אגר ליה (ברזל ליזין): בסיס, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

LIA אגר (ליזין הברזל) היא בדיקה ביוכימית המשמש לזיהוי חיידקים ממשפחת Enterobacteriaceae. המדיום הזה נוצר על ידי אדוארדס ופייף, על בסיס הנוסחה של פלקוב.

במקור, בדיקה זו הייתה מרק המכיל פפונים, תמצית שמרים, גלוקוזה, ל-ליזין, סגול ברומוקרזול ומים מזוקקים. אדוארדס ופייף הוסיפו אגר-אגר, אמוניום ציטרט ברזלי, ונתרן תיוסולפט.

מבחן חיובי ושלילי ל dekarboxylation ליזין. מקור: מאפייני צילום ותרשימים של המחבר MSc. מריאלסה גיל

הבדיקה מורכבת למעשה מהדגמת נוכחות של האנזימים ליזין דקרבוקסילאז, המסוגלת להגיב עם קבוצת הקרבוקסיל של חומצת האמינו L-lysine. דימינציה של חומצת האמינו יכולה להתרחש גם בגלל נוכחותו של האנזים ליזין-דימיניז.

בנוסף, הרכב המדיום מראה את יכולתם של כמה סוגים של חיידקים לייצר מימן גופרתי. לבסוף, ניתן גם לצפות בייצור הגז במדיום או לא.

בָּסִיס

פפטונים ותמצית שמרים

כמו מרבית מדיות התרבות, ליזין ברזל אגר מכיל רכיבים המספקים את המקור לחומרים תזונתיים הנחוצים לגידול חיידקים. רכיבים אלה מיוצגים על ידי פפטונים ותמצית שמרים.

גלוקוזה

באופן דומה, אגר זה מכיל גלוקוז כפחמימה הניתנת לתסיסה. ידוע כי כל החיידקים במשפחת Enterobacteriaceae מתסיסים את הגלוקוז.

שלב זה הוא קריטי, מכיוון שהוא יהיה אחראי על החמצת המדיום, תנאי חיוני לכך שהאנזים ליזין דקארבוקסילאז - אם קיים - לפעול על המצע שלו.

בחלק מהסוגים החיידקיים ניתן לצפות בייצור גז כתוצאה מתסיסה של גלוקוז.

ניתן להבחין בגז כאשר יש תזוזה של האגר בצינור, ומשאיר חלל ריק בתחתית הצינור, או על ידי שבר של המדיום לשני חלקים או יותר.

ל-ליזין

לאחר ליזרין דק-ארגזילציה נוצרים דימין (קדברין) ופחמן דו חמצני.

Decarboxylation מתרחשת בנוכחות הפוספט הקואנזים פירידוקסלי. תגובה זו בלתי הפיכה.

מחוון PH (סגול ברומוקרזול)

כל שינויי החומציות שמתרחשים במדיום על ידי התגובות השונות מתגלים על ידי אינדיקטור ה- pH של הברומוקרזול הסגול.

במובן זה, כשיש החמצה המדיום הופך לצהוב, וכשיש אלקליזציה המדיום חוזר לצבע הסגול או הסגול המקורי.

כאשר מתרחשת התפשטות ליזין בגלל נוכחותו של האנזים ליזין-דימינאז, נוצר צבע אדמדם על פני השטח, האופייני לסוגות הפרוטאוס, פרובידנסיה וכמה מינים של מורגנלה.

זה נובע מהעובדה שבמהלך התפשטות נוצרת חומצה אלפא-קטו-פחמנית, המגיבה עם אמוניום ציטרט בנוכחות חמצן, הגורמת לצבע האמור.

ברזל אמוניום ציטרט וסודיום תיוספט

לעומת זאת, הוכחה על ידי נוכחות נתרן תיוסולפט (מקור גופרית) וחומצה אמוניום ציטראט, שהוא היזם של H ₂ S , על ידי חיידקים המייצרים מימן גופרתי .

לחיידקים שיש להם את האנזים תיוסולפט רדוקטאז יש יכולת לפעול על ידי הפחתת נתרן תיוסולפט הקיים, ויוצרים סולפיט ומימן גופרתי (H ₂ S).

האחרון הוא גז חסר צבע, אך כאשר מגיבים עם מלח הברזל הוא יוצר סולפיד מתכתי ברזלי, שהוא תרכובת בלתי מסיסה (משקע שחור נראה).

עם זאת, היכולת ליצור H ₂ S עם מדיום זה אינה אמינה במיוחד, מכיוון שכמה חיידקים שליליים decarboxylase שליליים המסוגלים לייצר H ₂ S לא יווצרו את המשקעים השחורים, מכיוון שהחומציות של המדיום מפריעה. לכן מומלץ לבדוק עם אמצעי מדיה אחרים המכילים ברזל.

פרשנות המבחן

דקארבוקסילציה ליזין

יש לקרוא את הצינורות לאחר 24 שעות הדגירה, אחרת קיים סיכון לפרש את התגובה השגויה ולדווח על שלילי שווא.

יש לזכור כי התגובה הראשונה שתתרחש תהיה התסיסה של הגלוקוז, ולכן כל הצינורות לאחר 10 עד 12 שעות יהפכו לצהובים.

אם בתום זמן הדגירה (24 שעות) נצפה רקע צהוב עם משטח סגול או סגול, התגובה שלילית. הצבע הסגול של פני השטח תואם את הבסיס של המדיום על ידי שימוש בפפונים.

תגובה חיובית היא כזו שתחתית ומשטח הצינור סגולים לחלוטין, כלומר היא חוזרת לצבע המקורי.

לכן, מי שקובע את חיוביות הבדיקה הוא הבסיס או הרקע של המדיום. אם יש ספק לגבי הצבע, ניתן להשוות אותו לצינור LIA שאינו מחוסן.

דימינציה של ליזין

צינור המציג דימינציה של ליזין יהיה בעל משטח חום אדום אדמדם ורקע צהוב (חומצי), או שכל הצינור בצבע חום אדמדם.

תגובה זו מתפרשת כשלילית ל dekarboxylation של ליזין, אך חיובית לדימינציה של ליזין.

תגובה זו מוגדרת ומתפרשת על הלוח.

ייצור מימן גופרתי (H

תגובה חיובית נצפתה על ידי הופעת משקעים שחורים במדיום או בחלקו. בדרך כלל בין קצה פועלי הבסיס.

אם המשקעים מתרחשים ברחבי הצינור, הוא לא יחשוף את התגובות האחרות שמתרחשות באמצע.

תיעוד התוצאות

כאשר מפרשים את הבדיקה התוצאות נרשמות כך:

ראשית נקרא הפוע, אחר כך התחתון או החסימה, אחר כך ייצור H ₂ S, ולבסוף ייצור הגז.

דוגמה: K / A + (-). זה אומר:

• K: לוח אלקליין (צבע סגול)
• ת: רקע חומצי (צהוב), כלומר תגובת דק-בוקסילציה שלילית ודימינציה שלילית.
• +: ייצור מימן גופרתי
• (-): בלי גז.

הכנה

שקלו 35 גר 'מתווך הליזין של אגר ברזל מיובש וממיסים אותו בליטר אחד של מים מזוקקים.

מחממים עד שהאגר מתמוסס לחלוטין, לשם כך אפשר לו לרתיחה במשך דקה, תוך ערבוב תכוף. מחלקים 4 מ"ל מהמדיום לצינורות מבחן 13/100 עם כובעי כותנה.

יש לעקר בחיטוי בחום של 121 מעלות למשך 15 דקות. הסר מהחיטוי ואפשר לעמוד בזווית כך שיהיה בסיס עמוק ופינה קצרה.

מאחסנים במקרר 2-8 מעלות צלזיוס. תן לזה להתחמם לפני שזורעים את זן החיידק.

צבע המדיום המיובש בצבע בז 'והמדיום המוכן הוא סגול אדמדם.

ה- pH הסופי של המדיום המוכן הוא 6.7 ± 0.2

המדיום הופך צהוב ב- pH 5.2 ומטה, והוא סגול ב- pH 6.5 ומעלה.

יישומים

בדיקה זו, יחד עם בדיקות ביוכימיות אחרות, משמשת לזיהוי הביצילי ממשפחת Enterobacteriaceae.

המדיום מושתל עם לולאה או מחט ישרות, נקודה אחת או שתיים נעשות לתחתית הצינור ואז מנקדים את פני המדיום בזיגזג.

דגירה במשך 24 שעות ב 35-37 מעלות צלזיוס באירוביוזיס. במידת הצורך, נותרים לדגירה למשך 24 שעות נוספות.

כדאי בעיקר להבדיל בין מינים Citrobacter שליליים לקטיים מ Salmonellas sp.

מקור: Koneman E, אלן S, ג'נדה W, שרקנברגר P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.

הפניות

1. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
4. מעבדות בריטניה. אגר ברזל ליזין. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
5. מעבדות BD. מוטות ברזל אגר BBL ליזין. 2007. זמין ב: bd.com
6. מעבדות וולטק. LIA בינוני 2009. זמין בכתובת: andinamedica.com