אגר מרה אסקולין: רציונל, הכנה ושימושים - ביולוגיה - 2025

מרת esculin אגר הוא סלקטיבית ותרבות מוצקה בינוני הפרש. היא משמשת כבדיקת אבחון לקביעת יכולתו של מיקרואורגניזם מסוים לגדול במדיום המכיל מרה וגם לפרק את הגלוקוזיד אסקולין ל esculetin וגלוקוזה.

בדיקת אבחון זו משמשת כדי להבדיל מינים מהסוג סטרפטוקוקוס השייכים לקבוצה D (מרה אסקולין חיובית), מקבוצות אחרות של סטרפטוקוקוס המגיבות לרעה למבחן זה.

צלחת אגר מרה אסקולין, זרעי זן Enterococcus (מבחן חיובי). מקור: לא סופק מחבר קריא במכונה. Philippinjl הניח (בהתבסס על טענות בזכויות יוצרים).

יש לציין כי חלק מסטרפטוקוקוס מקבוצת הווירידאנים יכול לבצע הידרוליזה של אסקולין, אך אינם מסוגלים לצמוח בנוכחות מרה בריכוז של 40%, ולכן במדיום זה התגובה לקבוצה זו שלילית.

מצד שני, המדיום אסקולין של מרה מועיל גם לאבחון של ליסטריה מונוציטוגנים או מינים Aerococcus sp, מכיוון שמיקרו-אורגניזמים אלו חיוביים לאסכלין.

אגר מרה אסקולין מורכב מפפטון, תמצית בשר, מרה שור, אסקולין, ברזל ציטרט, אגר ומים מזוקקים. חלק מהבתים המסחריים כוללים נתרן אזיד בהרכב המדיום.

ניתן להכין את המדיום במעבדה אם יש לכם את כל התרכובות בנפרד או שניתן להכין אותו מהמדיום המיובש המסחרי.

בָּסִיס

המדיום אסקולין מרה מכיל פפונים ותמצית בשר, שתי התרכובות מספקות את חומרי התזונה הדרושים לצמיחת מיקרואורגניזמים.

הוא מכיל גם אסקולין; תרכובת זו הינה גליקוזיד שנוצר על ידי איחוד של monosaccharide פשוט (גלוקוז) עם תרכובת הנקראת 6,7-dihydroxycoumarin או esculetin (aglucone), המקושרים על ידי קשר אצטלי או גלוקוזיד.

הבדיקה מבוססת על הצגת האם החיידק מסוגל להידרזל את האסקולין. אם זה קורה, האסקולין מתפרק ל esculetin וגלוקוזה. אסקולינה מגיבה עם הברזל הקיים במדיום ויוצרת תרכובת חומה כהה וכמעט שחורה.

משמעות הדבר היא כי ציטראט הברזל משמש כמפתח תגובה. מאפיין זה הופך את Bile Esculin Agar למדיום דיפרנציאלי.

מרה מצידה, מרה מעכבת המונעת את צמיחתם של מיקרואורגניזמים מסוימים, לכן החיידק, לפני פיצול האסקולין, חייב להיות מסוגל לצמוח בנוכחות מרה. לכן מדיום זה נחשב לסלקטיבי.

החיידקים שיכולים להתפתח בסביבה זו הם בעיקר אלה החיים בסביבת המעיים.

במובן זה, כמה חברות מסחריות מוסיפות נתרן אזיד למדיום כדי לעכב עוד יותר את צמיחתם של חצילים שליליים גראם גרפיים, מה שמגדיל את הסלקטיביות של המדיום לגידול סטרפטוקוקוס.

לבסוף, האגר מעניק את העקביות המוצקה למדיום והמים הם הממס של התרכובות.

הכנה

הכנה ביתית של אגר אסקולין מרה

לשקול:

5 גרם פפטונים

3 גרם תמצית בשר

40 גרם מרה בקר

1 גרם אסקולין

0.5 גרם ציטרט ברזל

15 גרם אגר

1000 מ"ל מים מזוקקים

במקרה של הוספת נתרן אזיד, שוקלים 0.25 גרם לליטר ומתווספים לתערובת.

ממיסים את הרכיבים בליטר המים המזוקקים, מחממים עד להמסה מלאה של התרכובות. מחלקים 5 מ"ל לתוך צינורות מבחן כובע בורג בגודל 16 x 125 מ"מ. החיטוי החום בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס, 15 קילוגרם לחץ למשך 15 דקות.

הוצא מה החיטוי והטה את הצינורות על תומך, כך שהאגר יתמצק במקור חליל רחב.

מאחסנים במקרר עד לשימוש. מביאים לטמפרטורת החדר לפני הזריעה.

ניתן להכין גם צלחות אגר מרה אסקולין; במקרה זה, כל התערובת מוחתמת אוטומטית בבקבוק ומחולקת לאחר מכן בכלי פטרי סטריליים. תנו להם להתמצק ולאחסן במקרר.

PH של המדיום חייב להיות 6.6 ± 0.2.

הכנת אגר אסלולין מרה מדיום מסחרי

שקלו את הכמות שצוינה על ידי התוסף. זה יכול להשתנות מבית עסק אחד למשנהו. לאחר מכן, התקדם לאותו הנוהל שהוסבר לעיל.

PH של המדיום צריך להיות 6.6 ± 0.2. צבע המדיום המיובש הוא בז 'בהיר והמדיום המוכן הוא ענבר כהה.

מדיום אסקולין מרה מסחרי. מקור: תמונה שצולמה על ידי הסופר MSc. מריאלסה גיל.

יישומים

המדיום אסקולין מרה משמש בעיקר כדי להבדיל בין סטרפטוקוקוס קבוצה D (מרה אסקולין חיובית), משאר קבוצות הסטרפטוקוקוס (שלילית מרה אשלטין).

שילוב מבחן צמיחת המרק ההיפרסאלי עם מבחן האסקולין של המרה יכול לזהות קבוצה מיוחדת של סטרפטוקוקוס מקבוצה D הנקראת Enterococcus.

קבוצה מיוחדת זו של סטרפטוקוקוס שייכת לקבוצה D של הסוג האמור לעיל והם מסוגלים להידרזל אסקולין בנוכחות מרה כמו שאר שאר חברי הקבוצה D, אך הם גם מסוגלים להתפתח במדיום מופעל (BHI עם כלוריד של 6.5% נתרן), מאפיין שעושה את ההבדל.

לפיכך, סטרפטוקוקים הממצים הידרוליזה של מרה אסקולין אך אינם גדלים במרק מופרד נקראים non-enterococci Group D סטרפטוקוקים.

זָרוּעַ

מחסנים את המדיום רצוי ממרק טוד-יואיט טהור 24 שעות.

מוסיפים 2 טיפות על פני המדיום בעזרת פיפטה של ​​פסטר ומורחים במדיום עם לולאת פלטינה.

דגירה על 35 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות, בזמן שמשך זמן הדגירה מתקיים, ניתן לפקח עליה כדי לראות אם יש תגובה חיובית. אם בסוף הזמן התגובה נשארת שלילית, ניתן לדגור אותה עד 72 שעות.

פרשנות

תגובה חיובית : הופעת צבע חום כהה, כמעט שחור במקור חליל (במקרה של בדיקת הצינור) או השחרת האגר סביב המושבות (במקרה של בדיקת הצלחת).

תגובה שלילית : לא מתרחשת השחרת המדיום או שיש מראה שחור בפחות ממחצית הצינור לאחר 72 שעות של דגירה. לעומת זאת, יש לראות בגידול חיידקי במדיום ללא הופעת הצבע השחור כמבחן שלילי.

QA

כדי להעריך את איכות המדיום, זן Enterococcus faecalis ATCC 29212 חייב להיות זמין כבקרה חיובית וזן סטרפטוקוקוס שאינו שייך לקבוצה D כבקרה שלילית.

מגבלות

-מדיה שאינה מכילה נתרן אזיד מאפשרת גידול של חצילים שליליים גראם. חלקם יכולים להשחיר את האמצע.

- חלק מהבתים המסחריים מוסיפים ריכוז נמוך של מרה (10%) ומסיבה זו סטרפטוקוקוס שאינו שייך לקבוצה D יכול להתפתח במדיום ולהביא הידרוליזה אסקולין, מה שעלול ליצור טעויות בפרשנות.

הפניות

1. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
2. פורבס B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי וסקוט. 12 ed. עריכה Panamericana SA ארגנטינה.
3. מק פאדין ג'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית Panamericana העריכה. בואנוס איירס. ארגנטינה.
4. מעבדה בריטניה. מרה אסקולין עם אגר אזיד. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 22 אוגוסט 2017, 17:30 UTC. 22 באפריל 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. מעבדות Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. זמין ב: bd.com
7. מעבדות Neogen. אגר מרה אסקולין. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com