אגר שוקולד: בסיס, שימושים והכנה - ביולוגיה - 2025

אגר השוקולד הוא מדיום תרבות מוצק, מועשר, הלא - סלקטיבית ובלתי - הפרש. הוא משמש בעיקר לבידוד מיקרואורגניזמים התובעניים מבחינה תזונתית, אם כי כל סוג של חיידקים יכול לצמוח בו.

מסיבה זו, מועילותה עולה בעיקר בזריעת דגימות סטריליות בדרך כלל, כגון CSF ונוזל מפרקים. אמנם זה נכלל גם באמצעים שנבחרו לזריעת דגימות פולימיקרוביאליות, אך במקרים אלה יש צורך להוסיף אנטיביוטיקה המעכבת את הצומח המצורף.

אגר שוקולד עם גידול חיידקי

למדיום זה יש צבע חום אופייני הדומה מאוד לשוקולד, ומכאן שמו. התכשיר דומה מאוד לזה של אגר הדם, רק במקרה זה יש לחמם את הדם בכדי שתאי הדם האדומים יתפרקו.

הכנתו, כמו אגר דם, היא עדינה מאוד, מכיוון שהיא מזוהמת בקלות. מסיבה זו מעבדות רבות מעדיפות לרכוש מדיום זה שכבר הוכן על ידי חברות מסחריות המבטיחות את איכותו.

בָּסִיס

מדיום זה מורכב מבסיס אגר עשיר בחומרים מזינים ומדם מחומם. המוליזה של תאי דם אדומים מספקים את גורם X (הממין) וגורם V (NAD), הנחוצים לצמיחתם של כמה מיקרואורגניזמים, כמו הסוג המופילוס. זה גם שימושי מאוד לבידוד Neisserias sp.

בדומה לאגר הדם, מדיה שונה יכולה לשמש אגר בסיס בהתאם לצורך. בין אמצעי התקשורת בהם משתמשים: חליטת לב מוח ואגר סויה של טריפטיקאז, אם כי המומלצים ביותר הם אגר קולומביה, מולר הינטון, אגר GC ותאייר מרטין אגר.

כמה גרסאות של אגר שוקולד כוללות תוסף מבוצר זמין מסחרי הנקרא Isovitalex או Polivitex.

תוספי אלה מכילים ויטמין B ₁₂ , L- גלוטמין, אדנין, גואנין הידרוכלוריד, חומצה p-aminobenzoic, dinucleotide אדנין nicotinamide (NAD), תיאמין פירופוספט, חנקתי וברזל, תיאמין הידרוכלוריד, הידרוכלוריד ציסטאין, L-ציסטאין, וגלוקוז.

חשוב לציין כי אגר שוקולד מועשר יותר מאשר אגר דם, אך הוא אינו מאפשר התבוננות בדפוסי המוליזה.

יישומים

מקור: pixnio.com. מחבר:
פיט זיידל, אמנדה מור, MT, טוד פרקר, דוקטורט, אודרה מארש, USCDCP

אגר שוקולד מוכן עם אגר קולומביה

מדיום זה מכיל עיכול לבלב של קזאין ולב, עיכול פפטי של בשר, נתרן כלוריד, אגר, תמצית שמרים וקורנפלור. הוא גם עשיר בוויטמינים, מינרלים וחומצות אמינו חיוניות.

בסיס דם מחומם זה אידיאלי לבידוד חיידקים של הסוג נייסריה. מצד שני, אם נוסף תוסף לברוסלה בנוסף למדיום, ניתן לבודד את המיקרואורגניזם המוזכר. התוצאות משופרות באמצעות דם סוסים.

אגר שוקולד מוכן עם אגר בסיס GC (לגונוקוקים)

מדיום זה מכיל פפטונים, קורנפלור, חוצצים מונובאסיים ודיבאסיים, נתרן כלורי ואגר.

מרבית מצגות האגר השוקולד המוכנות מסחרית מגיעות עם בסיס זה ואינם מכילים דם מחומם, אלא תערובת סינתטית של המין ותוסף כימי של גורמי גדילה, ויטמינים, מינרלים, חומצות אמינו, גורם V, וגלוקוזה.

אגר שוקולד מוכן עם אגר מולר הינטון

הוא משמש לבדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית של מיקרואורגניזמים קשים, כמו סטרפטוקוקוס דלקת ריאות באמצעות 5% דם כבש מחומם.

הוא משמש גם לבידוד הראשוני של נייסריאס והמופילוס, אך במקרה הספציפי של בידוד המופילוס, עדיף להשתמש בדם סוס, מכיוון שהוא מקור עשיר לגורמים X ו- V.

לעומת זאת, אם הדגימה שייזרע מגיעה מאזור לא סטרילי, מומלץ להוסיף אנטיביוטיקה לעכב את הצומח הרגיל של האזור.

דוגמא לדגימות נשימה בהן יש חשד לנוכחות חיידקים של הסוג המופילוס, bacitracin משמש לעיכוב צמיחת Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ו- Saprophytic Neisserias.

במקרה של דגימות צ'אנצ'רי באיברי המין, בהם יש חשד להמופילוס דוקריי, נעשה בהצלחה שימוש באגר שוקולד שהוכן כדלקמן: מולר - אגר הינטון עם 5% דם סוס שוקולד, העשרה איזוביטלקס 1% ו -3 μg / ml וונקומיצין.

אגר שוקולד שהוכן עם תאייר מרטין אגר

מדיום זה מיוחד לבידוד Neisseria gonorrhoeae. עליו להכיל אנטיביוטיקה כדי לעכב את הצומח הנלווה. משתמשים בדם של הטלה.

הכנה

אתה אמור לראות את האינדיקציות להכנת אגר הבסיס לשימוש. הם נמצאים בגב המיכל של המדיום המיובש. בדרך כלל הם מתארים כמה עליך לשקול כדי להכין ליטר של מדיום תרבות.

את הכמות המדויקת הדרושה ניתן להכין במעבדה, זה יכול להיות פחות או יותר מליטר.

חישובים

כלל של שלושה משמש לחישוב כמה שוקלים להכנת הנפח הרצוי. דוגמא:

אם עבור ליטר 1 יש לשקול 40 גר 'והמעבדה דורשת 800 מ"ל, נאמר:

1000 מ"ל ----------- 40 גר '

800 מ"ל -----------– X

הנוסחה תהיה כדלקמן:

X = 32 גר '(כמות שיש לשקלל 800 מ"ל).

שוקלים ומתמוססים

נשקלת הכמות הנחוצה ומונחת בבקבוק עם המים.

מחממים על אש בינונית ומערבבים בעדינות בתנועות סיבוביות עד שהמדיום המיובש מתמוסס לחלוטין, ומאפשר לו לרתיחה למשך דקה.

לְעַקֵר

הבקבוק מונח בחיטוי לעיקור המדיום על 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.

אגרגט דם

כאשר עוזבים את החיטוי מותר לעמוד עד לטמפרטורת המדיום כ 56-70 מעלות צלזיוס בכדי להניח את הדם ולערבב עד שהמדיום ישחום.

אם אתה מוסיף תוספי מזון, זה הזמן לעשות זאת. לאחר מכן מערבבים ומגישים 20 מ"ל לכל תבשיל פטרי סטרילי.

יש לבצע את כל התהליך במכסה זרימה למינרית או סביב מבער הבונסן.

בואו לעמוד עד שהם מתמצקים ומאחסנים הפוכים במקרר.

דרך נוספת להכין אגר שוקולד מבלי להשתמש בדם

המדיום הבסיסי מוכן כמתואר לעיל, ההמוגלובין המיובש המסחרית מומס ומעוקר בחיטוי.

לשני הפתרונות מותר להתקרר ל 50 מעלות צלזיוס, מחוברים להוסיף את התוסף. מערבבים בתנאים אספטיים ואז מגישים בכלי פטרי סטריליים.

QA

חשוב שהדם ימוקם בטמפרטורה שצוינה, מכיוון שהוא האידיאלי להמחית את כדוריות הדם האדומות ובמקביל לשמור על גורם V, שהוא רגיש לחום.

אין בועות להישאר על פני אגר. מכל חבילה של 100 צלחות יש לדגור בתנור בחום של 37 מעלות למשך 24 שעות כדי לאמת את הסטריליות שלהן.

לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש להשתמש באגר שוקולד זמן קצר לאחר ההכנה.

יש לשמור במעבדה בקרת זני חיידקים לבדיקת יעילות המדיום הטרי לגדילת המיקרואורגניזמים החזקים העיקריים בעלי החשיבות הקלינית.

הפניות

1. גרסיה פ, פארדס פ, פרננדז דל באריו מ '(1994). מיקרוביולוגיה קלינית מעשית. אוניברסיטת קדיז, מהדורה שנייה. שירות פרסומי UCA.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. ארגנטינה. Panamericana SA העריכה
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהדורה חמישית). ארגנטינה, עריכה Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. היתכנות השימוש במדיום הבסיס לתרבות הבסיס GC-Biocen Agar במעבדה למיקרוביולוגיה. הכומר קובנה מד טרופ, 2004; 56 (3): 237-238. ניתן להשיג ב: scielo.sld.
5. תורמים בוויקיפדיה. אגר שוקולד. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 17 בדצמבר 2018, 19:54 UTC. ניתן להשיג ב: en.wikipedia.org.