MRS אגר הוא תרבות בינונית מוצקה סלקטיבית המשמשת בידוד הספירה של חיידקי חומצה לקטית, במיוחד של לקטובצילוס הסוג. אגר זה נוצר בשנת 1960 על ידי מאן, רוגוסה ושרפה, הנושא את אותו שם, אך בשל מורכבותו נעשה שימוש לרוב בקיצור ה- MRS.
זה מורכב מפפטון פרוטאוז, תמצית בשר, תמצית שמרים, גלוקוזה, סורביטן מונוליאט, דיפוטסיום פוספט, נתרן אצטט, אמוניום ציטרט, מגנזיום סולפט, מנגן סולפט ואגר.
האדם רוגוסה ושרפה אגר (MRS) זרעו עם Lactobacillus sp. מקור: תמונה שנתרמה למאמר זה על ידי המחברים: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. התמונה שצולמה במהלך החקירה שכותרתה: הערכה של חיידקי חומצה לקטית ו- Bifidobacteria עם פוטנציאל פרוביוטי בחלב אם וצואה תינוקות. .
הרכב זה מאפשר התפתחות תקינה של חיידקי חומצה לקטית מדגימות קליניות, כמו צואה, פריקה מהנרתיק, דגימות דרך הפה וחלב אם, כמו גם מזון חלב ובשר.
זה לא משמש באופן שגרתי במעבדות קליניות, מכיוון שחיידקי חומצה לקטית כמעט ולא מעורבים בתהליכי מחלה. עם זאת, בתחום מיקרוביולוגיה של מזון השימוש באגר MRS הוא תכוף יותר.
מצד שני, המדיום הזה משמש חלק ממרכזי המחקר שמטרתם חקר חיידקי חומצה לקטית.
בָּסִיס
לגבר, לרוגוסה ולשרפה אגר יש קומפוזיציה מורכבת למדי. על ידי פירוק הפונקציה של כל אחד ממרכיביו, ניתן להסביר את היסוד שלו.
פפטון חלבון, תמצית בשר, תמצית שמרים וגלוקוזה הם חומרים מזינים המספקים את המקור לפחמן, חנקן, ויטמינים ומינרלים הנחוצים לצמיחת חיידקים. יתר על כן, גלוקוז הוא מקור האנרגיה האוניברסלי המשמש ברוב מדיות התרבות.
מצד שני, כדי להעדיף גידול של חיידקי חומצה לקטית, נדרשת נוכחות של קופקטורים (קטיונים) החיוניים במטבוליזם של לקטובצילוס וחיידקים קשורים; תרכובות אלה הינן מלחי נתרן, מגנזיום ומנגן.
באופן דומה, סורביטן מונוליאט או פוליסורבט 80 הם מקור חשוב לחומצות שומן מכיוון שהם נספגים כחומרים מזינים.
יתר על כן, סורביטן מונוליאט ואמוניום ציטרט פועלים על ידי עיכוב התפתחות הפלורה הנלווית, ובמיוחד חיידקים גראם שליליים, ומספקים את האופי הסלקטיבי של אגר זה.
לבסוף, האגר-אגר הוא זה שמספק את העקביות המוצקה למדיום.
ישנן גרסאות אחרות של אגר מאן רוגוסה שארפה; לאחד מהם מתווסף ציסטאין (MRSc), שימושי מאוד לבידוד bifidobacteria, בקרב מיקרואורגניזמים אחרים. מצד שני, יש את המדיום MRS בתוספת ניאומיצין, פרומומיצין, חומצה נלידיקסית וליתיום כלוריד, מיוחד לספירה סלקטיבית של ביפידובקטריה במוצרי חלב.
הכנה
שקלו 68.25 גרם מהמדיום המיובש והמוססו בליטר אחד של מים מזוקקים. בואו לעמוד במשך 5 דקות. להתמוסס לחלוטין, פנו למקור חום, תוך ערבוב תדיר, והרתיחו למשך 1-2 דקות. יש לעקר בחיטוי בחום של 121 מעלות למשך 15 דקות.
כשעוזבים את החיטוי, אפשרו לעמוד כמה דקות ולהפיץ בעודם חמים בכלי פטרי סטריליים.
אפשר להתמצק ולהפוך צלחות, להזמין מתלי צלחות ולקרר במקרר עד לשימוש. אפשר לפלטות להתחמם לטמפרטורת החדר לפני השימוש.
PH של המדיום צריך להיות 6.4 ± 0.2. חלק מהבתים המסחריים ממליצים על pH בין 5.5 ל 5.9.
המדיום המיובש בצבע בז 'ומוכן ענבר כהה.
יש לאחסן גם את המדיום המיובש וגם את הצלחות המוכנות ב 2-8 מעלות צלזיוס.
יישומים
ניתן לזרוח פלטות אגר של MRS בשטח (תשישות או מרית דריגלסקי). ניתן גם לזרוע אותו בעומק. יש לדגור את הפלטות בחום של 37 מעלות צלזיוס במיקרואירופיליות (4% O 2 ו- 5-10% CO 2 ) למשך 24 עד 72 שעות.
שיטת הזריעה נבחרת על פי המטרה הנרדפת (בידוד או ספירה).
מאפייני המושבות
המושבות החזקות של לקטובצילוס צומחות לבנות בצבע ובעלות אגר זה מראה צבעוני או שמנתי. לאחר מכן יש לזהות אותם.
בידוד של חיידקי חומצה לקטית
לשם כך משתמשים בהזרעת משטח. הדגימות שייזרעו דורשות הליך קודם.
במקרה של דגימות חלב אם, מומלץ לצנטר 1 מ"ל מהדגימה במהירות של 14,000 סל"ד למשך 10 דקות, על מנת להסיר את השכבה השומנית. 900 מיקרוסופט מושלכים, וב- 100 המיליון הנותרים מושקעים המשקעים ונשפכים על פני אגר ה- MRS ואז יש לחלק אותו באופן שווה בעזרת מרית דריגלסקי.
במקרה של דגימות צואה, גרם אחד (1) של צואה נשקל ומומוגן ב 9 מ"ל מים 0.1% סטרפטיים סטריליים, המתאימים לדילול 1/10. ואז מבוצעים דילולים סדרתיים, עד לקבלת דילול סופי של 10 -4 .
לבסוף, נלקחים 100 μl מהדלילים 10-2 , 10 -3 ו- 10 -4 וכל דילול זורע על אגר MRS, ומתפזר באופן שווה בעזרת מרית דריגלסקי.
חיידקי חומצת חלב סופרים
במקרה זה הזריעה נעשית בעומק.
עבור דגימות חלב אם, נלקחים 1 מ"ל ומונחים בצינור פלסטי חרוטי סטרילי. אגר MRS מתווסף בטמפרטורה משוערת של 40 מעלות צלזיוס לנפח סופי של 25 מ"ל, לקבלת תערובת הומוגנית. לאחר מכן, הוא מוזג לתבשילי פטרי סטריליים בצורה אחידה ומותר לעמוד עד לפילמור.
עבור דגימות צואה מבוצעים דילולים, כמתואר לעיל. קח 1 מ"ל מכל דילול והניח אותו בצינורות פלסטיק חרוטי סטרילי. אגר MRS מותך מתווסף לנפח של 25 מ"ל.
התערובת של כל דילול מוזגת באופן שווה לתבשילי פטרי סטריליים. לבסוף נותר לנוח עד לפילמור.
המושבה סופרת על אגר מאן רוגוסה ושרפה (MRS). מקור: תמונה שנתרמה למאמר זה. צלמים: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. התמונה צולמה במהלך המחקר שכותרתה: הערכה של חיידקי חומצה לקטית ו- Bifidobacteria עם פוטנציאל פרוביוטי בחלב אם וצואה לתינוקות.
רמת מחקר
כל יום מחקר של חיידקי חומצה לקטית צובר עניין רב יותר; החוקרים מבקשים במיוחד ללמוד על זנים חדשים ועל הפוטנציאל שלהם כתסיסי התנע לתקינה בייצור מוצרי חלב, בין שימושים אחרים.
במובן זה, Alvarado et al. (2007) השתמש באגר ה- MRS לביצוע מחקר בו הם מבודדים, זיהו ואפיינו חיידקי חומצה לקטית שנמצאים בגבינה ונצואלית מעושנת באנדים.
בגבינה הם מצאו נוכחות של חיידקים מסוגות הלקטוקוקוס והלקטובצילוס, והסיקו כי תערובות הזנים המבודדים מתאימים כזני מתחילים בייצור גבינות מחלב מפוסטר.
מצד שני, Sánchez et al. (2017) השתמש באגר MRS כדי לחקור את הימצאותם של חיידקי חומצה לקטית בדרכי העיכול של חזרזירונים, על מנת להשתמש בהם כפרוביוטיקה מקומית המגדילה את הפרודוקטיביות של חזירונים בריאים.
בעזרת מדיום זה הם הצליחו לבודד ארבעה מינים: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ו- Pediococcus pentosaceus.
כמו כן Báez et al. (2019) השתמש באגר MRS כדי להעריך חיידקי חומצה לקטית (LAB) ובריפוי בקטריות בעלות פוטנציאל פרוביוטיקה בחלב אם וצואה לתינוקות.
הם הצליחו לבודד 11 BAL ו- 3 Bifidobacteria sp בחלב אם, ו- 8 BAL ו- 2 Bifidobacteria sp. בצואה. כולם עמדו בפרמטרים מסוימים המוכיחים אותם כחיידקים בעלי פעילות פרוביוטית.
החוקרים הגיעו למסקנה כי חלב אם וגם צואה אצל תינוקות יונקים בלבד משמשים כמקור טבעי לחיידקים פרוביוטיים.
QA
כדי להעריך את איכות אגר ה- MRS, בוחרים זנים כמו:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia colerei.
התוצאות הצפויות הן צמיחה משביעת רצון עבור 6 החיידקים הראשונים, בעוד שיש לעכב לחלוטין את E. coli ו- Bacillus cereus.
הפניות
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. בידוד, זיהוי ואפיון של חיידקים חומצת חלב מגבינה אומנית מעושנת בוונצואלה. השימוש בו כתרבות מתחילה. סנט. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. ניתן להשיג ב: scielo.org.
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro בידוד של חיידקים חומצת חלב ממערכת העיכול של החזרזיר. הכמרית. וטרינר. פרו 2017; 28 (3): 730-736. ניתן להשיג ב: scielo.org.
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. הערכת חיידקי חומצה לקטית וביפידובקטריה בעלת פוטנציאל פרוביוטיקה בחלב אם וצואה של תינוקות בעיריית אקבדו, מירנדה 2017. עבודות לתואר ראשון העומדות בתואר ראשון בתואר ראשון במוצרי תינוקות ביואנליזה. אוניברסיטת קרבובו, ונצואלה.
- מעבדת בריטניה. אגר מר. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- תורמים בוויקיפדיה. אגר מר. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 10 בינואר 2018, 19:44 UTC. ניתן להשיג ב: wikipedia.org נגש ב 17 בפברואר 2019.
- רועי ד מדיה לבידוד וספירת ביפידובקטריה במוצרי חלב. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.