ביורה: רציונל, ריאגנטים, נוהל, שימושים - ביולוגיה - 2025

Biuret הוא מגיב המשמש שרשרת ארוכה נחישות חלבון שרשרת קצרה. הוא משמש במיוחד בתחום הכימיה האנליטית והשתנה כדי לחקור את ריכוז החלבונים הכוללים בסרום, בפלזמה ובשתן.

ניתן להגדיל או להוריד את ערכי החלבון בפתולוגיות מסוימות. תסמיני היפופרוטאינמיה מופיעים בדרך כלל בחולים עם מחלת כליות, בחולים שלא נותנים תזונה ובחולים עם זיהומים כרוניים.

מבנה כימי של המתחם שנוצר בתגובת Biuret חיובית. מקור: Yikrazuul / flickr

בעוד היפר-פרוטאינמיה נצפתה בפתולוגיות כמו מיאלומה נפוצה, זאבת אריתמטוזיס מערכתית, אנדוקרדיטיס חיידקית, דלקת קרום המוח החיידקית, מקרוגלובולינמיה של וולדנסטרום, בין היתר.

מצד שני, נוכחות חלבון בשתן נובעת מסינון אלבומין בכליה. זו התנהגות פתולוגית שיש ללמוד.

במובן זה, ה- Biuret מאוד שימושי, מכיוון שהוא מאפשר לכמת את נוכחותם של חלבונים בסרום, בפלזמה, בשתן, בקרב דגימות רבות אחרות.

אפילו ביורה יכולה לשמש לחקירת נוכחות וריכוז של חלבונים בדגימות שנחקרו בצורה גרועה או בדגימות בעלות הרכב לא ידוע. לכן נעשה שימוש נרחב בתחום המחקר.

בדיקת Biuret מבוססת על איתור קשרי פפטיד. הבדיקה מתבצעת במדיום אלקליין. על הדגימה להכיל לפחות שני קשרי פפטידים כדי ליצור קומפלקס סגול-סגול. המתחם נוצר על ידי איחוד הקשרים ויון הנחושת.

בָּסִיס

המגיב של ביורת מורכב מאשלגן הידרוקסיד, גופרתי קופרתי ומנתרן ואשלגן טרטראט. נתרן הידרוקסיד משמש לבסיסי המדיום, מכיוון שמצב זה חיוני לתגובה שתתרחש.

החומרים המגיבים עם חלבונים הם כופריק סולפט, ואילו נתרן טרטראט הוא הפונקציה של לא לאפשר היווצרות של הידרוקסיד נחושת, הנוטה לזרז ומפריעה לתגובה.

אם נמצאים במדגם חומרים עם קשרים לפפטיד (פוליפפטידים או חלבונים) הבדיקה תהיה חיובית.

תגובה מתפרשת כחיובית כאשר הפיתרון הופך לסגול. הצבע מיוצר על ידי היווצרות קומפלקס בין לפחות שני קשרי פפטיד שיש להם את קבוצת ה- CO-NH ואת הקטיונים הקופריים.

המתחם הסגול יכול להיווצר בשני אופנים: האחד הוא על ידי אובדן פרוטונים מקבוצות האמיד הקושרים למתכת (דפרונוטציה), והשני על ידי איחוד אלקטרוני החמצן והחנקן החופשיים ונקשרים. עם נחושת.

תגובה זו יכולה להשתנות בעוצמתה ובצבעיה בהתאם לסוג החלבון.

ניתן לבצע את הבדיקה באופן איכותי או כמותי. בצורה האיכותית זה מדווח כחיובי או שלילי. ואילו בצורה הכמותית ניתן למדוד את הריכוז בשיטה הספקטרופוטומטרית.

התגובה נקראת בין 540-560 ננומטר. עוצמת הצבע עומדת ביחס ישר לריכוז קשרי הפפטיד במדגם.

מגיבים

-20% נתרן הידרוקסיד (NaOH)

-קופתי סולפט פנטהידראט 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-טרטראט טרטראט מעורב בנתרן ואשלגן (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

יציבות ריאגנטים של ביורה

יש לשמור בקירור.

תהליך

טֶכנִיקָה

-מקם 100 μl מהמדגם או התקן שיש לנתח במבחנה.

הוסף 2 מ"ל נתרן הידרוקסיד.

מערבבים היטב.

הוסף 5 מ"ל של מגיב Biuret.

-ערבב והשאיר לנוח למשך 25 דקות בטמפרטורת החדר, לכסות ולהגן מפני אור.

-בחן בתצורה או לא בצבע ולמדוד ספקטרופוטומטרי.

עקומת כיול

אלבומין בסרום בקר יכול לשמש כסטנדרט לביצוע עקומת הכיול. מכינים ממנו ריכוזים שונים. לדוגמה 25, 50, 75, 100, 125 ו 150%.

התגובה מוגדרת עם כל הריכוזים הידועים הללו והספיגה נקראת באורך גל של 540 ננומטר. עם נתוני הריכוזים הידועים וקריאות הספיגה מתבצעת עקומת הכיול.

בכל קביעה או אצווה של דגימות מעובדות מומלץ להתקין תקן. ניתן להשתמש באלבומין בסרום שור 0.1-2 מ"ג / מ"ל ​​כתקן כיול.

המדידות נעשות על ספקטרופוטומטר במהירות של 540 ננומטר.

לינאריות נפגשת עד ריכוז של 12 גר 'לד"ל.

הַפרָעָה

חומרים המפריעים למבחן ביורט

למרות שזה לא תדיר מאוד, יש לציין כי חומרים מסוימים עשויים להפריע במהלך ביצוע בדיקה זו. לדוגמא, נוכחות אמוניה יכולה לעכב את היווצרות הצבעים.

באופן דומה, חומרים אחרים יכולים לספוג באותו אורך גל, כמו פיגמנטים מסוימים.

מצד שני, ניתן ליצור הפרעה כאשר חומר שאינו קשר הפפטיד מהווה קומפלקס עם המלח הקופרי. דוגמא: כמה פחמימות וליפידים מסוימים.

במקרה שהדגימה שיש לנתח מציגה סוג כלשהו של משקעים, יש לסנן אותה או לצנטריפוג לפני הרכבת הבדיקה.

חומרים שאינם מפריעים למבחן ביורט

הבדיקה אינה מושפעת מנוכחות:

בילירובין עד ריכוז של 20 מ"ג לד"ל.

המוגלובין עד ריכוז של 750 מ"ג לד"ל.

-קסטרן עד ריכוז של 30 גרם / ל '.

טריגליצרידים עד ריכוז של 4000 מ"ג לד"ל.

יתרון

זו שיטה פשוטה לביצוע.

זה מבחן כלכלי.

יש לו ספציפיות גבוהה לחלבונים.

הפרעות קטנות.

חסרונות

יש לו רגישות לקויה לגילוי כמויות נמוכות של חלבון. העבודה שבוצעה על ידי Fuentes et al. מאשרת כי בשיטת הבדיקה Biuret יש גבול גילוי של 1 מ"ג / מ"ל ​​חלבון וגבול כימות של 3 מ"ג / מ"ל.

עם זאת, מחקרים אחרים שנערכו באוניברסיטת אמזוניה מדווחים על ערכים נמוכים בהרבה. גבול הגילוי המדווח על ידי המחקר הוא 0.020 מ"ג / מ"ל ​​וגבול הכימות הוא 1.33 מ"ג / מ"ל.

יישומים

המגיב או הבדיקה של ביורת משמשים לקביעת חלבונים במדגמים קליניים ולא קליניים במעבדות שגרתיות ומחקריות.

פתולוגיות המתרחשות עם עלייה או ירידה ב-

בפתולוגיות רבות חשוב לקבוע את ריכוזם של החלבונים הכוללים בדגימות קליניות, העלולות להיות מוגברות או ירידות.

הם מוגבהים ב:

מיאלומה מרובה,

-זאבת אדמנתית מערכתית,

אנדוקרדיטיס חיידקי,

דלקת קרום המוח החיידקית,

מקרוגלובולינמיה של וולדנסטרום, בין היתר.

הוא מצטמצם ב:

- אי ספיקת כליות,

-אנשים עם דרגות חמורות של תת תזונה,

חולים עם זיהומים כרוניים, בין היתר.

דגימות קליניות

הדגימות הקליניות הנפוצות ביותר הן סרום, פלזמה ושתן. הערך הרגיל של חלבונים בסרום או בפלזמה הוא 6.0-8.8 גר '/ ד"ל.

ריכוז החלבונים בשתן אצל מבוגרים אינו עולה על הנתון של 150 מ"ג / 24 שעות.

יחס נורמלי בין חלבון לשתן / קריאטין של השתן

תינוקות: <0.50 מ"ג

ילדים מגיל שנתיים ומעלה: מדד: 0.20 מ"ג

מבוגרים: <0.2 מ"ג

דגימות לא קליניות

ניתן להשתמש בתגובת Biuret לסוגים רבים של דגימות לא קליניות, כמו מוצרי חלב, אנטי-נוזל או כל חומר לא ידוע שתרצו לחקור את הימצאותם של חלבונים.

הפניות

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). אפיון פיזיקלי-כימי ותכולת חלבון של תמציות נוזלים של צדפת המנגרובים (Crassostrearizophorae). כתב העת הקובני לכימיה, 26 (1), 66-74. הוחזר ב -26 ביוני 2019 מ- http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. אפיון פונקציונלי של שקד זרעי המנגו (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "ביורט." ויקיפדיה, האינציקלופדיה החופשית. 19 יוני 2019, 16:37 UTC. 26 ביוני 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. סטנדרטיזציה של שיטת Biuret לכימות חלבונים מוחלטים בסרום אנטי-טרופי רב-תכליתי המיוצר במרכז הלאומי של INS למוצרים ביולוגיים. בול - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). ניתן להשיג ב: repositorio.ins.gob.pe
5. מעבדות יקבים. סך כל החלבונים. שיטה קולורימטרית לקביעת סך החלבונים בסרום ובפלסמה. ניתן להשיג ב: wiener-lab.com.ar