אגר biggy היא סלקטיבית בינונית מוצקה ותרבות הפרש. הוא נועד לבודד ולסייע בזיהוי המינים העיקריים של קנדידה. שמו BIGGY מקורו בראשי תיבות באנגלית Bismuth Glucose Glycine Yeast.
הנוסחה המקורית נוצרה על ידי ניקרסון, וזו הסיבה שמדיום זה ידוע גם בשם אגר של ניקרסון. נכון לעכשיו הוא מורכב מתמצית שמרים, גליצין, דקסטרוז, אמוניום ציטרט, ביסמוט ציטרט, נתרן סולפיט ואגר.
ייצוג גרפי של אגר BIGGY. מקור: Flickr.com
אגר BIGGY מנוסח לבידול בין המינים קומפלקס C. albicans, C. tropis, C. krusei ו- C. kefyr, אך גם מינים אחרים צומחים כמו Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum ו- Saccharomyces cerevisiae.
יש לו רגישות וספציפיות טובה, עם זאת, בהשוואה לתקשורת אחרת עם פונקציה דומה, היא נמצאת במקום השני, כאשר CHROMagar עולה עליו. מסיבה זו מעבדות רבות מעדיפות את זו האחרונה, אם כי היא יקרה בהרבה.
צריך להיות ברור כי השימוש באגר BIGGY, כמו גם באמצעים דומים אחרים, מסייע בזיהוי חזקה מהיר, אך מעולם לא מאשר. לכן חייבים להיות זמינים שיטות זיהוי נוספות; לדוגמה, מערכות זיהוי Vitek 32 ו- API 20.
בָּסִיס
אגר BiGGY נחשב למדיום סלקטיבי באופן חלקי לבידוד שמרים, בעיקר של הסוג קנדידה, אם כי סוגים אחרים יכולים לצמוח.
זהו גם מדיום דיפרנציאלי מכיוון שתלוי במין המעורב, ייצפו מאפיינים שונים מבחינת המראה, הצבע, הצורה והגודל. זה נחשב למדיום כרומוגני, בגלל התפתחות של צבעים שונים במושבות.
צבע מושבות השמרים נובע מהימצאותו של ביסמוט סולפיט באגר. ניקרסון הבין כי שמרים מהסוג קנדידה מבצעים הפחתה חוץ-תאי של ביסמוט סולפיט, והופכים אותו ליסמיסט סולפיד (חומר שחור בלתי מסיס). התוצאה היא מושבות חום בהיר עד שחור.
אגר זה מכיל תמצית שמרים ודקסטרוז, המספקים את המקור לחומרים מזינים ואנרגיה בסיסיים להתפתחות שמרים. גליצין הוא מעורר צמיחת שמרים, בעוד שהוא מעכב את צמיחתם של חיידקים מסוימים.
באותה מובן זה אמוניום וביסמוט ציטרט, כמו גם נתרן סולפיט, משמשים כמעכבי צמיחת חיידקים. אגר הוא הסוכן המעניק עקביות בינונית ויציבה.
הכנה
שקלו 45 גר 'מדיום התרבות המיובש והמסו בליטר מים מזוקקים. מנערים ומחממים את התערובת, רותחים כדקה עד להמסה מלאה. מדיום תרבות זה אינו ניתן להחלה ניתנת להחלפה.
לאחר הקירור לכ- 45 מעלות צלזיוס באמבט מים, שפכו 20 מ"ל על כלים פטרי סטריליים.
צבעו של המדיום המיובש הוא אפור צהבהב ומוכן הוא ג'ל לבן צהבהב, בו ניתן לראות משקעים קלים של נדידה.
על ה- pH להיות 6.8 ± 0.2.
יש לאחסן את המדיום המוכן במקרר (4 מעלות צלזיוס) ולהגן עליו מפני אור. מכיוון שמדובר במדיום שלא ניתן להחטיפו אוטומטית, יש להשתמש בו בהקדם האפשרי. מומלץ להשתמש בו לפני 3 ימים לאחר הכנתו.
להשתמש
הפלטות מודגרות בטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס) למשך 24, 48 ו 72 שעות, וניתן להאריך את זמן הדגירה עד 5 ימים.
כל מין של קנדידה מפתח מאפיינים מסוימים הגורמים להם להבדיל זה מזה. יצרני המדיום מתארים את המאפיינים הבאים לכל מין:
-קומנדה אלביקנס מורכבת: מתפתח על אגר זה כ מושבות חלקות, עגולות, חומות או שחורות, עם גבול מיסליאלי קל. למעט שהצבע הכהה אינו מתפזר לאמצע.
-קנדידה טרופוליס: מושבות בהירות, קטנות וחומות כהות עם מרכז שחור וגבול mycelial קל. הצבע הכהה מתפזר לכיוון האמצע, מאפיין האופייני למין זה, לאחר שהודגם במשך 72 שעות.
-קנדידה קרוזיי מפתחת מושבות גדולות, שטוחות ומחוספסות למראה עם גבול חום עד שחור.
-קנדידה parakrusei: מושבות בינוניות, רוב הזמן גסות, שטוחות. הצבע יכול להשתנות מחום כהה-אדמדם בהיר לחום-אדמדם בהיר. בגבול המושבות יש mycelium נרחב וצהבהב.
-קנדידה stellatoidea: מפתחת מושבות בינוניות ושטוחות, חום כהה, כמעט שחור. התפתחות המיזיאלית נדירה מאוד.
מחקר שנערך על ידי יוססוי ומרול בשנת 2003 הראה כי למדיום ה- CHROMagar יש רגישות וספציפיות טובה יותר להבחנה וזיהוי של מיני קנדידה שונים מאשר אגר BIGGY.
QA
לבקרת הסטריליות, צלחות לא מחוסמות מודגרות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, בחושך למשך 24 עד 48 שעות, צפוי כי אין צמיחה מכל סוג שהוא, או שינוי צבע.
זני ה- ATCC המומלצים לבקרת איכות המדיום הם:
קנדידה אלביקנס ATCC 60193 מתחם, קנדידה גלבראטה ATCC 2001, קנדידה קרוזיי ATCC 34135. בכולם צפוי צמיחה כמתואר לעיל.
ניתן להשתמש גם בזנים הבאים:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ו- Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. בשניים הראשונים צפויה עיכוב מוחלט, אך במקרה של גידול חלקי המושבות יהיו בצבע שמנת.
במקרה של ש. Aureus, זה צפוי להיות מעוכב לחלוטין, אך אם הוא גדל באופן חלקי, מושבותיו לבנות.
מגבלות
ישנם חיידקים המסוגלים לצמוח במדיום זה ויכולים אפילו להחשיך בצבעם, המדמים מושבת קנדידה, אך כאשר מורחים את המושבה ומתבוננים בה תחת מיקרוסקופ, היא מושלכת בקלות.
טבלה: מאפיינים של מושבות של כמה שמרים על אגר BIGGY על פי עבודתם של Yücesoy M ו- Marol S.
מקור: Yücesoy M, Marol S. ביצוע של קנדידה CHROMAGAR ואגר BIGGY לזיהוי מיני שמרים. אן קלין מיקרוביול אנטימיקרוב. 2003; 2 (8): 1-7
הפניות
- Yücesoy M, Marol S. ביצוע של קנדידה CHROMAGAR ואגר BIGGY לזיהוי מיני שמרים. אן קלין מיקרוביול אנטימיקרוב. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. גיליון נתונים טכניים BIGGY Agar. ניתן להשיג ב: mcdlab.net/
- מעבדה ניוגן. BIGGY אגר. ניתן להשיג ב: foodafety.neogen.com
- מעבדות קונדה פרונדיסה. אגר BIGGY. ניתן להשיג ב: condalab.com
- מעבדות BD. BD BiGGY Agar (Bism BiGGY Agar). 2011. זמין ב: bd.com