אגר אנדו הבינוני או אנדו הוא דיפרנציאלי, בינוני מוצק עם מידה מסוימת של תרבות סלקטיביות. הנוסחה המקורית נוצרה על ידי אנדו בשנת 1904 כדי להבדיל בין תסיסת לקטוז לבין חיידקים שאינם תוססים. בתחילה הוא תוכנן לבידוד סלפיונר טייפי, אך בהמשך מטרת המדיום פנתה לחיפוש אחר קוליפורמים.
העיקרון של אנדו אגר נותר, אך ניסוחו עבר אינספור שינויים במהלך השנים. נכון לעכשיו, המדיום מורכב מעיכול פפטי של רקמות מן החי, לקטוז, דיפוטסיום מימן פוספט, נתרן סולפיט, פוקסין בסיסי, ואגר.
ת: וירג'ין אנדו אגאר B: אנדו אגר זרעונית, באמצע האגר אתה יכול להבחין בברק המתכתי של זן E. coli. מקור: א: Strolch1983 / B: LenkaM
השימוש העיקרי במדיום קשור לבידוד ולהבדיל של חיידקים גריליים שליליים של משפחת Enterobacteriaceae ומשפחות קרובות אחרות.
במשך זמן רב הוא שימש לגילוי קוליפורמים במדגמים של מים, חלב ומזון, אולם כיום משתמשים במדיום זה על ידי אחרים עם פונקציות דומות. עם זאת, כמה מעבדות מיקרוביולוגיה משתמשות באגר זה לבידוד Enterobacteriaceae מדגימות ממקור קליני.
בָּסִיס
אגר אנדו מכיל פפטיונים המשמשים כמקור לחומצות אמינו, חנקן, פחמן ואנרגיה, הנחוצים לגידול של מיקרואורגניזמים בלתי תובעניים.
מצד שני, אופיו הסלקטיבי מעט של האגר ניתן על ידי תוספת נתרן סולפיט ופוקסין בסיסי; שני המרכיבים מעכבים את צמיחתם של מרבית חיידקי הגראם באופן חלקי או מוחלט.
האופי הדיפרנציאלי ניתן על ידי נוכחות הפחמימה המותססת, שהיא במקרה זה לקטוז ופוקסין בסיסי, המשמש גם כאינדיקטור pH.
חיידקים שליליים גראם הגדלים על אגר זה ומסוגלים להתסיס לקטוז יווצרו מושבות ורודות חזקות; בהיותו פתוגנומוני של Escherichia coli היווצרות מושבות אדומות כהות עם ברק מתכתי ירקרק. זה נובע מייצור גבוה של חומצות מתסיסה של פחמימות.
יש לציין כי המדיום סביב המושבות גם הוא הופך לצבע ורוד חזק. ואילו מוטות שליליות גראם שאינן מתוססות ללא תמצית יוצרים מושבות ורדרדות בהירות הדומות בינוניות או חסרות צבע.
הדיפלוטום מימן פוספט מאזן את החומציות של המדיום והאגר הוא המרכיב המספק את העקביות המוצקה.
הכנה
אנדו אגר
שקלו 41.5 גרם מהמדיום המיובש והמיסו בליטר מים מזוקקים. מחממים את התערובת תוך ערבוב תדיר עד לקבלת פירוק מוחלט של המדיום. יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס, בלחץ של 15 קילוגרם למשך 15 דקות.
כשמוציאים מהחיטוי, אפשר להתקרר לטמפרטורה של כ- 45-50 מעלות צלזיוס, יש לנער את התערובת להומוגניזציה לפני ההגשה. שופכים 20 מ"ל לתבשילי פטרי סטריליים.
אפשר לצלחות להתמצק, להפוך ולהאחסן בפלאקוארו או לעטוף בנייר כהה לפני האחסון במקרר. חשוב מאוד להגן על המדיום המוכן מפני אור ישיר. השיטה הטובה ביותר היא להכין את הסכום המדויק שתזדקק לו.
אם מאוחסנים במקרר, יש לאפשר לצלחות להתחמם לפני השימוש.
PH של המדיום צריך להיות בין 7.2 ל -7.6 וצבע המדיום המוכן ורוד בהיר.
גרסת M-Endo אגר
יש גרסה אחרת של אנדו אגר (m-Endo) העוקבת אחר הנוסחא של מקארתי, דלייני וגראסו, המכילה יותר תרכובות ומשתנה בצורת ההכנה.
וריאנט זה מכיל: לקטוז, טריפטוזה, עיכול אנזימטי של קזאין, עיכול אנזימטי של רקמות מן החי, נתרן כלוריד, אשלגן דיבשימי פוספט, נתרן סולפיט, תמצית שמרים, פוספט אשלגן מונובסי, פוקסין בסיסי, נתרן דוקסיציקולט, לוריל סולפט. נתרן ואגר.
במקרה זה, 51 גרם מהמדיום המיובש נשקלים ומושהים בליטר של 1 מים מזוקקים המכילים 20 מ"ל אתנול.
מחממים מעט תוך כדי בחישה עד שהמדיום מתמוסס לחלוטין. זה לא צריך להיות מחומם יתר על המידה ולא צריך להיות autoclaved. ברגע שהתערובת הומוגנית, מגישים בכלי פטרי סטריליים ומאפשרים להתמצק.
להשתמש
במדינות מסוימות הוא עדיין משמש לספירת קוליפורמים מוחלטים וצואיים בדגימות מזון ומים, במיוחד נוכחות קולי Escherichia כאינדיקטור העיקרי לזיהום צואה.
M-Endo Agar מומלצת על ידי איגוד הבריאות הציבורי האמריקני (APHA) לניטור ובקרה של תוכניות חיטוי וטיפול בשפכים, כמו גם להערכת איכות מי השתייה.
השיטה הנפוצה ביותר היא סינון קרום, לאחר שהעשירה את הדגימה במרק לוריל סולפט במשך שעתיים עד ארבע שעות.
זה יכול לשמש גם כתחליף לאגר EMB בניתוח המיקרוביולוגי של מזון ומים על ידי טכניקת המספר הסבירה ביותר (MPN), במיוחד בשלב האישור המלא כדי לאשש את נוכחותו של E. coli ממוצרי EC מעוננים.
QA
זרעי בקרה ידועים או מוסמכים נזרעים כדי להעריך את איכות אצוות האגר האנדו המוכנה.
בין הזנים שניתן להשתמש בהם למטרה זו הם: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirC1500003 ו- 1414 .
הזנים זורמים בתשישות והם מודגרים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות באווירוביוזיס.
התוצאות הצפויות הן:
- עבור coli Escherichia: מושבות אדומות חזקות, עם ברק מתכתי.
- עבור E. cloacae ו- K. pneumoniae, המושבות צריכות להיות מועקיד ורוד.
- במקרה של S. typhimurium, S. flexneri ו- P. mirabilis, המושבות בדרך כלל ורודות בהירות או חסרות צבע.
- לבסוף, צפוי להיגרם באופן חלקי על ידי E. faecalis, ולכן גידולו חייב להיות דל עם מושבות ורודות קטנות וחזקות מאוד.
מגבלות
-למדיום יש כוח סלקטיבי נמוך, לכן יתכן שחלק מהמיקרואורגניזמים החיוביים של Gram כמו Staphylococcus, Enterococcus ואפילו שמרים יכולים לצמוח.
-בוצילים אחרים שאינם שייכים למשפחת Enterobacteriaceae יכולים להתפתח במדיום זה, כמו Pseudomonas sp ו- Aeromonas sp. המאפיינים של זנים אלה הם מושבות לא סדירות חסרות צבע.
- המדיום המוכן הזה רגיש מאוד לאור, לכן חשיפה ממושכת אליו מדרדרת את מערכת החיווי, ופוגעת במדיום באופן בלתי הפיך.
מרכיבי המדיום נחשבים מסרטנים, ולכן יש להימנע ממגע ישיר.
המדיום המיובש הוא היגרוסקופי מאוד ויש לשמור אותו במיכל המקורי שלו בטמפרטורת החדר, סגור היטב ובסביבה יבשה.
הפניות
- מעבדות BD. אנדו אגר. 2013. זמין ב: bd.com
- מעבדות Neogen. מ אנדו אגר. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
- אנדו אגר. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 7 ספטמבר 2017, 08:27 UTC. 28 בפברואר 2019, 22:55. ניתן להשיג ב: en.wikipedia.
- מעבדת מרק. אנדו אגר. 2019. זמין ב: merckmillipore.com
- מעבדות גיליונות טכניים. M –ndo Agar LES. 2015. ניתן להשיג ב: liofilchem.net