אגר פארקר ביירד: יסוד, הכנה ושימוש - ביולוגיה - 2025

אגר ביירד פארקר הוא סלקטיבי בינוני מוצק ותרבות הפרש. הוא נוצר בשנת 1962 לצורך איתור וספירה של סטפילוקוקים חיוביים לקרישה (Staphylococcus aureus).

זה מורכב מהידרוליזה של לבלב של קזאין, תמצית בשר, תמצית שמרים, ליתיום כלוריד, גליצין, נתרן פירובאט, אשלגן טלוריט, תחליב אגר וחלמון ביצה.

מושבות Staphylococcus aureus אופייניות באגר Baird Parker. מקור: דאיזי ג'ון

Baird Parker Agar מבוסס על יכולתו של S. aureus להפחית טלוריט ולייצר לציטינאז. שתי המאפיינים מייצרים מושבה עם מאפיינים ספציפיים למין זה. לכן, הוא יעיל ביותר בזיהוי מיקרואורגניזם זה.

המושבות הטיפוסיות של ש.אוראוס הן שחורות או אפורות כהות, עם גבול חסר צבע והילה בהירה שמקיפה אותן, ומבדילה אותן ממיקרואורגניזמים אחרים. ניתן למצוא את הפתוגן הזה בדגימות קליניות, במים, בקוסמטיקה ובמאכלים גולמיים או מבושלים.

לאבחון או לאיתורו יש חשיבות עליונה, בשל מגוון הפתולוגיות שהוא מייצר, כמו הרעלת מזון, תסמונת עור מקולפת, תסמונת הלם רעיל, מורסות, דלקת קרום המוח, ספיגה, אנדוקרדיטיס, בין היתר.

בָּסִיס

כוח מזין

הידרוליזה של לבלב של קזאין, תמצית בשר ותמצית שמרים הם המקורות לחומרים מזינים, ויטמינים ומינרלים הנחוצים להתפתחות כללית של חיידקים, ואילו פירובט וגליצין הם תרכובות המעדיפות את הגידול הספציפי של Staphylococcus aureus.

סֶלֶקטִיבִי

Baird Parker Agar הוא סלקטיבי מכיוון שהוא מכיל חומרים המעכבים את צמיחת הפלורה המלווה, תוך קידום התפתחות של S. aureus. התרכובות המעכבות הן ליתיום כלוריד ואשלגן טלוריט.

דִיפֵרֶנציִאָלִי

מדיום זה מאפשר להבדיל את ש 'אאוראוס משאר הסטפילוקוקים השליליים. ל- S. aureus יש את היכולת להפחית טלוריט לטלוריום שחור מתכתי, ויוצרים מושבות שחורות או אפורות כהות.

באופן דומה חלמון הביצה מספק את המצעים כדי להדגים את נוכחותם של האנזים לציטינאז וליפאז. S. aureus חיובי לציטינאז ולכן נצפתה הילה ברורה סביב המושבה, מה שמעיד על כך שהליציטין היה הידרוליזה.

במובן זה המראה על אגר זה של מושבות מבריקות בשחור או אפור כהה עם הילה בהירה סביבן מעיד על נוכחותה של ש.אוראוס.

אם נוצר אזור משקעים זה מעיד על פעילות ליפאז. כמה זנים של S. aureus הם ליפאז חיוביים ואחרים שליליים.

במקרה ש- aureus חיובי ליפאז, ייצפה אזור אטום סביב המושבה השחורה או האפורה כהה, ואז הילה בהירה כתוצאה מפעולת הציטינאז.

מושבות של חיידקים שאינן S. aureus המסוגלות לצמוח על מדיום זה, יפתחו מושבות חסרות צבע או חום ללא הילה מסביב.

ניתן לראות מושבות שחורות לא טיפוסיות גם עם או בלי גבול חסר צבע, אך ללא הילה קלה. אין לקחת בחשבון מושבות אלה, הן אינן תואמות את ש.אוראוס.

הכנה

תחליב חלמון

קחו ביצת עוף טרייה, שטפו אותה היטב והכניסו לאלכוהול 70% למשך שעתיים עד שלוש. לאחר מכן נפתחת הביצה בצורה אספטית והלבן מופרד בזהירות מהחלמון. לאחר מכן נלקחים 50 מ"ל החלמון ונערבבים עם 50 מ"ל תמיסה פיזיולוגית סטרילית.

אשלגן טלוריט 1% w / v

חלק מהבתים המסחריים מוכרים 1% אשלגן אשלגן מוכן לשימוש. הוא מתווסף למדיום לפני שהמדיום מתמצק.

כדי להכין פתרון זה במעבדה, שוקלים 1.0 גרם של אשלגן טלוריט ומומסים בחלק אחד של מים. בהמשך מסתיימת כמות המים עד שמגיעים ל 100 מ"ל. יש לעקר את התמיסה בשיטת הסינון.

הכנת מדיום תרבות

שוקלים 60 גרם מהמדיום המיובש וממיסים אותו 940 מ"ל מים מזוקקים. תנו לתערובת לשבת כ 5-10 דקות.

החל חום על ידי ערבוב המדיום לעיתים קרובות כדי לשפר את תהליך הפירוק. מביאים לרתיחה לרגע. יש לעקר במערכת החיטוי בטמפרטורה של 121 מעלות למשך 15 דקות.

בואו לעמוד עד שהוא מגיע לטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס והוסיפו 50 מ"ל מתחליב החלמון ו -10 מ"ל טורטור של 1%. מערבבים היטב ושופכים 15-20 מ"ל על כלים פטרי סטריליים.

אפשר להתמצק, להזמין הפוך בכוסות ולאחסן במקרר עד לשימוש.

ה- pH הסופי של המדיום המוכן חייב להיות 6.8 ± 0.2.

לפני שתשתה מדגם, חכה שהצלחת תגיע לטמפרטורת החדר. זרע את הלוחות על ידי פסים או על ידי זריעת משטח עם מרית דריגלסקי.

צבע המדיום המיובש הוא שזוף בהיר וצבע המדיום המוכן הוא ענבר בהיר.

להשתמש

דגימות קליניות

הדגימות הקליניות נזרעות ישירות, ומשחררות חלק מהחומר בקצה האחד של הצלחת, ומשם מפוסרות על ידי תשישות. דגירה במשך 24 עד 48 שעות בחום של 35-37 מעלות.

דגימות מזון

שקלו 10 גר 'מדגימת המזון והומוגנו ב 90 מ"ל מים 0.1% של פפטון. משם מכינים דילולים במידת הצורך. מחסנים את הצלחות בשילוב עם 0.3 מ"ל מהפתרונות המוכנים, וזרעים על פני השטח בעזרת מרית דריגלסקי. דגירה במשך 24 עד 48 שעות בחום של 35-37 מעלות.

מתודולוגיה זו מאפשרת לספור את המושבות האופייניות המתקבלות והיא אידיאלית כאשר יש חשד לנוכחות של S. aureus מעל 10 CFU לכל גרם / מ"ל ​​מדגם.

אם יש חשד כי כמות S. aureus קטנה או שיש הרבה פלורה נלווית, מומלץ להעשיר את הדגימה במרק סויה טריפטיקאז עם 10% NaCl ו -1% נתרן פירובט. זה יקדם את צמיחתה של S. aureus ויעכב את התפתחות הפלורה המלווה. צינורות עכורים נזרעים באגר של ביירד פרקר.

דגימות מים

במערכת סינון ואקום מעוקרת מסננים 100 מ"ל של מי לימוד. לאחר מכן מסירים את הממברנה המיקרופורית 0.4 מיקרון בעזרת מלקחיים סטריליים ומונחת על צלחת Baird Parker. דגירה במשך 24 עד 48 שעות בחום של 35-37 מעלות. טכניקה זו מאפשרת ספירה של מושבות S. aureus טיפוסיות.

QA

ניתן להשתמש בזנים ידועים כמו Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 או Proteus mirabilis ATCC 43071 כדי להעריך את האיכות של Baird Parker agar.

במקרה של זנים של S. aureus ATCC, ידוע שהוא מפחית טלוריט, והם ליפאז ולציטינאז חיובי. לכן חייבת להיות התפתחות משביעת רצון ולגדל מושבות קמורות עם מרכז שחור וגבול חסר צבע, עם הילה אטומה והילה חיצונית קלה.

מצידו, S. epidermidis צפוי להתפתח בצורה לא טובה במדיום זה, עם מושבות חום-אפור עד שחור, ללא הילה קלה.

עבור E. coli ו- P. mirabilis צפוי להיות מעכב באופן מוחלט או חלקי. במקרה של צמיחה, מושבות חומות יתפתחו ללא אזור אטום או הילה קלה.

המלצות

אין לחמם את המדיום לאחר הוספת הטלוריט וחלמון הביצה.

הכנת תחליב החלמון ותוספתו באמצע היא צעד פגיע מאוד לזיהום. יש לנקוט בזהירות רבה.

-אם קיימת נוכחות של מושבות טיפוסיות של S. aureus, יש לאשר אותה על ידי הגדרת בדיקת קרישה על הזן האמור.

אם יש תוצאות מסופקות עם קרישה, יש להתקין בדיקות אישור אחרות.

היזהר שלא לבלבל בין נוכחות מושבות S. aureus טיפוסיות למושבות שחורות לא טיפוסיות.

הפניות

1. תורמים בוויקיפדיה. אגר ביירד-פרקר. ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 15 במרץ, 2017, 19:36 UTC. ניתן להשיג ב: wikipedia.org/ נגש ב -18 בפברואר 2019.
2. מעבדות BD. ביירד פרקר אגר. 2006. זמין ב: bd.com
3. מעבדות בריטניה. בסיס אגר של ביירד פרקר. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
4. מעבדות פרנסיסקו סוריה מלגיזו. 2009. ביירד פרקר אגר. ניתן להשיג בכתובת: http://f-soria.es/Inform
5. מעבדות בריטניה. טלוריט אשלגן. 2015. ניתן להשיג ב: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. עגלת Staphylococcus aureus enterotoxigenic מסוג A, במריחות nasopharyngeal אצל מטפלי מזון. רב מד צ'ילה 2017; 145: 1559-1564
7. קנזין סטנדרטית בוונצואלה 1292-89. (1989). אוכלים. בידוד וספירה של Staphylococcus aureus. ניתן להשיג ב: sencamer.gob.ve