ביסמוט סולפיט אגר הוא סלקטיבית בינונית מוצקה ותרבות הפרש, שפותחה במיוחד עבור בידוד של typhi סרוטיפ enterica תתי מיני enterica סלמונלה, בקרב מינים אחרים של סלמונלה. המדיום ידוע בכינוי אגר BSA בגלל ראשי תיבות שלו באנגלית Bismuth Sulfite Agar.
הנוסחה המקורית לאגר ביסמוט סולפיט נוצרה בשנת 1927 על ידי וילסון ובלייר (גלוקוז ביסמוט סולפית ברזל בינוני); הוא הכיל נתרן סולפיט, גלוקוזה, תמיסת ביסמוט, אמוניום ציטרט, סולפט ברזלי ואגר-אגר.
גידול של 48 שעות של דגירה של סלמונלה על אגר ביסמוט סולפיט. מקור: Pixnio.com מחבר: ד"ר WR Erving, USCDCP
כיום יש שינוי במדיום המקורי, המורכב מתמצית בשר, פפונים לבשר וקזאין, אינדיקטור ביסמת סולפיט, גלוקוז, נתרן פוספט, סולפט ברזלי, ירוק בהיר ואגר-אגר.
ישנם אמצעים רבים לבידודם של מיני סלמונלה, אך כשמדובר בהתאוששות הסרוטיפ Typhi, לאגר ביסמוט סולפיט יש יתרון בולט עליהם, מכיוון שלרוב מתקבלת התאוששות נמוכה מאוד או לא של מיקרואורגניזם זה. .
עם זאת, יש צורך להשתמש ביותר מסוג בינוני אחד כאשר מנסים לבודד אנטרופתוגנים, מכיוון שאגר ביסמוט סולפיט פחות יעיל למינים אחרים של סלמונלה ולסוג שיגלה, המעוכבים או מתפתחים בצורה גרועה מאוד. באגר הזה.
יש לציין כי מכל מיני הסלמונלה, הסרוטיף Typhi הוא אחד האנטופתוגנים החשובים ביותר בבני אדם, והיה המאגר היחיד שלו. סרובר זה גורם לחום בטיפוס, גסטרואנטריטיס, בקטרימיה וספיחת דם.
מסיבה זו, רלוונטי לכלול אגר זה בעת ניתוח מים, צואה או דגימות מזון בהם יש חשד לנוכחותם.
בָּסִיס
כמו רוב אמצעי המדיה התרבותיים, Bismuth Sulfite Agar מכיל חומרים מזינים לקידום צמיחת חיידקים, כמו פפטונים ותמצית בשר. באופן דומה, גלוקוז מתפקד כמקור לאנרגיה ופחמן.
עם זאת, לא כל החיידקים יגדלו על מדיום זה, שכן ביסמוט סולפיט אגר הוא מדיום סלקטיבי. הוא מכיל תרכובות המעכבות את צמיחתן של מיקרואורגניזמים חיוביים גראם וחיידקים מסוימים שליליים. תרכובות אלה הן: אינדיקטור הביסמוט סולפיט וירוק בהיר.
מצידו, נתרן פוספט שומר על אוסמולריות וחומציות של המדיום.
בנוסף, אגר ביסמולט סולפיט הוא מדיום דיפרנציאלי בזכות נוכחותו של סולפט ברזלי, המראה היווצרות H 2 S. H 2 S הנוצרת על ידי חיידקים מגיב עם סולפט ברזלי ויוצר משקע שחור שחור בלתי מסיס בבירור.
לבסוף, האגר-אגר מספק את העקביות המוצקה למדיום.
הכנה
שקלו 52.3 גרם מהמדיום המיובש והמוססו בליטר אחד של מים. מחממים את התערובת לרתיחה למשך דקה תוך ערבוב תכוף, עד להמסה מוחלטת. אל תחממו יותר מדי. מדיום זה אינו ניתן להחלפה אוטומטית, מכיוון שחום קיצוני פוגע במדיום התרבותי.
אפשר להתקרר ל 45 מעלות צלזיוס ולנער לפני הגשה בכלי פטרי סטריליים. מומלץ להכין צלחות בעובי טוב. לשם כך יש לצקת לכל צלחת 25 מ"ל. בואו להתמצק. מכיוון שמדובר במדיום שאינו מעוקר, זה תקין להציע לשימוש מיידי שלו.
עם זאת, מחקר שנערך על ידי ד'אואוסט בשנת 1977 הראה כי יש התאוששות טובה יותר של סלמונלה טיפימוריום וסלמונלה enteritidis כגיל הבינוניים של אגר ביסמוט אגר, דבר שלא השפיע על הביצועים של סרובי טייפי ופרטיפי ב.
ד'אואוסט ממליץ להשתמש בצלחות ביום 4 של הקירור, למרות שהוא מציין שככל שהגילאים הבינוניים, הסלקטיביות פוחתת, וזני Proteus vulgaris מתפתחים ביתר קלות.
מסיבה זו, עבור דגימות מזוהמות מאוד, כמו צואה, עדיף להשתמש במדיום שהוכן טרי. אחרת השתמש ביום 4 להכנתו. מחברים אחרים ממליצים להשתמש בצלחות יום לאחר הכנתם, המאוחסנים במקרר.
יש להזין צלחות מקוררות לפני השימוש. PH של המדיום צריך להיות 7.5 ± 0.2. המדיום הגולמי בצבע בז 'והמדיום המוכן אפלי-ירוק אפור.
יישומים
בין הדגימות שניתן לשתול במדיום זה ניתן למצוא דגימות של צואה, שתייה או שפכים ומזון.
כדי לשפר את הבידודים, מומלץ לבצע טיפול העשרה לפני כן עם מרק לקטוז ולאחר העשרה במרק tetrathionate או מרק ציסטין סלניט, לפני שתזרעו על אגר ביסמוט סולפיט.
הפלטות מודגרות בחום של 35 מעלות צלזיוס 0.2 למשך 24 עד 48 שעות, באמצעות אירוביוזיס.
מאפייני המושבות על אגר ביסמוט סולפט
מושבות סלמונלה טייפי נראות בדרך כלל על אגר זה תוך 24 שעות עם מרכז שחור ומוקפות בהילה ירוקה בהירה. ואילו תוך 48 שעות הם משחירים לחלוטין בגלל היווצרות מימן גופרתי.
- המדיום הזה מעכב את מרבית המינים של הסוג שיגלה.
- S. Typhi ו- S. Arizone יכולים להעניק מושבות דומות מאוד.
-הקוליפורמים המייצרים H 2 S כמו פרוטאוס וסיטרובקטר מייצרים מושבות הדומות לאלה של סלמונלה, ולכן יש צורך לבצע בדיקות זיהוי ביוכימיות.
יש לבצע הפשטה טובה כדי להשיג מושבות מבודדות; זו הדרך היחידה להתבונן במאפיינים האופייניים למושבות של הסוג סלמונלה.
QA
לבקרת הסטריליות, צלחת ללא חיסון מודגרת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, צפוי שלא יהיה שום צמיחה או שינוי צבע.
לבקרת איכות, זנים ידועים כגון:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli ו- Shigella flexneri צפויים להיות מעוכבים באופן חלקי על ידי פיתוח מושבות חום-ירקרק וחום בהתאמה. ואילו לשני הסלמונלות יש התפתחות מצוינת עם מושבות שחורות עם ברק מתכתי, ולבסוף יש לעכב לחלוטין את Enterococcus faecalis.
הפניות
- וילסון, וו., ו- EM מק. בלייר. שימוש במדיום ברזל גלוקוז ביסמוט סולפיט לבידוד B. typhosus ו- B. proteus. כתב העת להיגיינה, 1927; 26 (4), 374-391. נשלח מ- .jstor.org
- ד'אואוסט ג'יי. השפעת תנאי האחסון לביצועים של אגר ביסמוט סולפיט. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. ניתן להשיג ב: ncbi.nlm.nih.gov
- מעבדות IVD. אגר ביסמוט-סולפיט על פי WILSON-BLAIR. 2009. זמין ב: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- מעבדות הידידיה. ביסמוט סולפיט אגר. 2017. זמין ב: himedialabs.com
- פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G ו- Ybarra M. איכות בקטריולוגית של חלב עזים גולמי המיוצר במירוואלס, פואבלה. הכהן Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54