אגר cetrimide או cetrimide הוא מדיום תרבות מוצק סלקטיבי המיועד הבידוד של aeruginosa Pseudomonas. זה מבוסס על הצגת ייצור של פיגמנטים אופייניים של מין זה ונוצר מהשינויים של אגר טק, שנוצר על ידי קינג, וורד ורניי.
הנוסחה המקורית הכילה מלחי מגנזיום כלוריד, אשלגן סולפט, עיכול לבלב של ג'לטין ואגר-אגר. שינוי הנוסחה כלל תוספת של צטרימיד (ציטיל טרימתיל אמוניום ברומיד) וגליצרול.
אגר Ctrimide זרע עם Pseudomonas aeruginosa מקור: BiotechMichael, מתוך ויקימדיה Commons
אגר צטרימיד שימושי למחקר מיקרוביולוגי של דגימות בהן יש חשד לנוכחות Pseudomonas aeruginosa. יש לציין כי חיידק זה חשוב מאין כמותו, מכיוון שלמרות שהוא חלק מהמיקרוביוטה הסביבתית הרגילה, הוא מתנהג לעתים קרובות כפתוגן אופורטוניסטי.
מסיבה זו, אחת הבעיות השכיחות ביותר הנגרמות על ידי נבט זה היא זיהומים נוזוקומיאלים, כלומר אלה המופיעים בסביבת בית החולים, ותוקפים חולים הסובלים ממערכת חיסון מדוכאת.
מצד שני, בגלל הזיקה שיש למיקרואורגניזם זה עם לחות, יעדי הזיהום הפגיעים ביותר הם: ציוד נשימה בסיוע, תרופות, nebulizers, מקורות מים, מזגנים, חומרי חיטוי, פתרונות סבון, תמיסות להזרקה, פצעים פתוחים צנתרים, צינורות שתן, בין היתר.
במובן זה, אגר ציטרימיד שימושי לביצוע בקרות ותרבויות מיקרוביולוגיות לאלמנטים שהוזכרו קודם.
בָּסִיס
אגר צטרימיד מבוסס על יכולתו של המדיום לקדם את צמיחתם של P. aeruginosa, לעורר את ייצור הפיגמנטים שלו ובתורם מעכב את צמיחתם של מיקרואורגניזמים אחרים.
תכונות אלה נובעות מתפקודו של כל אחד ממרכיביו. הפפטין הג'לטין המצוי משמש כמקור לחנקן, ויטמינים ומינרלים. גליצרול או גליצרין פועלים כמקור פחמן.
ציטרימיד (ציטיל טרימתיל אמוניום ברומיד) מצידו הוא החומר המעכב את צמיחתם של חיידקים שאינם P. aeruginosa, כולל מינים אחרים השייכים לאותו סוג.
עיכוב מתרחש מכיוון שקטרמיד פועל כחומר ניקוי קטיוני, ומצליח לערער את יציבות קרום הפלזמה של מרבית החיידקים, למעט P. aeruginosa וכמה אחרים שמצליחים לשרוד.
מצד שני, הוא מכיל מגנזיום כלוריד ואשלגן סולפט. תרכובות אלה מעוררות ביטוי פנוטיפי הקשור ליכולתה של Pseudomonas aeruginosa לייצר פיגמנטים שונים, כולל: פיוציאנין, פיוברדין, פיורובין, פיומלנין ופלואורסצין. לבסוף, הוא מכיל אגר-אגר, מה שמקנה לו עקביות יציבה.
פרשנות
הפרשנות של הצמיחה המתקבלת באגר זה מתבצעת באופן הבא:
התבוננות במושבות עגולות וחלקות עם קצוות קבועים, עם ייצור של פיגמנטים כחולים-ירקרקים, ירוקים, חומים או אדמדמים, בתוספת פליטת ריח פירותי (aminoacetophenone), היא תוצאה חזקה של נוכחותו של חיידק זה במדגם האמור.
מצד שני, התבוננות בפיגמנט צהוב-ירקרק בהיר על המושבות מעידה על P. aeruginosa כאשר הצלחת נחשפת לאור אולטרה סגול.
פלואורסצנט של מושבות P. aeruginosa על אגר צטרימיד תחת אור אולטרה סגול.
יש לציין כי כל צבע שנצפה נובע מייצור של פיגמנט ספציפי. הפיגמנט הכחול-ירוק תואם לייצור פיוציאנין, הירוק לפיוורדין, האדמדם לפיורובין, החום לפיומלנין ועם הקרינה הצהובה-ירוקה הבהירה תחת אור UV לפלואורסצ'ין.
הכנה
שוקלים 43 גרם מהמדיום המיובש וממיסים במים מזוקקים. הוסף 10 מ"ל גליצרול. קח את התערובת למקור חום. תנו לזה להרתיח מספר דקות עד להמסה מלאה.
החיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות. בואו לעמוד ולהגיש בכלי פטרי סטריליים כשהטמפרטורה נע סביב 50 מעלות צלזיוס.
אפשר להתמצק, להפוך, להזמין בפלאקרות ולאחסן במקרר עד לשימוש. יש להוציא צלחות אגר צטרימיד מהמקרר מראש לזריעה ולאפשר להגיע לטמפרטורת החדר.
ה- pH הסופי של המדיום צריך להיות 7.2 ± 0.2.
צבע המדיום המיובש בצבע בז 'והתכשיר לבן אטום.
יישומים
ניתן להזרע על כל אגר דגימות בהן קיימת חשד לנוכחות Pseudomonas aeruginosa. לכן זה שימושי בכל תחומי המיקרוביולוגיה (סביבתי, תעשייתי, קליני, מים ומזון).
ישנה חשיבות רבה לניתוח סביבות בית חולים ובכך להיות מסוגלים ליישם אמצעים מתקנים, מכיוון שמיקרואורגניזם זה מגיע לחולים באמצעות ציוד מזוהם, תרופות, פתרונות וציוד המשמש את המטופל.
באופן זה, המיקרואורגניזם יכול להדביק את דרכי הנשימה התחתונות, דרכי השתן ואת פצעיהם של חולים מדוכאי חיסון.
ניתן לבצע ספירת מושבות של P. aeruginosa גם בבדיקות גבול מיקרוביאליות.
זָרוּעַ
אגר Ctrimide יכול לשמש כתרבות ראשונית. הפלטה מחוסמת על אחת מקצותיה ומשם היא מופצת על ידי תשישות לשאר הצלחת. ניתן להזריק דגימות נוזליות עם מרית drigalski.
הצלחות מודגרות בצורה אירובית ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות של דגירה.
מגבלות
-אחוז קטן מזני Pseudomonas aeruginosas אינם מייצרים פיוציאנין, כך שניתן לפרש שלילי שווא.
-מינים מסוימים של Pseudomonas בעלי חשיבות קלינית מעוכבים במדיום זה.
- על אף התבוננות במאפיינים המתוארים ל- Pseudomonas aeruginosa, עליהם לאשש בדיקות זיהוי נוספות. מבחן שאסור לפספס הוא מבחן האוקסידאז, עליו לתת חיובי.
- Enterobacteriaceae מסוימים יכולים לצמוח במדיום זה ולפתח פיגמנט צהוב, אך הוא נבדל מ Pseudomonas aeruginosa בכך שכאשר הצלחת נתונה לאור אולטרה סגול אין פלואורסצנטי.
- Serratia marcescens מצליח להתפתח ולייצר פיגמנט ורוד.
אם הלוחות הזרעים באגר צטרימיד נחשפים זמן מה בטמפרטורת החדר, זני P. aeruginosa יכולים לאבד את הקרינה שנצפתה תחת אור אולטרה סגול, אולם הנכס מתאושש אם הם מודגרים שוב ב 37 מעלות צלזיוס.
QA
כדי לנתח את הביצועים הטובים של אגר צטרמיד, ניתן להשתמש בזני בקרה כגון: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 ו- Staphylococcus aureus ATCC 25923.
התוצאות הצפויות הן:
- צמיחה טובה עבור P. aeruginosa, עם פיגמנט כחול-ירוק ופלואורסצ'ין חיובי.
- ס. מלטופיליה ו- S. aureus יהיו מעוכבים באופן חלקי לחלוטין.
- קולי של Escherichia צפוי להיות מעוכב לחלוטין.
הפניות
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. אפיון פנוטיפי וסרולוגי של מבודדים קליניים של Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- מעבדות קונדה פרונדיסה. בסיס אגר צטרימיד. 2014. זמין בכתובת: condalab.com
- מעבדות בריטניה. אגר צטרימיד. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
- מעבדות BD. אגר BD Pseudosel (אגר Cetrimide). 2013. זמין ב: bd.com
- מעבדת פרנסיסקו סוריה מלגיזו, אגר Cetrimide. 2009. זמין בכתובת: http://f-soria.es