצורה הפוכה על טסיות הדם ונשמרים במקרר (2-8 מעלות צלזיוס) עד לשימוש.
המדיום שאחרי ההכנה חייב להישאר על pH 8.6 ± 0.2.
צבע המדיום המיובש הוא בז 'בהיר או ירוק-בז', וצבע המדיום הוא ירוק יער או ירוק כחלחל.
חשוב לאפשר לפלטות להתחמם לפני זריעת הדגימות.
להשתמש
הדגימה הנפוצה ביותר לבידוד Vibrios היא שרפרף השלשול.
יש להעביר דגימות צואה, אם לא ניתן להזריק אותן מייד על המדיום הסלקטיבי, על מדיום קרי בלייר.
כדי להגביר את הרגישות של התרבות, ניתן להעביר את הצואה דרך מי פפטון ב pH 8.4 כאמצעי העשרה למשך 8 שעות לכל היותר, משם היא תת-תרבית למדיום TCBS.
כמו כן יש לקחת בחשבון כי זנים מסוימים של ויברוס יכולים לגרום לספיגת מחלות בקרב חולים מדוכאי חיסון, ולכן ניתן לבודד אותם מתרבויות הדם. באופן דומה ניתן לנתח דגימות של מים ומזון מהים כאשר יש התפרצויות מגיפה של מחלת כולרה.
זָרוּעַ
חיסון מדגם המחקר חייב להיות בולט, הזריעה מתבצעת בשיטת הפשטה על ידי תשישות. הפלטות מודגרות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות באווירוביוזיס.
מושבות החזקה של Vibrio cholerae הן בינוניות בגודלן, חלקות, אטומות, עם גבולות דקים וצהובים בצבע עקב תסיסה של סוכרוז.
המינים של V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii וכמה V. vulnificus גדלים בצורה דומה. מינים אחרים של ויברוס חשובים קלינית כמו V. parahaemolyticus אינם מתסיסים סוכרוז ומתפתחים כ מושבות ירוקות זית.
צלחת אגר TCBS זרעי ויבריו parahaemolyticus. מקור: isis325 פליקר
מצד שני, יש לזכור כי כמה זנים של Aeromonas ו Plesiomonas שהם אוקסידאז (+) יכולים לצמוח במדיום זה, לפתח מושבות צהובות שיכולות לבלבל את המטפל. בעוד שכמה זנים של Pseudomonas גם אוקסידאז (+) גדלים כ מושבות ירוקות כמו V. parahaemolyticus.
הַגבָּלָה
לעולם אין לבצע את בדיקת האוקסידז החיובית לסוג הוויברו ממושבות שהתקבלו מאגר TCBS, מכיוון שהתוצאה שהתקבלה תהיה שלילית כוזבת. תרכובות באמצע מפריעות מאוד לבדיקה זו. לכן יש לייצר אותו מתת-תרבויות על אגר הדם.
QA
כדי להוכיח כי המדיום במצב טוב, רצוי לזרוע זני בקרה ידועים או מוסמכים, ולבחון אם הגידול עומד בתכונות הצפויות.
לשם כך תוכלו להשתמש בזנים של:
- Vibrio cholerae - גידול משביע רצון (מושבות צהובות, גבול שקוף).
-Vibrio parahaemolyticus - גידול משביע רצון (מושבה עם מרכז ירוק וגבול שקוף).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - צמיחה משביעת רצון (מושבות צהובות עם הילות באותו צבע סביב המושבה).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - עיכוב מוחלט או חלקי (מושבות קטנות צהובות או שקופות).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- עכבה חלקית או מוחלטת (מושבות כחולות).
-Escherichia coli ATCC 25922 - מעכב לחלוטין.
- Proteus mirabilis ATCC 43071 - עכבה מוחלטת או חלקית. (מושבות קטנות ירוקות במרכז הגבול השקוף).
דגירה של מדיום לא מחוסן צריכה להיות ללא שינוי.
הפניות
- מעבדות דיפקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו. אגר TCBS. 2009. זמין בכתובת: f-soria.es
- מעבדת BD. BD. TCBS Agar 2003. זמין ב: bd.com
- מעבדות בריטניה. TCBS בינוני. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדות אקומדיה. TCBS אגר. 2016. ניתן להשיג ב: foodsafety.neogen.com
- פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.