אגר Hektoen או Hektoen המעיים אגרו בינוני מוצק הוא סלקטיבית ותרבות הפרש. הוא נוצר במכון Hektoen על ידי קינג ומצגר לבידוד חיידקים enteropathogenic של סוגה Shigella ו Salmonella.
המדיום מורכב מפוטון פרוטאוזה, תמצית שמרים, מלחי מרה, לקטוז, סוכרוז, סליצין, נתרן תיוסולפט, נתרן כלוריד, ברזל ציטרט, אמוניום ציטרט, ברומותימול כחול, פוקסין חומצה ואגר. ניסוח זה מאפשר להבדיל בין סוגות השיגלה והסלמונלה משאר החיידקים המסוגלים לגדול במדיום זה.
א. וירג'ין Hektoen אגר. B. Seeded Hektoen אגר. מקור: Flickr.com/ המעלה המקורי היה Philippinjl בוויקיפדיה הצרפתית.
למרות שיש אמצעי מדיה אחרים בעלי אותה פונקציה כמו אגר Hektoen, יש לזה יתרון גדול יותר בהשוואה לתקשורת אחרת, במיוחד כשרוצים להחלים מינים של שיגלה.
המינים של שני המינים גורמים לבעיות במערכת העיכול חמורות בבני אדם עקב צריכת מזון מזוהם; לכן ההעברה היא צואתית - דרך הפה. זו הסיבה שהשימוש באגר Hektoen מצוין בעיקר בניתוח המיקרוביולוגי של דגימות צואה ומזון.
בָּסִיס
Hektoen Agar מכיל פפטונים ותמצית שמרים כמקור לחומרים תזונתיים, ומספק את היסודות החיוניים להתפתחות מיקרוביאלית.
עם זאת, יש לו גם מלחי מרה שפועלים על ידי עיכוב צמיחתם של כמה חיידקים, במיוחד גרם חיובי וחלקם גרם שלילי. מסיבה זו היא נחשבת למדיום סלקטיבי.
מצד שני, אגר Hektoen הוא מדיום דיפרנציאלי. נכס זה מועבר על ידי נוכחות של פחמימות מותססות כמו לקטוז, סוכרוז וסליצין, יחד עם מערכת אינדיקטור ה- pH, המיוצגת על ידי ברומותימול כחול וחומצה פוקסין.
כל החיידקים המסוגלים לגדול על מדיום זה שאינם שייכים לסוג סלמונלה ושיגלה יפתחו מושבות סלמון או תפוז למעט הסוג פרוטאוס. זה נובע מהתססה של אחת או יותר מהפחמימות הקיימות, המחמצת את המדיום, מה שגורם למדד ה- pH להסתובב.
הסוג שיגלה וסלמונלה מצידו אינם מסוגלים לתסס אף אחד מהפחמימות הקיימות, ומשתמשים רק בפפונים כמקור אנרגיה, מה שמבסס את המדיום ולכן מושבותיהם ירוקות-כחולות.
ניתן להבחין בין חיידקים המסוגלים ליצור מימן גופרתי (גז חסר צבע) במדיום זה. נתרן תיוסולפט משמש כמקור לגופרית ואילו ציטרט ברזל הוא היזם. שתי התרכובות מאפשרות היווצרות משקעים שחורים של גופרת ברזל המציגה את התגובה.
המשקעים השחורים במרכז המושבה כשסביבה הילה שקופה מעניקים מראה עין דג. מאפיין זה מרמז על נוכחותו של הסוג סלמונלה.
לבסוף, נתרן כלוריד שומר על האיזון האוסמוטי והאגר מספק את העקביות המוצקה למדיום.
הכנה
שוקלים 76 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר מים מזוקקים. לנער את התערובת במרץ ואז לתת לה לנוח 10 עד 15 דקות. ניתן לחמם אותו ולרתיח אותו, ולתת בו תנועות סיבוביות עד להמסתו המוחלטת. המדיום הזה לא נחרץ אוטומטית.
כאשר המדיום מגיע לטמפרטורה של כ 45 מעלות צלזיוס, נפח של 20 מ"ל מוזג ישירות לכלי פטרי סטריליים.
אגר מותר להתמצק. באותה עת הם מוכנים לשימוש. מומלץ להשתמש בהם באופן מיידי. אם זה לא אפשרי, הם מוחזקים במקרר עד לשימוש.
יש להוציא צלחות מהמקרר מראש לפני הזריעה בכדי להביא אותן לטמפרטורת החדר.
PH של המדיום צריך להיות 7.5 ± 0.2. צבע המדיום המיובש הוא סגול והמדיום המוכן הוא ירוק-חום.
להשתמש
השימוש באגר Hektoen מומלץ לחיפוש אחר חיידקים מסוג השיגלה והסלמונלה בדגימות צואה ומזון.
האפשרות לבידוד חיידקים אלה מוגברת במידה ניכרת אם הדגימה מועשרת בעבר במבשלים מיוחדים, כגון מרק סלניט, מרק סלניט ציסטין, מרק טטרתיונאט וכו '.
החיסון חייב להיות חזק והזרעה נעשית על ידי פסים. הצלחות מודגרות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במשך 24 עד 48 שעות באירוביוזיס.
מומלץ לבצע דגירה למשך 48 שעות מכיוון שמאפייני המושבות ברורים יותר לפירושם ולהבדלתם בשלב זה.
QA
לביצוע בקרת איכות על מדיום זה משתמשים בזני חיידקים מאושרים, כגון: סלמונלה typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ו- Shigella sonnei ATCC 25931.
התוצאות הצפויות הן כדלקמן: סלמונלה טיפימוריום ו- Salmonella enteritidis צריכים לפתח מושבות כחולות-ירוקות עם או בלי מרכז שחור. ואילו זן השיגלה יגדל כמושבות כחולות-ירוקות.
ניתן לכלול גם זנים של Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ו- Staphylococcus aureus ATCC 25923.
במקרים אלה המאפיינים הנצפים הם הבאים: E. coli ו- K. pneumoniae יפתחו מושבות תפוז סלמון במדיום זה, עם משקעים באותו צבע סביבם. ואילו, חלבון יפתח מושבות כחולות-ירוקות עם או בלי מרכז שחור.
בעוד שחייבים לעכב את S. aureus ו- E. faecalis, E. faecalis מצליח מדי פעם לגדול כ מושבות צהובות קטנות מאוד.
מאידך, מכיוון שמדיום זה אינו מוחלט אוטומטית, חשוב להעריך את הסטריליות של המדיום. לכן, מכל אצווה שהוכנה, יש לדגור על אחת לשתי צלחות לא מחוסמות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות באווירוביוזיס.
ברור שלא צפויה שום צמיחה מכל סוג שהוא בצלחת.
מגבלות
-מינים של חלבונים יכולים להתפתח במדיום זה וניתן לבלבל בין מאפייני מושבותיהם לבין מיני סלמונלה או שיגלה. מסיבה זו יש לאשר כל מושבה חשודה באמצעות בדיקות ביוכימיות.
-הכרח ללוות את השימוש במדיום זה עם אגרים פחות סלקטיביים אחרים, מכיוון שאם המיקרואורגניזם המבוקש נמצא בריכוזים נמוכים הוא עלול לא להתפתח במדיום זה.
אל תחמם יתר על המידה במהלך ההכנה, שכן חום מוגזם משנה את הרכב המדיום.
באופן יוצא דופן עלולות להופיע מושבות של סלמונלה המתססות לקטוז שעשויות להשתנות.
הפניות
- תורמים בוויקיפדיה. אגר אנטיק Hektoen. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 13 במרץ, 2019, 23:38 UTC. ניתן להשיג ב: .wikipedia.org / גישה 16 במרץ, 2019.
- מעבדות BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. זמין ב: bd.com
- מעבדות בריטניה. Hektoen Enteric Agar. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדות דיפקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו. אגר Hektoen. ניתן להשיג ב: f-soria.es
- ידנית Difco ו- BBL, Hektoen Enteric Agar. מהדורה שנייה. ניתן להשיג ב: bd.com/europe