אגר ה- CLED (חסר ציסטין-לקטוז-אלקטרוליט) הוא דיפרנציאל בינוני תרבותי, המשמש לאבחון של דלקות בדרכי השתן. הרכב המדיום התרבותי מיועד לצמיחה טובה של פתוגנים בדרכי השתן והוא אידיאלי לכימות יחידות היוצרות מושבה (CFU).
המדיום התרבותי של CLED אינו סלקטיבי, מכיוון שמיקרואורגניזמים גראם שליליים ו- Gram חיובי יכולים לצמוח בו. אך זו אינה בעיה, מכיוון שרוב ה- UTI נגרם על ידי סוג אחד בלבד של מיקרואורגניזם.
אגר CLED
במקרה של זיהומים פולימיקרוביאליים, ניתן להשיג 2 או 3 חיידקים שונים, אך זה נדיר מאוד וברוב הזמן מדובר בדגימות מזוהמות.
בין חיידקי הגראם השליליים שיכולים לצמוח במדיום זה, הם הביצילים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae ובזילי enteric אחרים, האורופאתוגנים המבודדים בתדירות הגבוהה ביותר בדגימות שתן הם הבאים: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, בין היתר.
כמו כן, בין חיידקי הגראם החיוביים שיכולים לצמוח במדיום זה ניתן למנות Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp ואפילו שמרים, כמו מתחם קנדידה אלביקנס.
עם זאת, בשל ההרכב הכימי של המדיום, הוא אינו מאפשר צמיחה של כמה פתוגנים גניטורינריים תובעניים, כמו Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, בין היתר.
הרציונל של אגר
במדיום התרבות CLED יש תמצית בשר, הידרוליזה לבלב של קזאין והידרוליזה של ג'לטין כמקור אנרגיה. הם מספקים את החומרים המזינים להתפתחות של חיידקים לא תובעניים.
הוא מכיל גם ציסטין, חומצה אמינית המאפשרת צמיחה של קוליפורמים, המובחנים על ידי גודלם הקטן.
באופן דומה, הוא מכיל לקטוז כפחמימה מותססת, מסיבה זו המדיום הזה הוא דיפרנציאלי; היכולת להבחין בין החיידקים המתסיסים לבין התסיסה הלא-לקטוז.
חיידקים תוססים גורמים ל- pH של המדיום להשתנות באמצעות ייצור חומצות, פיתוח מושבות צהובות, ואילו חיידקים שאינם מתסיסים אינם מייצרים שינויים במדיום, ולכן הם לובשים צבע של האגר המקורי, ירוק.
תגובת התסיסה מתגלה הודות לנוכחותו של מחוון החומציות, אשר במדיום זה הוא כחול ברומותימול.
מצד שני, ריכוז האלקטרוליטים הנמוך של המדיום מעכב את הצמיחה הפולשנית האופיינית של הסוג פרוטאוס, המכונה אפקט ההתחממות. זה מייצר יתרון על פני מדיות אחרות, מכיוון שהוא מאפשר ספירת CFUs, כולל אם הסוג של Proteus קיים.
עם זאת, הריכוז הנמוך של האלקטרוליטים מעכב את צמיחתם של כמה מינים מהסוג שיגלה, וזהו חסרון בהשוואה לתקשורת אחרת.
הרציונל לאגר CLED (Bevis)
יש גרסה או שינוי של המדיום הזה שנעשה על ידי Bevis, ששילב פוקסין חומצה (המדד של אנדרדה) בהרכב המקורי. זה עובד בשילוב עם כחול ברומותימול כדי להבדיל בין תסיסה לבין חיידקים שאינם תוססים.
ההבדל בין המדיום הקונבנציונאלי והמשונה הוא הצבע בו מושבות מושבות. במקרה של חיידקים המותססים לקטוז, המושבות רוכשות צבע כתום-אדמדם עם הילה ורודה או אדומה, ואילו אלה שאינן תוססות הן בצבע אפור-כחלחל.
יישומים
אגר CLED משמש אך ורק לזריעת דגימות שתן. השימוש במדיום זה נפוץ במיוחד במעבדות אירופאיות ואילו באמריקה הוא פחות משמש.
איסוף הדוגמאות חייב לעמוד בפרמטרים מסוימים כדי להשיג תוצאות אמינות, כולל:
- אסור ליטול אנטיביוטיקה לפני הדגימה.
- רצוי לקחת את השתן דבר ראשון בבוקר, מכיוון שהוא מרוכז יותר, כאשר לא ניתן לקחת את הדגימה בשיטות פולשניות.
- שטפו את איברי המין היטב לפני שלקחו את הדגימה.
- השלך את זרם ההשתנה הראשון ואז הניח את המיכל.
- אוספים 25 עד 30 מ"ל שתן בכלי סטרילי שכותרתו היטב.
- קח מיד למעבדה מוקף בקרח.
- יש לעבד אותו תוך שעתיים מרגע ההנפקה או לקירורו ב -4 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות לכל היותר.
זריעת דגימות שתן
יש לדלל את דגימת השתן 1:50.
לדילול, יש לשים 0.5 מ"ל של שתן חולה ולדלל אותו עם 24.5 מ"ל תמיסה פיזיולוגית סטרילית.
מדדו 0.1 מ"ל מהשתן המדולל ומשטחי השטח בעזרת מרית drigalski על המדיום CLED. זוהי שיטת הזריעה הטובה ביותר לספירת מושבות. מסיבה זו הוא משמש בדגימות שתן, מכיוון שהתוצאות צריכות להיות מבוטאות ב- CFU / ml.
כדי לכמת את המושבות שהתקבלו, המשך באופן הבא: ספר את המושבות על הצלחת והכפיל ב 10 ואז ב 50. זה נותן לך את כמות ה- CFU / מ"ל של שתן.
פרשנות
מונה מעל 100,000 CFU / ml- מציין זיהום בדרכי השתן
מונה מתחת ל- 1000 CFU / ml- ללא זיהום
מונה בין 1000-10,000 CFU / ml - זיהום מסופק, אפשרי, דגימה חוזרת.
תְעוּדַת זֶהוּת
למושבות הגדלות על אגר CLED צריכות להיות גראם ובהתאם למאפיינים המורפוטינטורליים של המיקרואורגניזם מתבצעת תת-תרבות מסוימת.
לדוגמה, אם מדובר בבילילוס גראם שלילי, הוא ייזרע על אגר MacConkey, שם אושר התסיסה של לקטוז או לא. בנוסף, מחובר אגר מזין לביצוע בדיקת האוקסידאז.
במקרה שהגרם חושף קוקיות חיוביות גראם, ניתן לתרבית אותו על אגר מניטול מלוח ועל אגר מזין. באחרון מבוצעת בדיקת הקטלאז. לבסוף, אם נצפו שמרים, הם ייזרעו על אגר סבורוד.
מעבדות רבות נמנעות משימוש במדיום CLED ומעדיפות רק להשתמש באגר דם, MacConkey ואגר מזין על דגימות שתן.
הכנה
בבקבוק עם ליטר מים מזוקקים ממיסים 36.2 גרם אבקת אגר CLED. לאחר עמידה של חמש דקות, מחממים את האגר המשתהה, תוך ערבוב מתמיד לרתיחה למשך דקה.
ואז לעקר בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות בחיטוי. בסוף הזמן זה מוסר מהחיטוי ומניח להתקרר לטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס. בהמשך מוגשים 15-20 מ"ל בכל תבשיל פטרי סטרילי.
יש לבצע את הליך הגשת הצלחת בתוך מכסה זרימה למינרית או מול מבער בונסן כדי למנוע זיהום.
את הצלחות המוגשות נותרים להתמצקות, מסדרים במתלה הפוכה ונשמרים במקרר (2-8 מעלות צלזיוס) עד לשימוש.
ה- pH הסופי של המדיום המוכן צריך להיות 7.3 ± 0.2.
הפניות
- המלצות לאבחון מיקרוביולוגי של זיהום בדרכי השתן. צ'יל. אינפקטול. 2001; 18 (1): 57-63. ניתן להשיג ב: scielo.org.
- Panchi J. זיהוי החומר החיידקי הגורם לדלקות בדרכי השתן אצל מטופלים העוברים צנתור שלפוחית השתן. 2016. עבודות לתואר ראשון כדי להעפיל לתואר ראשון במעבדה קלינית. האוניברסיטה הטכנית של אמבטו. אקוודור.
- מעבדות בריטניה. בינוני CLED. ניתן להשיג ב: britanialab.com.
- מעבדות רנילאב. הוראות לשימוש, CLED אגר. 2013 ניתן להשיג ב: es.renylab.ind.br.
- מעבדות מעובדות. מדריך בסיסי למיקרוביולוגיה. ניתן להשיג ב: ictsl.net.
- Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. אפשרות אגר CLED בשגרה של תרבית שתן. הערכה פרוספקטיבית והשוואתית. אבחון דיסובי מיקרוביול. 1992; 15 (4): 287-90.
- גרסיה פ, פארדס פ, פרננדז דל באריו מ '(1994). מיקרוביולוגיה קלינית מעשית. אוניברסיטת קדיז, מהדורה שנייה. שירות פרסומי UCA.