חרוז אגר רגיל: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

אגר הספירה הסטנדרטית הוא מדיום תרבות מוצק, הלא סלקטיבי, המיועד הכימות של הווה עומס מיקרוביאלי האירובי בדגימות של מי שתייה, שפכים, משקאות חלב, בין מזונות אחרים. מדיום זה ידוע גם בשם אגר PCA, בגלל ראשי תיבות שלו בספירת צלחת האגר האנגלית. הוא נוצר בשנת 1953 על ידי בוכבינדר, בארי וגולדשטיין.

המדיום הסטנדרטי של אגר אגר מורכב מתמצית שמרים, טריפטין, גלוקוזה, אגר ומים מזוקקים. ניסוח זה מכיל אלמנטים תזונתיים בסיסיים המאפשרים התפתחות העומס המיקרוביאלי האירובי הנוכחי, לא תובעני.

דילולים עשרוניים לספירת CFUs בספירות אגר סטנדרטיות. מקור: קוונטין גייסמן

מכיוון שהמדיום אינו מכיל מעכבים, חיידקים יכולים לצמוח ללא מגבלות, מה שהופך אותו לאידיאלי לספירת מושבות כלליות. עם זאת, טכניקת הכימות של הרובד לא תגלה את כל החיידקים הקיימים, אלא רק את אלה המסוגלים לצמוח בתנאים הסביבתיים אליהם נתון אגר התקן הזרעי.

במובן זה, טכניקת כימות הצלחות בדרך כלל מבקשת לקבוע את כמות החיידקים מהסופית האירופית המזופילית, כלומר אלו הגדלים בטמפרטורות שבין 25 ל- 40 מעלות צלזיוס, עם טמפרטורת גידול אופטימלית של 37 מעלות צלזיוס. .

קבוצת חיידקים זו חשובה מאוד מכיוון שרוב החיידקים הפתוגניים לאדם נמצאים שם.

יש לציין שלפעמים עשוי להיות מעניין לכמת את כמות החיידקים הפסיכופיליים המצויים במזון. חיידקים אלו הם אלו הגדלים בטמפרטורות נמוכות (<20 מעלות צלזיוס) ואחראים לגרום להתפרקות המזון מהר יותר, אפילו בקירור.

כמו כן, חיידקים תרמופיליים, המתפתחים בטווח שבין 50 ° C ל- 80 מעלות צלזיוס ומעלה, יכולים להיות חשובים בסוגים מסוימים של מזון כמו מזון משומר.

הכימות המיקרוביאלי מתבטא ביחידות להרכבת מושבה (CFU) לגרם או מיליליטר מדגם.

בָּסִיס

מדיום הספירה הסטנדרטי נועד לאפשר צמיחה מוצלחת של חיידקים אירוביים שאינם קשוחים, שכן תמצית שמרים, טריפטין וגלוקוזה מספקים את החומרים התזונתיים הנחוצים לגידול מיקרוביאלי טוב.

מצד שני, למדיום יש צבע בהיר ומראה שקוף, וזו הסיבה שהוא אידיאלי להדמיה של מושבות שפותחו בשיטת הזריעה העמוקה (מזיגת צלחות).

אפשרית ספירת מושבות בשיטת הזריעה של מרית Drigalski.

כאשר העומס המיקרוביאלי גבוה, יש לבצע דילולים עשרוניים של מדגם המחקר בכדי להיות מסוגלים לספור את ה- CFUs.

יש לציין כי מדיום זה מומלץ על ידי איגוד הבריאות הציבורי האמריקני (APHA) לספירת מזופילים אירוביים.

הכנה

שוקלים 23.5 גרם מהמדיום המיובש וממיסים בליטר מים מזוקקים. כדי להתמוסס לחלוטין, יש לחמם את התערובת על ידי ערבוב תכוף עד לרתיחה. השלבים שלאחר מכן תלויים בטכניקת הזריעה בה משתמשים.

לטכניקת צלחת השופכה

מחלקים על ידי מחלק 12 עד 15 מ"ל לתוך מבחנות. לאחר מכן, יש לעקר באוטומק בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. אפשר להתמצק בצורה אנכית בצורת גוש. מאחסנים במקרר עד לשימוש.

ממיסים את התקע כשאתה מתכוון להשתמש בו. לאחר שנמס, שמור אותו באמבט מים בחום של 44-47 מעלות צלזיוס בזמן שהדגימות מוכנות.

לזריעת שטח

יש לעקר את המדיום בחיטוי במהירות 121 מעלות צלזיוס ואז להפיץ 20 מ"ל בכלי פטרי סטריליים. בואו להתמצק, להפוך ולהאחסן במקרר עד לשימוש.

צלחות טמפרטורה לפני השימוש. PH של המדיום צריך להיות 7.0 ± 0.2.

להשתמש

ספירה סטנדרטית אגר משמשת בטכניקת הספירה האירופית המזופילית במהלך ניתוח מיקרוביולוגי של מים ומזון. יש צורך בספירת המזופילים האירוביים מכיוון שהוא קובע את האיכות התברואית של הדגימה הנחקרת.

היישום של טכניקה זו (באמצעות מדיום זה) מאפשר הדמיה מקרוסקופית של מושבות מבודדות לכימותן.

טכניקת שפכת צלחת (זריעת עומק)

-תהליך

הטכניקה מורכבת מהבאים:

1) הומוגניזציה של הדגימה על מנת לחלק מחדש את החיידקים הקיימים.

2) ההשעיה הראשונית מיוצרת בבקבוק או בשקית סטרילית תוך התייחסות ליחס של 10 גר 'או 10 מיליליטר מדגם ב -90 מ"ל של חומר דילול (10 ^-1 ).

3) מההשעיה הראשונית, הדילולים העשרוניים הרלוונטיים נעשים בהתאם לסוג המדגם. דוגמה: (10 ^-2 , 10 ^-3 , 10 ^-4 ). הדילולים נעשים עם מי פפטון או חיץ פוספט.

לשם כך, קחו 1 מ"ל מההשעיה הראשונית והכניסו אותה ל -9 מ"ל של דילול, המשיכו בדילולים במידת הצורך, כעת נקח 1 מ"ל ^מהדליל 10 ^-2 וכן הלאה.

4) קח 1 מ"ל מכל דילול והניח בכלי פטרי סטריליים ריקים.

5) הוסף לכל צלחת 12 עד 15 מ"ל של אגר ספירה רגיל שנמס בעבר ונשבע בחום של 44 - 47 מעלות צלזיוס.

6) סובבו את הצלחות בעדינות כדי להפיץ את הדגימה לאורך האגר באופן שווה ולאפשר לה להתמצק.

7) הפוך את הלוחות ודגור על 37 מעלות צלזיוס באירוביוזה למשך 24 עד 48 שעות.

8) בסוף הזמן נבדקות הלוחות והמושבות נספרות בדילול המאפשר זאת. הצלחות שיש בהן בין 30 עד 300 CFU נבחרות לספירה.

ניתן לבצע ספירה ידנית או שתוכל להשתמש בציוד דלפק המושבה.

הערכים המותרים לכל מיליליטר של מדגם עשויים להשתנות ממדינה למדינה, בהתאם לתקנות לפיהן נשלטים.

- חישוב UFC

החישוב הכללי נעשה באמצעות הנוסחה הבאה:

נוסחה לחישוב כללי לכימות CFUs. מקור: המינהל הלאומי לתרופות, מזון וטכנולוגיה רפואית (ANMAT). ניתוח מיקרוביולוגי של מזון, מתודולוגיה אנליטית רשמית, מיקרואורגניזמים אינדיקטוריים. 2014 כרך 3. זמין ב: anmat.gov.ar

הביעו את התוצאות בספרה אחת או שתיים, כפלו בבסיס המתאים 10. דוגמה: אם התוצאה היא 16,545, היא מעוגלת על פי הספרה השלישית ל 17,000 והיא תבוא לידי ביטוי באופן הבא: 1.7 x 10 ⁴ . כעת, אם התוצאה הייתה 16,436, עיגול אותה ל 16,000 והביע 1.6 על 10 ⁴ .

טכניקת זריעת שטח

-תהליך

-משקפי עם 0.1 מ"ל מהדגימה הישירה אם הוא נוזלי, ההשעיה הראשונית 10 ^-1 או של הדילולים הרצופים 10 ^-2 , 10 ^-3 וכו ', במרכז צלחת אגר ספירה סטנדרטית.

מחלקים את הדגימה באופן שווה בעזרת מרית דריגלסקי או עם מוט זכוכית בצורת L. תנו לו לנוח למשך 10 דקות.

הפוך את הצלחות ודגרה אירובית ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות.

- המשך לספור את המושבות, בחר את הלוחות שנמצאים בטווח שבין 20 - 250 CFU.

- חישוב UFC

לצורך החישוב מיושם גורם הדילול שהוא ההיפוך. המספר מעוגל ל -2 ספרות משמעותיות (עיגול לפי הספרה השלישית) ומתבטא בעוצמה של בסיס 10. לדוגמא, אם 224 CFU נספרים במדגם ללא דילול (10 ^-1 ), מדווחים על 22 x 10 ¹ CFU אבל אם הנתון היה 225, מדווח על 23 x 10 ¹ CFU.

כעת, אם 199 CFU ייספרו בדילול 10 ^-3 , ידווח על 20 X 10 ⁴ CFU, אך אם 153 CFU ייספרו בדילול זהה, ידווחו 15 x 10 ⁴ CFU.

QA

ניתן להעריך את מדיום תרבות הספירה הסטנדרטית באמצעות זנים מאושרים ידועים, כגון: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 ATCC 12228, Shigella flex.

אם המדיום התרבותי נמצא בתנאים אופטימליים, צפוי צמיחה מספקת בכל המקרים, למעט L. fermentum שיכולה לקבל תשואה קבועה.

כדי להעריך את הסטריליות של מדיום התרבות, יש לדגור על צלחת אחת או שתיים מכל אצווה מוכנה (ללא חיסון) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באירוביוזה למשך 24 שעות. לאחר זמן זה, אין לצפות בצמיחה או בשינוי צבע במדיום.

מגבלות

-אל תמיס את האגר יותר מפעם אחת.

המדיום המוכן יכול להימשך עד 3 חודשים כל עוד הוא נשמר במקרר ומוגן מפני אור.

אמצעי זה אינו מתאים למיקרואורגניזמים תובעניים או אנאירוביים.

הפניות

1. המינהל הלאומי לתרופות, מזון וטכנולוגיה רפואית (ANMAT). ניתוח מיקרוביולוגי של מזון, מתודולוגיה אנליטית רשמית, מיקרואורגניזמים אינדיקטוריים. 2014 כרך 3. זמין ב: anmat.gov.ar
2. מעבדות דיסקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו, רוזן צלחות SA אגר. 2009. זמין בכתובת: http://f-soria.es
3. מעבדות קונדה פרונדיסה. שיטה סטנדרטית אגר (PCA) על פי APHA ו- ISO 4833. ניתן להשיג ב: condalab.com
4. מעבדות בריטניה. ספירת צלחות אגר. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ו- Velázquez O. 2009. טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. מהדורה שנייה הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו. ניתן להשיג ב: depa.fquim.unam