אגר דקסטרוז תפוחי אדמה: רציונל, הכנה ושימוש - ביולוגיה - 2025

תפוחי האדמה דקסטרוז אגר הוא מדיום, לא מוצק - תרבות מזין סלקטיבית. מינים חיידקיים ופטרתיים יכולים לצמוח בה, אך השימוש בהם מצוין במיוחד לבידוד פטריות חוטים ושמרים. זה ידוע גם כמדיום PDA לביטוי האנגלי תפוח אדמה דקסטרוז אגר.

זה שימושי במיוחד לבידוד פטריות פיטופתוגניות, כלומר אלה המשפיעות על צמחים. כדי לזרוע את הדגימות מירקות נגועים, ניתן להשתמש באמצעים אחרים כמו אגר סבורוד או מלטה-אגר, אולם לשימוש שגרתי עדיף אגר דקסטרוז תפוחי אדמה ככל שמתקבל ספורציה גדולה יותר.

אספרגילוס ניגר וסינמות על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה בהתאמה. מקור: Alextrevelian 006 בוויקיפדיה האנגלית / Joselrojas

הוא משמש גם לספירת מושבות פטריות בדגימות של קוסמטיקה, מוצרים פרמצבטיים וכמה ממוצרי חלב. כמו כן, הוא מתאים לזרוע דגימות של גרידות עור בחיפוש אחר דרמטופיטים, הצומחים היטב במדיום זה, ומפתחים את הפיגמנטים האופייניים שלהם.

מדיום דקסטרוז תפוחי אדמה הוא מדיום פשוט מאוד וקל להכנה במעבדה. הוא מכיל, כשמו כן הוא, עירוי של תפוח אדמה, דקסטרוז ואגר אגר. בנוסף, ניתן להוסיף חומרים מעכבים כדי למנוע צמיחת חיידקים ולהגדיל את הסלקטיביות למינים פטרייתיים.

בָּסִיס

אגר דקסטרוז תפוחי אדמה הוא אמצעי תרבות המספק את היסודות התזונתיים הנחוצים להתפתחות פטריות חוטים ושמרים.

השילוב של עירוי תפוח אדמה עם גלוקוז מספק את מקור האנרגיה המושלם לגידול מספק של פטריות. ואילו האגר הוא זה שמספק את העקביות למדיום.

המדיום לבדו אינו מעכב את צמיחת החיידקים, ולכן זהו מדיום לא סלקטיבי. כדי להפוך אותו לסלקטיבי, הוא זקוק לתוספת של חומרים מעכבים כמו חומצה טרטרית או אנטיביוטיקה.

הכנה

-הכנה תוצרת ביתית (לא מסחרית) של אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

צלחות פטרי

הוא מוכן כדלקמן:

מלכתחילה, תפוחי האדמה נשטפים היטב, ומסירים את האדמה שברשותם. הם חותכים לפרוסות דקות עם הכל וקליפות. 200 גרם תפוחי אדמה נשקלים ומבשלים בליטר מים מזוקקים למשך חצי שעה.

בסוף הזמן, סננו או סננו את כל התכשירים דרך בד גבינה.

הנוזל המתקבל מושלם במים מזוקקים עד ליטר אחד. להוסיף לעירוי 20 גר 'אגר-אגר ו -20 גר' דקסטרוז, לערבב היטב ולחיטוי אוטומטי ב -121 מעלות צלזיוס, בלחץ קילוגרם למשך 15 דקות.

הניחו להתקרר ל 50 מעלות צלזיוס והגישו בכלי פטרי סטריליים. הצלחות המוכנות מאוחסנות במקרר.

טריזים

ניתן להכין גם טריזי אגר דקסטרוז תפוחי אדמה.

במקרה זה, לפני שעיקור החיטוי במערכת החיטוי, 12 עד 15 מ"ל של המדיום מונחים בצינורות, מאוחר יותר הם מוחטקים אוטומטית וכאשר הם משאירים הם שוכבים על תומכים מיוחדים עד להתמצקותם. מאחסנים במקרר.

המדיום נשאר על pH של 5.6 ± 0.2, עם זאת, במעבדות מסוימות מוסיפים חומצה טרטרית של 10% כדי להוריד את החומציות ל- 3.1 ± 0.1 על מנת לעכב את צמיחת החיידקים.

באותה מובן, מעבדות אחרות מעדיפות להוסיף אנטיביוטיקה בכדי להפוך אותה לסלקטיבית לגידול פטריות ולמניעת צמיחת חיידקים.

-הכנה מסחרית של אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

שוקלים 39 גרם מהמדיום המיובש המסחרית, וממיסים אותו בליטר אחד של מים מזוקקים. תנו לו לנוח 5 דקות.

התערובת מחוממת תוך ערבוב תכוף עד להמסה מוחלטת. לאחר מכן, הוא מעוקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

ניתן להכין צלחות או טריזים. המשך כמתואר לעיל.

ה- pH נשאר על 5.6 ± 0.2. אם רצוי pH של 3.1, יש להוסיף 14 מ"ל של חומצה טרטרית סטרילית 20% לפני ההגשה לצלחות.

המדיום הגולמי בצבע בז 'והמדיום המוכן הוא ענבר בהיר עם מראה מעט מעונן או אטום.

יישומים

תהליך לזריעת דגימות מהצומח על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

-על עלים מוכתמים

העלים נחתכים לחתיכות.

בכוס של 50 סמ"ק עם 50% אלכוהול, הניחו את חתיכות העלים (חתיכות מוכתמות ובריאות), כדי לחטא את פני השטח למשך 20 עד 30 שניות. זרקו את האלכוהול והוסיפו 20% נתרן היפוכלוריט למשך 40 עד 50 שניות אם הם עלים דקים והגדילו את הזמן ל 80 שניות אם זה קליפות עץ ויומני.

השליך את נתרן היפוכלוריט ולקח את החלקים המחוטאים במלקחיים סטריליים והניח אותם על פני המדיום (מקסימום 10 חלקים). קבעו את התאריך ודגרו על 20-30 מעלות צלזיוס.

-לפירות ופקעות

אם הפרי בשרני, פתחו את הפירות המושפעים מהפטרייה וקחו חתיכות באיזמל אזרחי, הן מהחלקים החולים והבריאים והניחו אותם על פני אגר.

אם הפרי הוא הדר, כמו לימון או תפוז, יש לפתוח אותו ולזרוע את זרעיו.

כאשר מושפע משטח הפרי ונצפים נבגים, האידיאל הוא להשתמש בשיטת הגרידה בצלחת; זה מורכב מנגיעה עם הנבגים בעזרת מרית מעוקרת ומקוררת "L" בצורת ואז לבצע זריעת זיגזג פעמיים עד שלוש על אגר.

לדגנים

הם מחוטאים כמתואר בעלים ומונחים בהמשך על האגר.

-לענפים וגבעולים

הקליפה מגרדת ואחריה נלקחים חלקים של החלק הבריא והחולה ונזרעים ישירות על האגר.

הלוחות הזרעים מודגרים אירובית בטמפרטורה של 20-30 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות.

תהליך לזריעת דגימות בקנה מידה של עור, שיער או ציפורניים על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

יש לבצע את הדגימה באמצעות להב אזמל מס '11, כדי לחתוך שיער, קשקשי עור או ציפורניים מושפעים בחיפוש אחר דרמטופיטים. לפני נטילת הדגימה, יש לחטא את האזור באמצעות 70% אלכוהול.

מדגם דלעת

בנגעים קשקשיים יש לגרד את קצה הנגע, מכיוון שסביר יותר שהפטרייה תמצא שם.

בנגעים אקסודטיביים נלקחת הדגימה בעזרת ספוגית יבשה או רטובה. זורע מייד על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה או על אגר סבורוד. הימנע מאמצעי תחבורה.

שיטה נוספת לדגימה היא באמצעות טכניקת ריבוע השטיח של מריאט ואדן קמפוס. במקרה זה, האזור הפגוע משפשף 5 פעמים עם חתיכת צמר סטרילי לטיפוח לאחר מכן.

ניתן להכניס את הדגימה ישירות למדיום התרבות.

מדגם שיער

בהתאם לפתולוגיה, ניתן לנתק את החלק המושפע או לעקור אותו. מניחים את הדגימה במדיום התרבות.

מדגם מסמר

ניתן לשרוט או לחתוך חלק ספציפי מהציפורן הנגועה. זה יהיה תלוי בסוג הפציעה.

חותכים את הדגימה לחתיכות של 1 מ"מ לפני הזריעה על מנת להגדיל את ההסתברות למגע של הפטרייה עם מדיום התרבות.

הליך זיהוי

המושבות המתקבלות בצלחת מבודדות בצינורות המכילים אגר דקסטרוז תפוחי אדמה לביצוע המחקר המקרוסקופי של המושבות (מראה, צבע, עקביות, דרגת התפתחות.

המחקר המיקרוסקופי (תצפית על מבנים ותצורותיהם) יכול להיעשות על ידי מיקרו-תרבויות או התבוננות ישירה תחת המיקרוסקופ בין המגלשה לשקופית.

ספירת המושבה

ניתן להשתמש במדיום זה גם לקביעת עומס הפטרייה והשמרים המצוי בדגימות צמחיות, מזון, קוסמטיקה או תרופות. למטרה זו משתמשים באגר דקסטרוז תפוחי אדמה בתוספת אנטיביוטיקה, כגון: (כלורמפניקול, כלורוטרציקלין או שניהם).

יוצקים 1 מ"ל מהדגימה - רצוי מדולל - לכלי פטרי סטרילי וריק, ואז ממיסים כרית של אגר דקסטרוז תפוחי אדמה ומניחים להתקרר ל 45 מעלות צלזיוס. יוצקים על צלחת הפטרי וסובבים עד הומוגניזציה. תנו לו לנוח עד שיתמצק.

דגירה אירובית בחום של 20-25 מעלות צלזיוס (תבניות) או 30-32 מעלות צלזיוס (שמרים) למשך 5 עד 7 ימים ומעלה, תלוי בסוג הפטרייה המבוקשת ובסוג הדגימה. ניתן להשתמש בשתי צלחות לדגירה בשני טווחי הטמפרטורה.

ספירת מושבות פטריות במדגם מזון. אגר דקסטרוז תפוחי אדמה בתוספת אנטיביוטיקה. מקור: Pxhere.com תמונה / 777267

שמירה על זנים פטרייתיים

אגר דקסטרוז תפוחי אדמה יכול לשמש לשמירה על זני פטרייתיים קיימא למשך מספר שנים.

לצורך כך, הפטרייה מגדלת על טריזי אגר דקסטרוז תפוחי אדמה וברגע שהפטרייה גדלה היא מכוסה בשמן מינרלי. יש לעקר את השמן בחיטוי אוטומטי למשך 45 דקות, ובעל צמיגות של כ -330 עד 330 סייבול. השמן צריך להיות 1 עד 2 ס"מ מעל קצה שפוע.

QA

מכל אצווה שהוכנה, קחו צלחות 1 או 2 ודגרו אותן בחום של 25 מעלות למשך 48 שעות או 20 מעלות למשך 96 שעות. בקרת סטריליות טובה היא כזו שלא נצפתה התפתחות מושבה.

ניתן להשתמש גם בזני בקרה ידועים או מוסמכים כגון:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. צפוי צמיחה טובה בכל המקרים.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. תפוח אדמה גלוקוז אגר. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
2. מעבדות Neogen. אגר דקסטרוז תפוחי אדמה. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
3. מעבדת Insumolab. אגר דקסטרוז תפוחי אדמה. ניתן להשיג ב: insumolab.cl
4. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
5. Casas-Rincón G. Mycology General. 1994. המהדורה השנייה של האוניברסיטה המרכזית של ונצואלה, מהדורות ספריות. קראקס של ונצואלה.
6. Aceituno M. הערכת האיכות המיקרוביולוגית בצלליות, סוג אבקה קומפקטי של מעבדה לייצור לאומי, על פי שיטת הפניה Pharmacopea Usp 2005. עבודת גמר העליונה לתואר כימאי פרמצבטי. אוניברסיטת סן קרלוס מגואטמלה.
7. עיבוד דגימות לפני השטח. כתב העת Iberoamerican of Mycology. 2007; עמ. 1-12