אגר סבורוד: בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

אגר Sabouraud , הידוע גם בשם Sabouraud דקסטרוז אגר, הוא מדיום מוצק, מועשר במיוחד עבור בידוד ופיתוח של פטריות, כמו שמרים, עובשים dermatophytes.

לכן, מדיום זה לא יכול להיות חסר במעבדה מיקרוביולוגית כדי לחקור את נוכחותן של פטריות פתוגניות או אופורטוניסטיות, לא מתוך דגימות קליניות או לא קליניות. באופן דומה, הוא גם אידיאלי לגידול של חיידקים חוטיים כמו סטרפטומסים ונוקארדיאס. השימוש בו הוא רחב מאוד, שכן ניתן להשתמש בו במיקולוגיה של בני אדם, בעלי חיים, צמחים ותעשייתיים.

אגר אגר סבורוד. אגר סבורוד זרע שמרים. מקור: תמונות שצולמו על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל

מדיום זה נוצר בשנת 1896 על ידי רופא העור הבולט ריימונד סבורוד, שהפך למומחה בעל שם עולמי בהפרעות בקרקפת, בעיקר נגרם על ידי דרמטופיטים.

יצירתו הייתה כה חשובה עד כי היא שימשה מאז ונשארה בימינו, אם כי עם כמה שינויים.

למרות שהוא מיוחד לפטריות, חיידקים יכולים לצמוח במדיום זה, ולכן, עבור דגימות עם פלורה מעורבת, הכללת אנטיביוטיקה בתכשיר שלהן נדרשת כדי לעכב את צמיחת הפלורה החיידקית העשויה להיות קיימת.

הבחירה באנטיביוטיקה חייבת להיעשות בזהירות ובהתחשב בסוג הפטרייה שיש להחלים, מכיוון שחלקם מעוכבים בנוכחות חומרים מסוימים.

בָּסִיס

אגר Sabouraud דקסטרוז הוא מדיום שבנוסחו המקורי הוא סלקטיבי חלש, בגלל רמת החומציות החומצית שלו של 5.6 ± 0.2, עם זאת, חיידקים עדיין יכולים להתפתח, בעיקר בחממות ממושכות.

המדיום מכיל קפאין פפטון ועיכול לבלב של רקמת בעלי חיים, המספקים את מקור הפחמן והחנקן לצמיחת מיקרואורגניזמים.

הוא מכיל גם ריכוז גבוה של גלוקוז, המשמש כמקור אנרגיה, המקדם את צמיחת הפטריות על פני חיידקים. כל זה מעורבב עם אגר-אגר, מרכיב המעניק לו את העקביות הנכונה.

מצד שני, אגר סבסטרוד דקסטרוז יכול להיות סלקטיבי אם מתווספים אנטיביוטיקה.

בעזרת אנטיביוטיקה הוא שימושי במיוחד בדגימות פצעים, כיבים פתוחים או בכל מדגם בו יש חשד לזיהום חיידקי גדול.

השילובים הנפוצים ביותר של אגר Sabouraud דקסטרוז עם אנטיביוטיקה

אגר Saburaud עם כלורמפניקול: אידיאלי להתאוששות שמרים ופטריות נימה.

- אגר Sabouraud עם ג'נטמיצין וכלורמפניקול: כמעט כל הפטריות והשמרים החוטים גדלים במדיום זה, והוא מעכב מספר רב של חיידקים, כולל Enterobacteriaceae, Pseudomonas ו- Staphylococcus.

- אגר Sabouraud עם ציקלוהקסימיד: הוא שימושי במיוחד לדגימות מהעור או מדרכי הנשימה, כל עוד החשד הוא פטריות דימורפיות.

יש להשתמש בסיקלוהקסימיד בזהירות; למרות שהוא משמש כדי לעכב את צמיחתם של פטריות ושמרים שאינם פתוגניים או סביבתיים שעשויים להימצא כמזהמים במדגם, הוא גם מעכב את צמיחתם של פטריות מסוימות כמו Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ופטריות אופורטוניסטיות אחרות.

- אגר Sabouraud עם כלורמפניקול פלוס ציקלוהקסימיד: הוא משמש בעיקר לבידוד dermatophytes ופטריות דימורפיות. יש לו את החיסרון שהוא מעכב מינים מסוימים של פטריות אופורטוניסטיות כמו קנדידה ללא אלביקנס, אספרגילוס, זיגומציטים או סי ניפורמנס.

- אגר Sabouraud עם כלורמפניניקול, סטרפטומיצין, פניצילין G וסיקלוהקסימיד: הוא אידיאלי לדגימות המזוהמות מאוד עם חיידקים ופטריות ספירופטיות, אך יש לו את החיסרון שהוא מעכב את צמיחתם של Actinomyces ו- Nocardias, בנוסף לפטריות האופורטוניסטיות שהוזכרו לעיל.

הכנה

אם יש לכם את המרכיבים בנפרד, ניתן להכין אותם כדלקמן:

אגר סבוראוד דקסטרוז

לשקול:

- 40 גר 'דקסטרוז

- 10 גרם פפטון

- 15 גר 'אגר-אגר

- מודדים 1000 מ"ל מים מזוקקים

כל המרכיבים מעורבים, ה- pH מותאם ל 5.6. המומסים מומסים על ידי רתיחה, 20 מ"ל של המדיום מופץ בצינורות של 25 על 150 מ"מ, ללא שפה ועדיף עם כובע כותנה.

צינורות עם כובע כותנה. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל

ניתן להשתמש גם בגדלי צינורות אחרים, בהתאם לזמינות.

הם מוחפים אוטומטית למשך 10 דקות באטמוספירת לחץ (121 מעלות צלזיוס). אין לעבור על זמן החיטוי. ביציאת החיטוי, הצינורות נוטים בעזרת תומך עד שהם מתמצקים במקור חליל.

דרך נוספת היא להמיס את החומרים על ידי חימום עד לרתיחה. החיטוי החוצה למשך 10 דקות באותה בקבוקון ואז מחלק 20 מ"ל בכלי פטרי.

אם יש לכם מדיום אגר דקסטרוז אברבה המכיל כבר את כל המרכיבים, המשכו לשקול את הכמות שצוינה על ידי החברה המסחרית עבור ליטר מים אחד. שאר השלבים זהים לאלה שתוארו לעיל.

אגר דקסטרוז Sabouraud (שינוי אמונים)

לשקול:

- 20 גר 'דקסטרוז

- 10 גרם פפטון

- 17 גר 'אגר-אגר

- מודדים 1000 מ"ל מים מזוקקים

כל המרכיבים מעורבים, ה- pH מותאם ל -6.9. המשך באותו אופן כמו המקרה הקודם.

ישנם בתים מסחריים המציעים את המדיום עם כל המרכיבים. במקרה זה, שקלו והכינו כמתואר בתוספת.

אגר Sabouraud דקסטרוז (שינוי אמונים) עם כלורמפניקול

תמיסת מלאי כלורמפניקול

- שוקלים 500 מ"ג של בסיס כלורמפניקול

- מודדים 100 מ"ל של אתנול 95%

- לערבב

Sabouraud אגר דקסטרוז בינוני (אמונים) מוכן כמתואר לעיל ובנוסף לכל ליטר בינוני להוסיף 10 מ"ל של תמיסת מלאי כלורמפניקול לפני החיטוי.

סבורוד אמונים דקסטרוז אגר עם ציקלוהקסימיד

תמיסת מלאי של ציקלוהקסימיד

- שקלו 5 גר 'של ציקלוהקסימיד

- מודדים 100 מ"ל אצטון

- לערבב

Sabouraud אגר דקסטרוז בינוני (Emmons) מוכן כפי שכבר תואר ובנוסף לכל ליטר בינוני להוסיף 10 מ"ל של תמיסת המניות cycloheximide לפני החיטוי.

אגר Sabouraud דקסטרוז (אממונים) עם כלורמפניקול וסיקלוהקסימיד

Sabouraud אגר דקסטרוז בינוני (Emmons) מוכן כמתואר לעיל ובנוסף לכל ליטר בינוני להוסיף 10 מ"ל של תמיסת מלאי כלורמפניקול ו -10 מ"ל של תמיסת מניות cycloheximide לפני החיטוי.

אנטיביוטיקה אחרת שניתן להוסיף

20,000 עד 60,000 יחידות פניצילין לליטר מדיום.

30 מ"ג סטרפטומיצין לליטר בינוני.

את שניהם יש לשלב לאחר החיטוי של המדיום, מקורר מעט (50-55 מעלות צלזיוס).

0,04 גרם ניאומיצין לליטר בינוני.

0,04 גרם ג'נטמיסין לליטר בינוני.

שיקולים מיוחדים

למען הבטיחות, עדיף לזרוע אגר דקסטרוז של Sabouraud בצינורות בצורת טריז (נוטה למקור חליל) ולא בכלי פטרי, כדי למנוע פיזור ושאיפה של הנבגים.

חשוב שצינורות האגר של סבורוד יהיו מכוסים בכותנה ולא בכובע בורג, מכיוון שהמצב האנאירובי למחצה מעכב היווצרות נבגים בכמה זנים, למשל Coccidioides immitis. כמו כן, מרבית הפטריות הן אירוביות.

במקרה של שימוש בכובע הברגה, אל תיסגר הרמטית.

QA

על המדיה המוכנה לעבור בקרת איכות כדי לאמת את תפקודה התקין. לשם כך נזרעים זני בקרה מסוימים.

עבור אגר דקסטרוז של Sabouraud עם כלורמפניקול, ניתן להשתמש בזני ATCC של קנדידה אלביקנס, אשר חייבים להיות בעלי צמיחה מצוינת. צלחת נוספת מחוסמת בזני קולי Escherichia coli, אותם יש לעכב לחלוטין.

כמו כן מודגרת צלחת ללא חיסון בה לא אמורים לצמוח מיקרו-אורגניזמים.

עבור אגר דקסטרוז של Sabouraud עם כלורמפניציקול וסיקלוהקסימיד, ניתן להשתמש בזני Trichophyton mentagrophytes והם צריכים להתפתח היטב. צלחת נוספת מחוסמת בזן של אספרגילוס פלוס, בו חייבת להיות מעט או ללא גידול. בנוסף, צלחת ללא חיסון מודגרת כדי להפגין את הסטריליות שלה.

עבור אגר דקסטרוז סאבורוד עם ציקלוהקסימיד, משתמשים ב זנים של קנדידה אלביקנס, טריכופיטון רוברום או קניון מיקרוספורום, אשר חייבים להראות צמיחה טובה.

כמו כן, נכלל זן של טעם אספרגילוס, המציג צמיחה מועטה או ללא. לבסוף, דגירה צלחת ללא חיסון לבקרת סטריליות.

יישומים

תרבות ראשונית

אגר דקסטרוז קלאסי Sabouraud מכיל 4 גרם דקסטרוז והוא מצוין כאמצעי בידוד ראשוני, מכיוון שהוא מראה את המורפולוגיה האופיינית לכל פטריה.

זה גם מצוין להפגנת ייצור פיגמנט. עם זאת, זה לא האמצעי הטוב ביותר להתבוננות בספורולציה.

זה גם לא מומלץ לטיפוח Blastomyces dermatitidis, שמונע על ידי הריכוז הגבוה של הגלוקוז הקיים.

מצד שני, לצורך הטיפוח יש לקחת בחשבון שיקולים מסוימים.

חלק מהפטריות גדלות בצורה הטובה ביותר בטמפרטורת החדר, כמו עובש, אחרות גדלות בהצלחה ב 37 מעלות צלזיוס, כמו שמרים מסוימים, ואחרות יכולות לצמוח בשתי הטמפרטורות (פטריות דימורפיות).

מסיבה זו, לעיתים יש צורך להשתמש בכמה צלחות אגר של סבורוד לאותה מדגם, מכיוון שלעתים קרובות נעשות זריעה כפולה כדי לדגור את צלחת אחת בטמפרטורת החדר ואחרת ב 37 מעלות צלזיוס.

לדוגמה, Sporothrix schenckii נזרעים בשתי צלחות; האחת מודגרת בטמפרטורת החדר כדי להשיג את שלב העובש והשנייה מודגרת ב 37 מעלות צלזיוס בכדי להשיג את שלב השמרים, אך באחרון יש להוסיף 5% דם למדיום.

במקרים אחרים, דוגמת דגימות mycetoma, שני זרעי אגר של Sabouraud זרעים, האחד עם כלורמפניקול והשני עם ציקלוהקסימיד. הראשון יאפשר גידול של גורמים סיבתיים למיקוטומה ממוצא פטרייתי (Eumycetoma) וסוכני הסיבה השנייה של mycotoma ממקור חיידקי, כמו actinomycetomas.

נִבִיגָה

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar מכיל 2 גרם דקסטרוז ואינו משמש רק לבידוד, אלא גם לסיבוב ושימור פטריות.

במדיום זה ניתן להחלים זנים של Blastomyces dermatitidis.

שימור

כדי לשמר תרבויות פטריות, ניתן לאחסן במקרר (2-8 מעלות צלזיוס). זמן השימור יכול להשתנות בין שבועיים לשמונה שבועות. לאחר זמן זה יש לתרבות משנה כדי לחזור על התהליך.

חלק מהפטריות שומרות בצורה הטובה ביותר בטמפרטורת החדר, כגון Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ו- Microsporum audounii.

ניתן להאריך את תחזוקת הזן בכדי להימנע מפלומורפיזם במידה והקסטרוזה מוסרת לחלוטין מהאגר ובמידה וכמות האגר במדיום מופחתת בכדי למנוע יובש.

מיקרו-תרבויות

לצורך זיהוי כמה פטריות חוטניות, יש צורך לבצע מיקרו-תרבויות באמצעות אגר סבורוד או באמצעים מיוחדים אחרים כדי לצפות במבני ההתרבות המינית והלא-מינית.

במיקולוגיה אנושית

הוא משמש בעיקר לאבחון של מחלות פטרייתיות, בעיקר אלה המשפיעות על העור ועל קביעותיו (שיער וציפורניים).

הדגימות יכולות להיות הפרשות, אקסודים, עור, שיער, ציפורניים, כיח, CSF או שתן. פתוגנים מבודדים בדרך כלל הם דרמטופיטים, פטריות הגורמות למיקוזות תת עוריות ומערכתיות.

מיקולוגיית בעלי חיים

בעלי חיים מושפעים לרוב מזיהומים פטרייתיים, ולכן אגר סבורוד שימושי במיקולוגיה של בעלי חיים כמו אצל בני אדם.

לדוגמה, דרמטופיטים יכולים לרוב להשפיע על בעלי חיים. כזה הוא המקרה של Microsporum canis var distortum, המדביק לעתים קרובות כלבים, חתולים, סוסים, חזירים וקופים. באופן דומה, הגבס במיקרוספורום מדביק כלבים, חתולים ובעלי חיים.

ציפורים כמו תרנגולות, תרנגולים ותרנגולות מושפעות מגלינה של Microsporum.

פטריות אחרות, כמו Zymonema farciminosum, הן גם הגורם למחלות אצל בעלי חיים, בעיקר סוסים, פרדות וחמורים, ומייצרים דלקת משמעותית בכלי הלימפה.

Sporothrix schenkii ו- capsulatum Histoplasma משפיעים על בעלי חיים ביתיים ובני אדם.

מיקולוגיה סביבתית

פטריות פתוגניות או אופורטוניסטיות רבות יכולות להתרכז בכל זמן נתון בסביבה נתונה, במיוחד בחדרי ניתוח וביחידות טיפול נמרץ (ICU) של מרפאות ובתי חולים. לכן יש לבצע בקרה עליהם.

חללים פגיעים נוספים הם ספריות ומבנים ישנים, אשר יכולים להיות מושפעים מריכוז הפטריות הסביבתיות.

במחקרים סביבתיים משתמשים באגר Sabouraud דקסטרוז לבידוד פטריות.

מיקולוגיה תעשייתית

אגר Sabouraud דקסטרוז לא יכול להיעדר לחקר פטריות מזוהמות בייצור מוצרי קוסמטיקה, מזון, משקאות, עור, טקסטיל ועוד.

מיקולוגיה צמחית

צמחים סובלים גם ממחלות הנגרמות על ידי פטריות, המשפיעים על חלקים שונים של הצמח, שיכולים אפילו לסיים את הקציר, ולגרום לאובדן גדול בחקלאות.

הפניות

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). אבחון מיקרוביולוגי של mycoses ומחקרי רגישות נגד פטריות. המלצות האגודה הספרדית למחלות זיהומיות ומיקרוביולוגיה קלינית. ניתן להשיג ב: coesant-seimc.org
2. מעבדת ValteK. (2009). אגר סבוראוד דקסטרוז עם ציקלוהקסימיד. ניתן להשיג ב: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). מיקולוגיה וטרינרית. האוניברסיטה האגררית הלאומית. ניקרגואה.
4. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. ביילי וסקוט אבחון מיקרוביולוגי. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה
5. Casas-Rincón G. Mycology General. 1994. המהדורה השנייה של האוניברסיטה המרכזית של ונצואלה, מהדורות ספריות. קראקס של ונצואלה.