אגר CZAPEK: רציונל, הכנה, שימושים ומגבלות - ביולוגיה - 2025

ה- Czapek (CZA) הוא מדיום מוצק סלקטיבי המיועד במיוחד לגידול חיידקים ופטריות saprophytic. הוא נוצר על ידי הבוטנאי פרידריך יוהאן פרנץ צ'אפק, ממוצא פולני, והכימאי האמריקני ארתור ויילנד דוקס; מסיבה זו אגר זה ידוע גם כבינוני צ'זפק-דוקס.

המדיום המקורי היה נוזלי, אך לאחר מכן נוסף אגר כדי להפוך אותו למדיום מוצק. בינוני צ'זפק מורכב מנותר נייטראט, דו-מימן פוספט, מגנזיום סולפט, אשלגן כלורי, סולפט ברזלי, סוכרוז, אגר ומים מזוקקים.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus מקור: A. Medmyco / B. צילום: ד"ר דייוויד מידגלי. Wikipedia.com

החומציות של אגר Czapek היא 7.3, אך יש וריאנט אליו מתווספת 10% חומצה לקטית, שהחומציות נשארה על 3.5. המדיום החומצי הזה משמש לגידול מיקרואורגניזמים אסידופיליים.

מצד שני, כמה בתים מסחריים שינו את ההרכב של אגר צ'זפק על ידי שינוי מגנזיום סולפט וביפוטסיום פוספט על ידי גליצרופוספט; שינוי זה מונע את המשקעים של מגנזיום פוספט שנצפו עם הנוסחה המקובלת להיווצר. כמו כן, יש גרסה נוספת שאליה מתווסף תמצית שמרים.

לבסוף, אגר Czapek מומלץ על ידי איגוד הבריאות הציבורי האמריקני APHA לחקר Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp ו- Penicillium sp. מינים אלה מאופיינים בכך שהם מיקרואורגניזמים סביבתיים ופתוגנים אופורטוניסטיים.

בָּסִיס

המדיום הזה מכיל סוכרוז; פחמימה זו משמשת כמקור הפחמן, בעוד נתרן ניטראט הוא מקור החנקן, אך בניגוד לתקשורת אחרת, החנקן המסופק אינו אורגני.

מסיבה זו, המדיום Czapek נחשב לסלקטיבי, מכיוון שרק מיקרואורגניזמים המסוגלים להשתמש בתרכובות אורגניות כמקור החנקן היחיד יכולים לצמוח.

כווסת האוסמולריות של המדיום הוא דו-זרמי פוספט. מצדם, מגנזיום סולפט, אשלגן כלורי וסולפט ברזלי מספקים מינרלים חיוניים לצמיחתם של מיקרואורגניזמים ספרפטיים (חיים חופשיים). פורמולה זו יוצרת משקע של מגנזיום פוספט.

לבסוף, אגר-אגר הוא התרכובת המספקת את העקביות המוצקה למדיום והמים הם הממס לכל הרכיבים.

עם נוסחת אגר Czapek שהשתנה, אין היווצרות משקעים והיא משפרת את ביצועי הצמיחה של פטריות מסוימות.

החומציות הקיצונית של Acid Czapek Agar הופכת אותה למדיום סלקטיבי יותר, ומאפשרת רק גידול של מיקרואורגניזמים אסידופיליים המסוגלים להשתמש בחנקן אורגני. בינתיים, אגר שמרים צ'צ'יק משפר את הביצועים של פטריות מסוימות.

הכנה

בינוני Czapek-Dox

שקלו 49 גרם ממדיום התרבות המיובש והמסו במים מזוקקים. החל חום עד לרתיחה. לנער את התערובת לעיתים קרובות עד להמסה מלאה.

-צצ'ק אגר טריזים

מחלקים את התערובת המומסת לצינורות ושומרים החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. בעת הוצאת החיטוי, הומוגניזציה לפני הנחת הצינורות ואפשר להתמצק.

צלחות אגר צ'צפק

החיטו את התערובת המומסת בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות והשאירו אותה להתקרר ל 50 מעלות צלזיוס, הומוגנית ושפכו 20 מ"ל לכלי פטרי סטריליים. בואו להתמצק, להפוך ולהאחסן במקרר עד לשימוש.

על ה- pH להישאר על 7.3 ± 0.2. צבעו של המדיום המיובש הוא לבן והמדיום המוכן הוא ענבר בהיר, מעט מעונן בגלל נוכחות משקעים נוהרים.

בינוני Czapek ב pH חומצי

הכינו כמתואר כבר, אך הוסיפו 10 מיליליטר של 10% חומצה לקטית סטרילית לכל ליטר בינוני שהוכן. המדיום שהשתנה Czapek צריך להיות ב pH 3.5 ± 0.2.

בינוני Czapek שונה

שקלו 45.4 גרם מהמדיום המיובש והמיסו בליטר מים. שאר התכשיר זהה לתאר לעיל. צבע המדיום המיובש הוא לבן והמדיום המוכן לבנבן. ה- pH הסופי של המדיום הוא 6.8 ± 0.2.

צ'צ'ק-שמרים בינוני

נקרא גם Czapek Extract Agar (CYA). הוא מכיל את האלמנטים של אגר הצ'אפק הקלאסי בתוספת תמצית שמרים.

להשתמש

המדיום Czapek משמש לחיפוש מיקרואורגניזמים saprophytic בדגימות של אדמה, ירקות, דגנים, אוויר, חרקים, בין היתר.

אגר Czapek ב- pH חומצי משמש לצמיחתם של מיקרואורגניזמים אסידופיליים, ואילו אגר Czapek שונה הוא שימושי במיוחד ליצירת כלמידיפורסות במינים במתחם הקנדידה אלביקנס.

לבסוף, אגר שמרים Czapek שימושי מאוד לבידוד אספרגילוס ופניציליום.

זָרוּעַ

-צ'אפק אגר

כדי לחפש Actinomycetes בקרקע, המשך כדלקמן: הדגימה מטופלת במים fenolized למשך 30 דקות ואז 1 מ"ל של ההשעיה נזרע על אגר Czapek. דגירה בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס למשך 5 עד 7 ימים.

עבור דגימות ירקות, תבואה וחרקים הם מונחים ישירות על האגר. אתה יכול גם להכין דילולים וזרע 0.1 מ"ל על פני האגר.

-גר אגר Czapek

לצורך הזריעה משתמשים בלולאה או מחט ישר, היא ספוגה בספוגית והאגר מחוסן ועושה ניקוב עד שהוא נוגע בבסיס הצלחת. דגרו במשך 24 שעות ב 28 מעלות צלזיוס ובחנו במיקרוסקופ מעל ומתחת לצלחת כדי לבדוק אם נוצרו כלמיודוריות.

טמפרטורת הדגירה וזמן

טמפרטורת הדגירה וזמן משתנים בהתאם לסוג המיקרואורגניזם שיש לבודד. בדרך כלל מודגרות צלחות למשך שבוע עד שבועיים בטמפרטורה של 20 עד 25 מעלות צלזיוס.

עם זאת, ישנם תנאים ספציפיים לזנים מסוימים. לדוגמה, מרבית המינים מהסוג אספרגילוס גדלים בצורה אופטימלית בחום של 30 מעלות צלזיוס; עם זאת A. fumigatus גדל ב 50 מעלות צלזיוס.

לגבי זמן הדגירה שבוע או שבועיים הוא תקין, עם זאת, קנדידה אלביקנס יכולה להתפתח תוך 24 עד 48 שעות על 25 מעלות צלזיוס.

מאפיינים של כמה מושבות במדיום זה

פניוסיליום אטרובנטום

הוא מתפתח ב 12 ימי דגירה על 27 מעלות צלזיוס. מושבותיהם קטנות (25 מ"מ).

למושבות מראה קטיפתי, עם גבול לבן מוגדר וגוון כחול-ירוק במרכז שהופך לאפור ככל שהוא מתיישן. הצד האחורי של המושבה כתום, מה שהופך את האמצע לאותו צבע בגלל ייצור הפיגמנט.

-אספרגילוס ניגר

זה מתפתח עם mycelium לבן עד צהוב ונבגים שחורים.

-קנדידה אלביקנס

מושבות בצבע בז 'בהיר מתפתחות. באגר Czapek שהשתנה הוא יוצר כלמיודורס.

-Aspergillus parasiticus

Mycelium ירוק כהה מתפתח 7 ימים על 25 מעלות צלזיוס.

QA

כדי להעריך את איכות המדיום התרבותי ניתן לזרוע זני בקרה מוסמכים, כגון: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

אספרגילוס ניגר מפתח mycelium לבן עד צהוב ונבגים שחורים בעוד כחמישה ימים, בעוד שקנדידה אלביקנס תצמח גידול משביע רצון תוך 24 שעות של דגירה על 25 מעלות צלזיוס; מושבות בצבע שמנת.

מגבלות

כמה מחקרים גילו כי לצורך התאוששות אקטינומיציטים, האגר עם התשואה הטובה ביותר הוא אגר דקסטרוז תפוחי אדמה, כאשר אגר Czapek במקום השני, אך להחלמת אספרגילוס ופניציליום, אגר Czapek הוא זה שמספק את אחוז ההחלמה הגבוה ביותר.

הפניות

1. Dávila M, et al. אקטינומיציטים אנטגוניסטיים כנגד פטריות פיטופתוגניות בעלות חשיבות חקלאית. הכמרת מקס. מַדָע. אגריק 2013, 4 (8): 1187-1196. ניתן להשיג ב: scielo.org.
2. לונה M, Lozada Y, חיטה Á. בידוד זני אספרגילוס ניגר, המייצר אוקרטוקסין A, בקפה ירוק מאוחסן (Coffea arabica). הכמרת מקס. מיקרופון. 2010; 32: 63-68. ניתן להשיג ב.scielo.org.
3. תורמים בוויקיפדיה. בינוני צ'זפק. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 13 בינואר, 2019, 20:30 UTC. ניתן להשיג ב: en.wikipedia.org
4. מעבדות קונדה פרונדיסה. Czapek-Dox Agar שונה. ניתן להשיג ב: condalab.com
5. מדיה תרבות מיקרוקיט. צ'זפק-דוקס אגר. ניתן לחלוק את הדיבור ב: Medioscultivo.com