אגר ציטראט סימונס הוא מדיום מוצק משמש מיקרואורגניזמים מבחן זיהוי ביוכימיים, במיוחד גרם - חיידקים שליליים. המדיום המקורי נוצר על ידי קוסר בשנת 1923.
המדיום של סיטרייט של קוסר כלל מרק המכיל נתרן פוספט, אמוניום פוספט, מונופוטסיום פוספט, מגנזיום סולפט, ונתרן ציטרט.
א. מדיום מסחרי סימונס ציטראט אגר מיובש. ב. סימונס סיטראט אגר מוכן. מקור: א. צילום שצולם על ידי MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, מ- Wikimedia Commons
כפי שניתן לראות, המקור היחיד לפחמן במדיום הוא ציטראט, וחנקן הוא אמוניום פוספט, ומשמיט חלבונים ופחמימות כמקור לאלמנטים אלה, הם נפוצים בדרך כלל בתקשורת אחרת.
לפיכך, החיידקים שנאמרים במדיום זה יכולים להתרבות רק אם הם מסוגלים לקחת את הפחמן מציטראט. הבדיקה הייתה חיובית אם הייתה עכירות במדיום, עם זאת היה לה החיסרון שעכירות לא ספציפית יכולה להתרחש.
בעיה זו נפתרה על ידי סימונס על ידי הוספת כחול ברומותימול ואגר לנוסחה המקורית של קושר. למרות שהעיקרון זהה, הוא מתפרש אחרת.
בָּסִיס
לחיידקים מסוימים יש את היכולת לשרוד בהיעדר תסיסה או ייצור חומצה לקטית, הזקוקים להשגת אנרגיה באמצעות מצעים אחרים. בבדיקה זו מקור הפחמן היחיד המוצע הוא ציטראט.
חיידקים המסוגלים לשרוד בתנאים אלה מטבוליזם במהירות את הציטרט כחלופה למסלול המסורתי, תוך שימוש במחזור החומצה הטריקארבוקסילית או במחזור התסיסה של ציטראט.
הקטבוליזם של ציטראט על ידי חיידקים כרוך במנגנון אנזימטי ללא התערבות של קו אנזים A. אנזים זה ידוע בשם ציטריקז (ציטראט אוקסלואצטט-ליאז) או ציטראט desmolase. התגובה דורשת נוכחות של קטיון דו-ערכי, שבאותו מקרה מסופק על ידי מגנזיום.
התגובה מייצרת אוקסאלואצטט ופירובט, אשר מולידים חומצות אורגניות באמצע pH pH בסיסי שנוצר על ידי שימוש במקור החנקן. חומצות אורגניות אלה משמשות כמקור פחמן המייצר פחמימות וביקרבונטים, מה שמסביר יותר את הסביבה.
מצב זריעה
יש להזריק קלות את סימונס ציטרט בינוני לתוך זנב הדגים באמצעות לולאה או מחט ישרות, ולהדגור במשך 24 שעות בחום של 35-37 מעלות. לאחר הזמן התוצאות נצפות.
הזריעה נעשית רק על פני אגר. אל תנקב.
פרשנות
אם המדיום נשאר הצבע המקורי (ירוק) ואין צמיחה נראית לעין, הבדיקה שלילית, אך אם המדיום הופך לכחול, זה מצביע על נוכחות של מוצרים אלקליין, אשר מתגלה על ידי אינדיקטור ה- pH. במקרה זה הבדיקה חיובית.
Citrate (+) ו- (-). מקור: MSc. מריאלסה גיל
זה קורה מכיוון שאם החיידק משתמש בפחמן מהציטראט, הוא גם מסוגל לקחת את החנקן מהפוספט האמוניום איתו הוא משחרר אמוניה, ובכך מייבש את המדיום.
מצד שני, אם נצפתה צמיחה של החיידקים במדיום, אך אין שינוי בצבע, יש לבחון את הבדיקה גם כחיובית, שכן אם יש צמיחה, פירוש הדבר שהחיידקים הצליחו להשתמש בציטראט כמקור פחמן, למרות שלא חל שינוי ב- pH כרגע (לפעמים זה עלול לקחת זמן).
אם יש ספק בפרשנות הצבע הסופי, ניתן להשוות אותו לצינורית ציטראט לא מחוסמת.
הכנה
שקלו 24.2 גרם מהמדיום המיובש לליטר מים. מערבבים ומניחים לו לנוח כ -5 דקות. סיים להמיס את המדיום על ידי חימום למשך דקה או שתיים, לנער לעתים קרובות.
שופכים 4 מ"ל לצינורות המבחן והחיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. כשעוזבים את החיטוי, נוטים בעזרת תומך בצורה כזו שהאגר מתמצק בצורת מקור חליל עם מעט בלוק או תחתון ופונה יותר.
ה- pH הסופי של המדיום ציטראט הוא 6.9 (צבע ירוק). מדיום זה רגיש מאוד לשינויים ב- pH.
ב- pH 6 ומטה המדיום הופך לצהוב. צבע זה לא נצפה בבדיקת החיידקים.
וב- pH 7.6 ומעלה, המדיום הופך לכחול פרוסי עמוק.
להשתמש
סימונס סיטרט אגר משמש לזיהוי של מיקרואורגניזמים מסוימים, ובמיוחד חיידקים המשתייכים למשפחת Enterobacteriaceae ובזילי תסיסה אחרים שאינם גלוקוזים.
מקור: Koneman E, אלן S, ג'נדה W, שרקנברגר P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
מחשבות אחרונות
מדיום סימונס ציטראט הוא מבחן עדין מאוד, שכן ניתן להשיג פוזיטיביות כוזבות אם נעשות טעויות מסוימות.
הטיפול שיש לנקוט בו הוא כדלקמן:
חיסון
אין לייצר חיסון חיידקי סמיך או טעון מאוד, מכיוון שהוא יכול לגרום להתפתחות של צבע צהוב דומם במקום השתילה, מבלי להשפיע על שאר המדיום, אך הוא יכול להאמין שיש צמיחה. זה לא אומר חיוביות של הבדיקה.
כמו כן, חיסון עבה יכול לייצר חיובית שגויה, מכיוון שתרכובות אורגניות שהוקמו בתוך דופן התא של חיידקים גוססים יכולות לשחרר מספיק פחמן וחנקן כדי להפוך את אינדיקטור ה- pH.
לכן האידיאל הוא לזרוע באמצעות המחט במקום ידית הפלטינה, כדי להימנע מנטילת עודפי חומר.
זָרוּעַ
מצד שני, כאשר זורעים את סוללת הבדיקות הביוכימיות לזיהוי המיקרואורגניזם המדובר, חשוב שמבחן הציטראט יהיה הראשון שנרקם, כדי להימנע מהעברת חלבונים או פחמימות ממדיום אחר.
בנסיבות אלה ניתן להשיג חיובית שגויה, מכיוון שכל אחד מהחומרים הללו שיוכנסו בטעות יעבור חילוף חומרים ויגרום לשינוי ב- pH.
דרך נוספת להימנע מהעברת חומרים היא לשרוף היטב את הלולאה ולנקוט חיסון חדש בין בדיקה אחת לאחרת.
יש להקפיד גם כשנוגעים במושבה לצורך ביצוע החיסון, שכן יש להימנע מגרירת חלק מהאגר מהתרבות שממנה מגיעים החיידקים, עקב האמור לעיל.
במובן זה, Matsen, Sherris ו- Branson ממליצים לדלל את החיסון בתמיסה פיזיולוגית לפני שנחשב את בדיקת הציטראט כדי להימנע מהעברת מקורות פחמן אחרים.
עוצמת צבע
יש לקחת בחשבון שעוצמת הצבע המיוצר כאשר הבדיקה חיובית עשויה להשתנות בהתאם לבית המסחרי.
בנוסף, ישנם מיקרואורגניזמים הבודקים חיובי לאחר 24 שעות, אך ישנם זנים אחרים הדורשים 48 שעות ומעלה כדי לייצר שינוי ב- pH.
הפניות
- מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
- פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
- מעבדות BD. סלילי BBL סימונס ציטראט אגר. 2015. זמין ב: bd.com
- מעבדות בריטניה. סימונס סיטרט אגר. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדות אבחון וולטק. סימונס סיטרט אגר. 2016. זמין בכתובת: andinamedica.com.