אגר ה- EMB הוא מדיום סלקטיבי ודיפרנציאלי המשמש לבידוד תרבות מוצקה של חצילים שליליים גראם, ובמיוחד Enterobacteriaceae וחיידקים אחרים שליליים גראם שלא דורשים. זה ידוע גם בשם ראשי התיבות EAM, העומד כחול אאוזין-מתילן.
המדיום הזה נוצר על ידי הולט-האריס וטייג בשנת 1916. הוא מכיל פפטון, לקטוז, סוכרוז, דיפוטסיום פוספט, אגר, אוסין, כחול מתילן ומים. זה דומה מאוד ל- MacConkey Agar, במיוחד כשמשתמשים ב- EMB Agar, Modified EMB Agar, שאינה מכילה סוכרוז.
ברק מתכתי של Escherichia coli על אגר EMB מקור: Carmen Moreno González, מתוך ויקישיתוף
למעשה, כל מעבדה מחליטה אם לעבוד עם זה או אחר, מכיוון שהם ממלאים את אותה פונקציה, אם כי ביולוגית הם שונים.
יש לו אפילו אותו חיסרון כמו אגר מקוקי קלאסי מבחינת ייצור נחיל של הסוג פרוטאוס. לכן, כדי להימנע מתופעה זו, ניתן להגדיל את ריכוז האגר בעד 5%.
בָּסִיס
סֶלֶקטִיבִי
אגר EMB הוא סלקטיבי בעדינות מכיוון שהוא מכיל את צבעי האנילין (אאוזין וכחול מתילן), המשמשים כמעכבים, ומונעים את צמיחתם של מרבית חיידקי הגראם החיוביים וכמה מוטות שליליים Gram.
עם זאת, לאגר זה יש החיסרון שכמה חיידקים גראם חיוביים יכולים לעמוד בפני נוכחות החומרים המעכבים ולגדול כ מושבות פנקאט קטנות חסרות צבע, כמו Enterococcus faecalis וכמה Staphylococcus.
שמרים מסוימים יכולים גם לצמוח, כמו מתחם קנדידה אלביקנס, שייתן מושבות ורודות קטנות מאוד. Chlamydospores יכול אפילו להתפתח שמרים זה אם המדגם הוא זרע עמוק.
דִיפֵרֶנציִאָלִי
מצד שני, אגר EMB הוא גם אמצעי דיפרנציאלי, מכיוון שצבעים אלה יחד (אאוזין וכחול מתילן) הם בעלי תכונה של יצירת משקעים ב- pH חומצי, ולכן הם משמשים אינדיקטורים לייצורו.
לפיכך, חיידקים המתססקים לקטוז או סוכרוז חלשים מייצרים מושבות סגולות תוך 24 עד 48 שעות. למשל הסוגות Klebsiella, Enterobacter ו- Serratia.
אותם חיידקים שמתסיסים מאוד לקטוז, כמו Escherichia coli, או סוכרוז, כמו Yersinia enterocolitica או Proteus penneri, יוצרים משקעים ירקרקים-שחורים, ומעניקים מראה ברק מתכתי אופייני למינים אלה.
יש לציין כי אם משתמשים במינון מנוף של EMB (ללא סוכרוז), יירסי Yereinia enterocolitica ו- Proteus penneri ייצרו מושבות צלולות.
חיידקים שאינם תוססים לקטוז או סוכרוז מוזנים על ידי נוכחותם של פפונים, המספקים את חומצות האמינו והחנקן הנחוצים לצמיחת חיידקים, ומייצרים מושבות צלולות. למשל, הסוגות סלמונלה ושיגלה, בין היתר.
כמו כן, חשוב לציין כי הסוג של Acinetobacter יכול להציג מושבות כחולות לבנדר, אף על פי שאינו תוסס לקטוז או סוכרוז, אך יש לו את התכונה לקבע כחול מתילן בדופן התא שלו. זה יכול לקרות גם עם חיידקים חמצוניים אחרים.
הכנה
המדיום המיובש המקורי בצבע בז 'בהיר.
כדי להכין מדיום תרבות זה, יש לשקול 36 גרם מהמדיום המיובש ולהתלה בבקבוק המכיל ליטר מים מזוקקים.
לאחר שנתנו לתערובת לנוח במשך 5 דקות, קחו את הבקבוק למקור חום, תוך ערבוב נמרץ ומתמיד עד שהוא מתבשל ומתמוסס לחלוטין.
לאחר מכן, יש לעקר את מדיום התרבות שהומס כבר באמצעות החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.
בסוף הזמן זה מוסר מהחיטוי ונשאר לעמוד בקצרה. לאחר מכן, עדיין חמים (45-50 מעלות צלזיוס), מוגשים 15-20 מ"ל אגר בכל תבשיל פטרי סטרילי. המדיום צריך להיות כחול לקמוס.
לאחר הגשת הצלחות נותרות מעט חשופות עד שהאגר מתקרר מעט. לאחר מכן הם מכוסים ומורשים להתמצק לחלוטין. לאחר מכן הם מסודרים במחזיקי צלחות הפוכים ונשמרים במקרר (8 מעלות צלזיוס) עד לשימוש.
הליך זה מתבצע עדיף במכסה זרימה למינרית או מול מבער בונסן כדי למנוע זיהום.
חשוב לזכור כי כל בית מסחרי יציין את הסכום שיש לשקול בכדי להכין את מדיום התרבות.
ה- pH הסופי של המדיום חייב להיות 7.2 ± 0.2
יישומים
מדיום זה משמש לזרוע שתן וצואה או כל סוג של דגימה קלינית, במיוחד אם יש חשד לנוכחות של ביצי גרם שליליים לא-סוערים, כמו הביצילים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae, שצומחים היטב על מדיום זה.
חיידקים enteropathogenic של Shigella ו- Salmonella הם נבדלים על ידי מושבות חסרות צבע או מעט ענבר שלהם.
גם ציצים אחרים המתססקים ללא-לקטוז, כמו אירומונאס, פסאודומונס, Acinetobacter, גדלים.
כמו כן, מדיום זה מועיל מאוד בניתוח המיקרוביולוגי של מזון ומים, שכן הוא אידיאלי לשלב המאשר המלא לקביעת קוליפורמים, כלומר לאשש את נוכחותם של E. coli ממוצרי EC מעוננים, מ- של טכניקת המספרים הסבירה ביותר (MPN).
QA
כדי לאמת שמדיום התרבות הטרי עובד היטב, ניתן לשתול זני בקרה בכדי לשמור על מאפייני המושבות ולאמת שהם נותנים כצפוי.
לשם כך ניתן להשתמש בזני ATCC או זנים מזוהים היטב של E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa וכמה חיידקים גראם חיוביים, כמו S. aureus.
E. coli צפוי לייצר מושבות כחולות-שחורות מפותחות עם ברק מתכתי ירוק. ואילו Enterobacter aerogenes ו- Klebsiella sp צריכים לתת מושבות ריר שחור-כחלחל מפותחות.
לעומת זאת, סלמונלה טיפימוריום ושיג'לה פלקסנר, חייבים לפתח מושבות גדולות, חסרות צבע או עם צבע ענבר קל.
לבסוף הסוג Pseudomonas aeruginosa גדל כ מושבות חסרות צבע בגודל לא סדיר, ואילו חיידקים גראם חיוביים צריכים להיות מעוכבים לחלוטין או לגדול בדלילות עם מושבות קטנות מאוד.
מחשבות אחרונות
לעיתים עיקור גורם להפחתת כחול המתילן ומראה צבע כתום בינוני. כדי שהמתכלן כחול יחמצן ויחזיר את הצבע הסגול, יש לערבב אותו בעדינות עד להחזרת הצבע.
כמו כן, לאחר עיקור הצבע עשוי לזרז, ולכן יש לערבב אותו היטב לפני שמגישים את הכלים של פטרי.
הפניות
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ו- Velázquez O. 2009. טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. מהדורה שנייה הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. אפיון והפצה של זני Escherichia coli פוטנציאליים פתולוגיים מבודדים מתרנגולות ברוילרים מחוות עופות בפרו. הכמרית. וטרינר. פרו 2012 23 (2): 209-219. ניתן להשיג ב: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin ומתגרן כחול אגר. 2010. זמין בכתובת: condalab.com
- מעבדות בריטניה. לוין EMB (עם אוסין ומתילן כחול) 2011. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדות BD. BD EMB אגר (אוסין מתילן כחול אגר), שונה. 2013. זמין ב: bd.com
- Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהדורה חמישית). ארגנטינה, עריכה Panamericana SA
- פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. ביילי וסקוט אבחון מיקרוביולוגי. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה