אגר דם: רציונל, שימושים והכנה - ביולוגיה - 2025

אגר הדם הוא מדיום תרבות מוצק מועשר הפרש אך לא סלקטיבי. הוא משמש להתאוששות וגידול של מגוון גדול של מיקרואורגניזמים מדגימות קליניות או לתת-תרבויות.

יש לכלול אגר דם קלאסי לזריעת רוב הדגימות הקליניות שהתקבלו במעבדה; למעט דגימות צואה בהן זה לא מועיל, אלא אם כן הוכן עם שינויים מסוימים.

צלחת אגר דם

מדיום תרבות זה מורכב למעשה מאגר בסיס מועשר ו -5% דם. בסיס האגר יכול להשתנות בהתאם לצרכים, אך הוא מורכב בעיקר מפפונים, חומצות אמינו, ויטמינים, תמצית בשר, נתרן כלורי, אגר, בין היתר.

באשר לדם, בדרך כלל זה נדרש להיות במגע עם ויברוריום כדי להשיג דם מבעלי חיים, כמו כבשים, ארנבונים או סוסים. עם זאת, זה לא תמיד אפשרי ולעיתים משתמשים בדם אנושי.

ניתן להכין מדיום אגר דם במעבדה או ניתן לרכוש מוכנים מחברות ייעודיות. הכנת המדיום הזה היא אחת העדינות ביותר, כל חוסר זהירות בהכנתו יביא לאצווה מזוהמת.

לכן יש לנקוט בכל אמצעי הזהירות האפשריים ובסופו של דבר יש לבצע בקרת איכות על ידי דגירה בצלחת 37 מעלות צלזיוס לכל 100 המוכנים.

בָּסִיס

Staphylococcus aureus בתרבית על אגר הדם. נתן קריאה בפליקר נתן ר בטוויטר, באמצעות ויקימדיה Commons כבר הוזכר שלגר אגר הדם הוא המאפיין להיות מדיום מועשר, דיפרנציאלי ולא סלקטיבי. הבסיס לכל אחת מהמאפיינים הללו מוסבר להלן.

אגר הדם הוא מדיום מועשר מכיוון שהוא מכיל 5-10% דם על בסיס אגר כתוסף העיקרי שלו. שתי התרכובות מכילות חומרים תזונתיים רבים ותכונה זו מאפשרת לרוב החיידקים הניתנים לעיבוד לצמוח בה.

צמיחה זו מתרחשת ללא הגבלה; מסיבה זו היא לא סלקטיבית. עם זאת, אם מתווספים תרכובות למדיום זה המונעים צמיחה של מיקרואורגניזמים מסוימים ומעדיפים את אלה של אחרים, הוא הופך להיות סלקטיבי. זה המקרה אם מוסיפים סוגים מסוימים של אנטיביוטיקה או אנטי-פטריות.

כמו כן, אגר הדם הוא מדיום דיפרנציאלי, מכיוון שהוא מאפשר הבחנה בין 3 סוגים של חיידקים: בטא-המוליטית, אלפא-המוליטית וגמא-המוליטית.

בטא-המוליטים הם כאלו שיש להם יכולת להמיס או לשבור לחלוטין תאי דם אדומים, ויוצרים הילה ברורה סביב המושבות, ולכן הם מייצרים ß או ß - המוליזה והמיקרואורגניזמים נקראים ß-hemolytic.

דוגמאות לחיידקים ß-hemolytic הם Streptococcus pyogenes ו- Streptococcus agalactiae.

חומרים אלפא-המוליטיים הם אלו שמבצעים המוליזה חלקית, שם מחמצן המוגלובין למתמוגלובין, ויוצרים צבע ירקרק סביב המושבות. תופעה זו ידועה בשם α או α- המוליזה וחיידקים מסווגים כ- α-hemolytic.

דוגמאות לחיידקים α-hemolytic הם Streptococcus pneumoniae ו- Streptococcus מקבוצת Viridans.

לבסוף ישנם החיידקים הגמא-המוליטיים או הלא-המוליטיים. אלה צומחים על האגר מבלי לייצר בו שינויים, השפעה המכונה γ- המוליזה, והמיקרואורגניזמים הם γ- המוליטית.

דוגמה לחיידקים γ-hemolytic: כמה זנים מקבוצת D סטרפטוקוקוס (Streptococcus bovis ו- Enterococcus faecalis).

יישומים

המדיום לתרבות אגר הדם הוא אחד הנפוצים ביותר במעבדה למיקרוביולוגיה.

בין המיקרואורגניזמים המסוגלים לצמוח במדיום אגר הדם ניתן למנות: חיידקים אירוביים, פעילים, מיקרואירופיליים, אנאירוביים, חיידקים גראם או גרם שליליים, חיידקים הגדלים במהירות או גדלים באטיות.

ישנם חיידקים התובעניים התזונתיים או הקשיחים צומחים, כמו גם פטריות ושמרים. כמו כן, זה מועיל לתת-תרבות או להפעלה מחדש של זנים שהם חלשים מאוד מטבולית.

עם זאת, הבחירה בסוג הדם ואגר הבסיס תשתנה בהתאם למיקרואורגניזם הסביר שנחשד כהחלמה והשימוש שאליו יש להשתמש בצלחת (תרבית או אנטי -וגרם).

בחירת סוג הדם

הדם יכול להיות כבש, ארנב, סוס או אנושי.

המומלץ ביותר הוא דם כבש, עם כמה יוצאים מן הכלל. לדוגמה, לבידוד מיני המופילוס, שם הדם המומלץ הוא דם סוסים או ארנבים, מכיוון שדם הכבש מכיל אנזימים המעכבים גורם V

הפחות מומלצת היא אנושית, עם זאת היא הנפוצה ביותר, אולי מכיוון שהיא הקלה ביותר להשיג.

יש לפזר את הדם, להשיג ללא שום תוסף ומבעלי חיים בריאים. לצורך השימוש בדם אנושי יש לקחת בחשבון מספר גורמים:

אם הדם מגיע מאנשים הסובלים מדלקות חיידקיות, יהיו להם נוגדנים ספציפיים. בתנאים אלה צפוי להיות מעכב את צמיחתם של כמה חיידקים.

אם הוא מתקבל מבנק הדם, הוא מכיל ציטרט וחיידקים מסוימים עשויים שלא לצמוח בנוכחותו. מצד שני, אם הדם מגיע מחולים הנוטלים אנטיביוטיקה, ניתן לעכב את צמיחתם של חיידקים רגישים.

ואם הדם הוא מאדם סוכרת, עודף הגלוקוז מפריע להתפתחות התקינה של דפוסי המוליזה.

בחירה בסוג אגר בסיס

אגר הבסיס המשמש להכנת אגר הדם יכול להיות רחב מאוד. ביניהם: אגר מזין, אגר עירוי לב מוח, אגר סויה של טריפטיקאז, אגר מולר הינטון, אגר תאייר מרטין, אגר קולומביה, אגר ברוצלה, אגר קמפילובקטר וכו '.

שימושים באגר הדם בהתאם למדיום הבסיס המשמש להכנתו

אגר תזונתי

בסיס זה הוא הפחות שימושי, מכיוון שהוא יגדל בעיקר חיידקים לא תובעניים, כמו למשל ביצילים enteric, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, בין היתר. לא מומלץ לבודד את סטרפטוקוקוס.

אגר עירוי מוח מוח (BHI)

זהו אחד הנפוצים ביותר כבסיס לאגר דם, מכיוון שהוא מכיל את חומרי התזונה הנחוצים לגידול מרבית החיידקים, כולל סטרפטוקוקוס sp וחיידקים תובעניים אחרים. אם כי אין זה מתאים להקפיד על דפוסי המוליזה.

בדרך כלל משתמשים בדם של כבש עם בסיס זה.

ניתן גם להכין וריאנטים של אגר דם, כאשר מוסיפים תרכובות אחרות לבידוד מיקרואורגניזמים מסוימים. לדוגמה, ניתן להשתמש בחיידק מוח מוחי עם תוסף דם ארנב, ציסטין וגלוקוזה לבידוד פרנציסלה tularensis.

אמנם, עם ציסטין טלוריט זה מועיל לבידוד של Corynebacterium diphteriae. ניתן להשתמש בדם אנושי או כבש.

עם בטא המוליזה הראשונה תיראה הילה צרה ואילו בשנייה ההילה תהיה רחבה בהרבה.

כמו כן, בסיס זה, יחד עם bacitracin, עמילן תירס, דם סוס ותוספי העשרה אחרים (IsoVitaleX) משמשים לבידוד הסוג Haemophilus sp מדגימות נשימה.

כמו כן, אם מתווספים שילוב של אנטיביוטיקה כלורמפניקול - ג'נטמיסין או פניצילין - סטרפטומיצין עם דם סוס, הוא אידיאלי לבידוד פטריות פתוגניות תובעניות, אפילו עם תשואה גבוהה יותר מאשר אגר גלוקוז סבורוד. זה שימושי במיוחד בבידוד כמוסה של Histoplasma.

אגר סויה של טריפטיקאז

בסיס זה הוא המומלץ ביותר לתצפית טובה יותר על דפוס ההמוליזה ולביצוע בדיקות אבחנתיות כמו טקסות אופטוקווין ובציטראצין. זה אגר הדם הקלאסי שמשמש באופן שגרתי.

עם בסיס זה תוכלו גם להכין את אגר הדם המיוחד ל- Corynebacterium diphteriae, עם ציסטין טלוריט ודם כבש .

באופן דומה, השילוב של אגר זה עם דם כבש, בתוספת kanamycin-vancomycin הוא אידיאלי לגידול אנאירובים, במיוחד Bacteroides sp.

אגר מולר הינטון

בסיס זה הנוסף בדם משמש לביצוע האנטיביוגרם של מיקרואורגניזמים קשים, כמו סטרפטוקוקוס sp.

זה שימושי גם לבידוד חיידקים כמו Legionella pneumophila.

תאיר מרטין אגר

מדיום זה הוא אידיאלי כבסיס לאגר דם כאשר נחשד הסוג Neisseria, ובייחוד Neisseria meningitidis, שכן N. gonorrhoeae אינו גדל על אגר הדם.

זה משמש גם לבדיקת רגישות לנייסרניה מנינגיטידיס.

אגר קולומביה

בסיס זה מצוין לזריעת דגימות ביופסיה קיבה ללייקובקטר פילורי.

המדיום מוכן על ידי הוספת 7% בדם כבש המופזר באמצעות אנטיביוטיקה (וונקומיצין, טרימתופרים, אמפוטריצין B ו- cefsulodin) כדי להגביל את צמיחתם של סוגים אחרים של חיידקים שעשויים להופיע.

בסיס זה בתוספת דם אנושי או כבש, חומצה נלידיקסית וקוליסטין שימושי לבידוד גרדנרלה וגינליס. זה אידיאלי גם להערכת הרגישות המיקרוביאלית לאנטיביוטיקה של אותו מיקרואורגניזם.

בנוסף, הוא משמש להכנת אגר דם לטיפוח אנאירובים, הוספת אמינוגליקוזידים וונדרומיצין.

בסיס זה מאפשר התבוננות נכונה בדפוסי המוליזה.

אגר ברוסלה

מדיום זה המשמש כבסיס לאגר דם יחד עם תוספת של ויטמין K הוא אידיאלי לגידול חיידקים אנאירוביים. במקרה זה, מומלץ להשתמש בדם כבש.

אגר קמפילובקטר

אגר קמפילובקטר בתוספת 5% דם כבשים וחמישה אנטיביוטיקה (קפלותין, אמפוטריצין B, טרימתופרים, פולימיקסין B וונקומיצין), הוא המדיום המשמש לבידוד קמפילובקטר ג'ג'וני בדגימות צואה.

הכנה

כל בית מסחרי מביא את ההוראות להכנת ליטר מדיום תרבות בגב המכולה. ניתן לבצע חישובים מקבילים להכנת הכמות הרצויה, בהתאם לאגר הבסיס שנבחר.

שוקלים ומתמוססים

אגר הבסיס מיובש (אבקה), ולכן יש להמיס אותו במים מזוקקים המותאמים ל- pH 7.3.

הכמות המצוינת על ידי אגר הבסיס שנבחר נשקלת ומומסת בכמות המתאימה של מים בבקבוק, ואז מחוממת על אש מתונה ומערבבת בתנועות סיבוביות עד להמסת כל האבקה.

לְעַקֵר

לאחר המומס, יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 20 דקות.

אגרגט דם

ביציאת החיטוי מותר לבקבוק להתקרר עד הטמפרטורה נע בין 40 ל- 50 מעלות צלזיוס; זוהי טמפרטורה שעור האדם תומך ובאותה עת האגר עדיין לא התמצק.

לשם כך נוגעים בבקבוק ביד ואם החום נסבל, זו הטמפרטורה האידיאלית להוסיף את הכמות המקבילה של דם מפושט (50 מ"ל לכל ליטר אגר). מערבבים בעדינות להומוגניזציה.

מעבר צבירת הדם הוא קריטי, מכיוון שאם הוא נעשה כאשר המדיום חם מאוד, תאי הדם האדומים יתפרקו והמדיום לא ישמש לצפייה בהמוליזה.

אם מוסיפים לו קר מדי, הוא יתכווץ ומשטח המדיום לא יהיה חלק כדי לאפשר ניקוד נכון.

יוצקים לתבשילי פטרי

הגישו בכלי פטרי סטריליים מיד לאחר הומוגניזציה של הדם. נשפכים כ -20 מ"ל לכל תבשיל פטרי. הליך זה נעשה במכסה זרימה למינרית או בסמוך למבער.

כשמגישים את אגר הדם בכלי פטרי, אין להשאיר בועות אוויר על פני הצלחת. אם זה קורה, להבתו של מבער בונסן מועברת במהירות על הצלחת בכדי לחסל אותם.

הפלטות מורשות להתמצק ומאוחסנות במקרר (2-8 מעלות צלזיוס) הפוכות עד לשימוש. לפני השימוש בצלחות אגר הדם, עליהם להיות מחוסמים (מותר להגיע לטמפרטורת החדר) כדי להיות מסודרים.

הלוחות המוכנים נמשכים כשבוע.

הפניות

1. Bayona M. תנאים מיקרוביולוגיים לתרבית הליקובקטר פילורי. הכומר קול גסטרונטרול 2013; 28 (2): 94-99
2. גרסיה פ, פארדס פ, פרננדז דל באריו מ '(1994). מיקרוביולוגיה קלינית מעשית. אוניברסיטת קדיז, מהדורה שנייה. שירות פרסומי UCA.
3. "אגר דם." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 10 דצמבר 2018, 14:55 UTC. 27 דצמבר 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה
5. המרכז לאבחון וטרינרי במעבדה CEDIVET. גואטמלה. ניתן להשיג ב: trensa.com.
6. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהדורה חמישית). ארגנטינה, עריכה Panamericana SA